響應(yīng)面法優(yōu)化南極磷蝦蛋白肽脫色工藝

劉小芳，黃岳磊,，冷凱良,3,*，李福后，丁 奇，苗鈞魁，于 源

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部極地漁業(yè)可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266071；2.江蘇海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇連云港 222005；3.青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室，海洋藥物與生物制品功能實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266200；4.青島南極維康生物科技有限公司，山東青島 266112）

南極磷蝦（Euphausia superba）是南大洋海洋浮游動(dòng)物中一個(gè)重要類群，生物量約達(dá)6.5～10 億噸，是目前資源極其豐富而開(kāi)發(fā)利用程度很低的單種可捕生物資源[1-2]。南極磷蝦含有豐富的蛋白質(zhì)[3-4]，被認(rèn)為是地球上最大的動(dòng)物性蛋白資源庫(kù)[5-6]。近年來(lái)相關(guān)研究證明，南極磷蝦蛋白肽具有良好的生理活性，包括抗氧化[7-8]、改善骨質(zhì)疏松[9-10]、降血壓[11]、緩解疲勞[12]、調(diào)節(jié)血糖[13]、改善皮膚光老化[14]等。鑒于其豐富的資源量和良好的營(yíng)養(yǎng)功能，南極磷蝦蛋白肽的生產(chǎn)開(kāi)發(fā)引起行業(yè)關(guān)注。目前關(guān)于南極磷蝦蛋白肽制備的研究集中在酶解工藝優(yōu)化方面，主要涉及最適酶的篩選、酶解條件優(yōu)化等[15-17]。然而在酶解過(guò)程中，水溶性色素也會(huì)被同時(shí)提取，導(dǎo)致獲得的南極磷蝦蛋白肽呈棕黃色甚至褐色，引起感官不適，限制產(chǎn)品的后續(xù)開(kāi)發(fā)和深度應(yīng)用。因此，針對(duì)酶解獲得的南極磷蝦蛋白肽進(jìn)行脫色處理十分必要，但目前尚未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。

海洋動(dòng)物蛋白及其水解物的脫色處理主要采用化學(xué)法和物理法。化學(xué)脫色法由于需要引入氧化型或還原型化學(xué)試劑，易引起脫色液中各組分理化性質(zhì)的改變，且存在一定程度的安全隱患；物理脫色法主要通過(guò)吸附作用達(dá)到效果，對(duì)脫色液的性質(zhì)影響較小，安全性更高[18]。活性炭吸附法是工業(yè)化生產(chǎn)中常用的物理脫色法，具有吸附效果好、對(duì)樣品影響小、成本低廉、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，目前已在魷魚(yú)皮膠原蛋白[18]、鱈魚(yú)皮膠原蛋白肽[19]、鱘魚(yú)皮膠原蛋白肽[20]、鱈魚(yú)肉酶解液[21]、魚(yú)籽多肽[22]等海洋動(dòng)物蛋白及其水解物的脫色處理中得到良好應(yīng)用。綜上，本研究采用活性炭吸附法對(duì)南極磷蝦蛋白肽進(jìn)行脫色處理，研究活性炭類型對(duì)脫色效果的影響，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)活性炭用量、pH、脫色溫度、脫色時(shí)間等工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，旨在為優(yōu)質(zhì)南極磷蝦蛋白肽產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

脫脂南極磷蝦粉 青島南極維康生物科技有限公司；堿性蛋白酶（Alcalase 2.4 L，200000 U/mL）丹麥諾維信生物技術(shù)有限公司；粉末活性炭、顆粒活性炭 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；Lowry 法蛋白濃度測(cè)定試劑盒 北京索萊寶科技有限公司；鹽酸分析純，西隴科學(xué)股份有限公司；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氫氧化鈉等試劑 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

SHA-B 型恒溫振蕩器、HH-4 型數(shù)顯恒溫水浴鍋 常州智博瑞儀器制造有限公司；ST3100 型pH計(jì) 奧豪斯儀器（常州）有限公司；LXJ-IIB 型離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠；Neofuge 15R 型高速冷凍離心機(jī) 上海力申科學(xué)儀器有限公司；CTFD-10P 型冷凍干燥機(jī) 青島永合創(chuàng)信電子科技有限公司；UV1-102II 型紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海天美科學(xué)儀器有限公司；L-8900 型全自動(dòng)氨基酸分析儀 日立科學(xué)儀器（北京）有限公司；LC-20AD 型液相色譜儀日本島津株式會(huì)社；BSA224S-CW 型電子分析天平賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 南極磷蝦蛋白肽脫色處理工藝 采用堿性蛋白酶酶解制備南極磷蝦蛋白肽[16,23]：稱取適量脫脂南極磷蝦粉，按照料液比1:6 （g/mL）添加pH7.5 的0.05 mol/L 磷酸鹽緩沖液，混勻，根據(jù)脫脂南極磷蝦粉質(zhì)量加入2% （v/m）的堿性蛋白酶，55 ℃酶解4 h后于95 ℃加熱滅酶20 min，冷卻至室溫，5000 r/min離心20 min，收集上清液，即得南極磷蝦蛋白肽溶液。獲得的南極磷蝦蛋白肽溶液在相應(yīng)實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行脫色處理后，冷卻至室溫，8000 r/min 離心15 min，收集上清液，測(cè)定相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.2.2 活性炭類型的篩選 參考文獻(xiàn)方法對(duì)比研究不同類型活性炭在南極磷蝦蛋白肽脫色處理中的效果差異[18,22,24-25]。在溶液pH2.0、4.0、6.0 條件下，分別添加2.0% （m/v）、5.0% （m/v）、10.0% （m/v）的粉末活性炭或顆粒活性炭，50 ℃水浴振蕩脫色處理1.0 h，冷卻至室溫，8000 r/min 離心15 min，收集上清液，以脫色率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定適宜采用的活性炭類型。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 進(jìn)行活性炭用量、pH、脫色溫度、脫色時(shí)間的單因素優(yōu)化：固定pH6.0、脫色溫度50 ℃，脫色時(shí)間1.0 h，考察活性炭用量0.5%、1.0%、2.0%、3.0%、5.0% （m/v）對(duì)脫色效果的影響；固定活性炭用量2.0% （m/v）、脫色溫度50 ℃、脫色時(shí)間1.0 h，考察pH1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 對(duì)脫色效果的影響；固定活性炭用量2.0% （m/v）、pH6.0、脫色時(shí)間1.0 h，考察脫色溫度30、40、50、60、70 ℃對(duì)脫色效果的影響；固定活性炭用量2.0% （m/v）、pH6.0、脫色溫度50 ℃，考察脫色時(shí)間0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h 對(duì)脫色效果的影響；以脫色率和蛋白保留率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定各單因素的最佳條件。

1.2.4 響應(yīng)面試驗(yàn) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法對(duì)活性炭用量、pH、脫色時(shí)間進(jìn)行三因素三水平設(shè)計(jì)，見(jiàn)表1。以脫色率為響應(yīng)值，采用Design Expert V8.0.6 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，確定最佳脫色工藝條件。

表1 Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平Table 1 Experimental factor levels in the Box-Behnken design

1.2.5 脫色率的測(cè)定 將南極磷蝦蛋白肽溶液在380～700 nm 光譜范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定多肽溶液中色素的特征吸收波長(zhǎng)。在特定吸收波長(zhǎng)下測(cè)定多肽溶液脫色前后吸光值，并按照以下公式計(jì)算脫色率[20,22]：

1.2.6 蛋白保留率的測(cè)定 按試劑盒說(shuō)明書(shū)的規(guī)定測(cè)定脫色處理前后溶液中的蛋白含量。蛋白保留率按照以下公式計(jì)算[20,22]：

1.2.7 脫色處理前后南極磷蝦蛋白肽的組成分析按照響應(yīng)面試驗(yàn)確定的最優(yōu)工藝條件對(duì)南極磷蝦蛋白肽溶液進(jìn)行脫色處理，處理前后的蛋白肽溶液分別經(jīng)真空冷凍干燥后進(jìn)行組成分析：蛋白質(zhì)含量按照GB 5009.5-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》的規(guī)定執(zhí)行；灰分含量按照GB 5009.4-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測(cè)定》的規(guī)定執(zhí)行；鹽分含量按照SC/T 3011-2001《水產(chǎn)品中鹽分的測(cè)定》的規(guī)定執(zhí)行；水分含量按照GB 5009.3-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》的規(guī)定執(zhí)行；氨基酸組成按照GB 5009.124-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測(cè)定》的規(guī)定執(zhí)行；分子量分布按照GB 31645-2018《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 膠原蛋白肽》中附錄A 的規(guī)定執(zhí)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差”的形式表示，采用IBM SPSS 20.0、Excel 2016、Origin 2018、Design Expert V8.0.6 等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和圖表繪制。采用獨(dú)立樣品t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，采用單因素方差分析進(jìn)行組間多重比較，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 南極磷蝦蛋白肽溶液色素特征吸收波長(zhǎng)

南極磷蝦蛋白肽溶液在380～700 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收光譜見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，溶液在400 nm 波長(zhǎng)處具有明顯的吸收峰，因此，確定南極磷蝦蛋白肽溶液中色素的特征吸收波長(zhǎng)為400 nm。

圖1 南極磷蝦蛋白肽溶液的可見(jiàn)吸光光譜Fig.1 The absorption spectrum of the Antarctic krill peptides solution

2.2 活性炭類型的篩選確定

不同類型活性炭對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色效果的影響見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，粉末活性炭和顆粒活性炭都能達(dá)到一定的脫色效果，但在相同的活性炭用量和pH 條件下，粉末活性炭的脫色效果均極顯著優(yōu)于顆粒活性炭（P＜0.01），推測(cè)這跟粉末活性炭與色素接觸時(shí)的比表面積更大、不易達(dá)到吸附平衡有關(guān)，該研究結(jié)果與已有報(bào)道保持一致[18,24,26]。因此，確定粉末活性炭為本研究中最適宜采用的吸附劑。

表2 不同類型活性炭對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色率的影響Table 2 Effect of different types of activated carbon on decolorization rate of Antarctic krill peptides

2.3 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

活性炭用量對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色效果的影響見(jiàn)圖2。活性炭用量在0.5%～5.0%范圍時(shí)，脫色率隨著活性炭用量的增加而逐漸升高，活性炭用量對(duì)樣品脫色效果影響顯著（P＜0.05）。各實(shí)驗(yàn)組的蛋白保留率隨著活性炭用量的增加而逐漸降低，當(dāng)活性炭用量在0.5%～3.0%范圍時(shí)，蛋白保留率均在90%以上；當(dāng)活性炭用量增加至5.0%時(shí)，蛋白保留率下降至83.91%±1.38%。這可能是因?yàn)榉勰┗钚蕴烤哂卸嗫捉Y(jié)構(gòu)，可以有效吸附色素分子，適當(dāng)?shù)卦黾踊钚蕴坑昧浚軌蛴行岣呙撋Ч鸞18,22,27]，但當(dāng)活性炭用量過(guò)大時(shí)，被吸附損失的蛋白肽也會(huì)顯著增多，導(dǎo)致蛋白保留率明顯降低[20,24,27]。因此，確定活性炭用量3.0%為最佳實(shí)驗(yàn)條件。

圖2 活性炭用量對(duì)脫色率和蛋白保留率的影響Fig.2 Influence of dosage of activated carbon on decolorization rate and protein retention rate

pH 對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色效果的影響見(jiàn)圖3。pH 在1.0～2.0 范圍時(shí)，脫色率隨著pH 的增加而有所提高；當(dāng)pH 為2.0 時(shí)，脫色率達(dá)到最高；而后隨著pH的增加，脫色率不斷下降；pH 對(duì)樣品脫色效果影響顯著（P＜0.05）。粉末活性炭在酸性條件下呈現(xiàn)更強(qiáng)的吸附色素能力，這是因?yàn)榛钚蕴课缴氐倪^(guò)程需要H+的參與，適當(dāng)提高樣品中H+的濃度，可以提高脫色率，這與已有的研究報(bào)道結(jié)果一致[18-22,25,27-28]。在pH1.0～6.0 范圍內(nèi)進(jìn)行脫色處理，各實(shí)驗(yàn)組的蛋白保留率均在90%以上，無(wú)顯著差異（P＞0.05）。因此，確定pH2.0 為最佳實(shí)驗(yàn)條件。

圖3 pH 對(duì)脫色率和蛋白保留率的影響Fig.3 Influence of pH on decolorization rate and protein retention rate

脫色溫度對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色效果的影響見(jiàn)圖4。脫色溫度在30～50 ℃范圍時(shí)，脫色率隨著脫色溫度的升高而有所提高；脫色溫度在50～60 ℃范圍時(shí)，脫色率增幅較小，趨于穩(wěn)定；當(dāng)脫色溫度大于60 ℃后，脫色率則出現(xiàn)下降。在一定溫度范圍內(nèi)，脫色溫度的升高可使樣品體系中的熱運(yùn)動(dòng)加劇，增加了活性炭和色素分子間的碰撞結(jié)合機(jī)率，脫色效果得到提高；當(dāng)脫色溫度繼續(xù)升高時(shí)，活性炭與色素分子間的吸附和解析達(dá)到平衡，脫色效果趨于穩(wěn)定；但當(dāng)脫色溫度超過(guò)一定值后，活性炭與色素分子的解析機(jī)率明顯增加，脫色效果出現(xiàn)下降[20,22,29-30]。在30～70 ℃溫度范圍內(nèi)進(jìn)行脫色處理，各實(shí)驗(yàn)組的蛋白保留率均在90%以上，無(wú)顯著差異（P＞0.05）。考慮到酶解時(shí)采用的處理溫度為55 ℃，在實(shí)際生產(chǎn)中酶解和脫色工藝切換時(shí)料液會(huì)有小幅度的降溫，而再次加熱或冷卻料液會(huì)增加生產(chǎn)成本，因此確定脫色溫度50 ℃為最佳實(shí)驗(yàn)條件，在響應(yīng)面優(yōu)化時(shí)也將脫色溫度固定為50 ℃不再作進(jìn)一步考察。

圖4 脫色溫度對(duì)脫色率和蛋白保留率的影響Fig.4 Influence of decolorization temperature on decolorization rate and protein retention rate

脫色時(shí)間對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色效果的影響見(jiàn)圖5。在0.5～1.0 h 的脫色時(shí)間范圍時(shí)，隨著時(shí)間增加，脫色率不斷提高；當(dāng)脫色時(shí)間為1.0 h 時(shí)，脫色率達(dá)到最高；而后隨著脫色時(shí)間的延長(zhǎng)，脫色率有所下降。延長(zhǎng)脫色時(shí)間，有助于活性炭與色素分子的充分接觸，從而提高吸附效果；但處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，也增加了活性炭與色素分子解析的機(jī)率，脫色效果降低[19,22,28]。在0.5～1.5 h 時(shí)間范圍內(nèi)進(jìn)行脫色處理，各實(shí)驗(yàn)組的蛋白保留率均在90%以上，無(wú)顯著差異（P＞0.05）；而后隨著脫色時(shí)間的延長(zhǎng)，蛋白保留率不斷降低。綜合考慮脫色效果和蛋白保留率，確定脫色時(shí)間1.0 h為最佳實(shí)驗(yàn)條件。

圖5 脫色時(shí)間對(duì)脫色率和蛋白保留率的影響Fig.5 Influence of decolorization time on decolorization rate and protein retention rate

2.4 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，固定脫色溫度50 ℃，依據(jù)Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，對(duì)活性炭用量（A）、pH（B）、脫色時(shí)間（C）進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。對(duì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多元回歸擬合，得到脫色率（Y）與自變量A、B、C 的回歸方程為：Y=77.45+9.24A-3.66B+0.13C+0.34AB+0.79AC+0.32BC-1.89A2-2.80B2-1.88C2。

表3 Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Box-Behnken experimental design and result

對(duì)模型擬合結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4 可知，模型項(xiàng)P＜0.0001，表明該回歸模型極顯著，失擬項(xiàng)P=0.4656＞0.05，表明失擬項(xiàng)不顯著，說(shuō)明該模型與數(shù)據(jù)擬合程度較高。在本實(shí)驗(yàn)中，A、B、A2、B2、C2對(duì)脫色率影響極顯著（P＜0.01），C 與交互項(xiàng)對(duì)脫色率影響不顯著（P＞0.05）。由F值可知，各因素對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色率的影響程度為：A＞B＞C，即活性炭用量＞pH＞脫色時(shí)間。此外，該回歸模型的R2=0.9956，且R2Adj=0.9898，表明該模型擬合度和可信度均較高。以上分析表明，該模型可應(yīng)用于南極磷蝦蛋白肽脫色條件的分析和預(yù)測(cè)。

表4 回歸模型方差分析Table 4 Variance analysis of regression model

活性炭用量、pH、脫色時(shí)間3 個(gè)因素之間交互作用對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色率的影響見(jiàn)圖6、圖7和圖8。活性炭用量與pH、活性炭用量與脫色時(shí)間、pH 與脫色時(shí)間兩兩之間的交互作用對(duì)脫色率影響均不顯著，這與方差分析結(jié)果一致。響應(yīng)面圖中曲面的變化幅度可直接反映各因素對(duì)響應(yīng)值的影響程度[17]，由圖6、圖7 可知，隨著活性炭用量的增加，脫色率逐漸增加，增幅明顯；由圖6、圖8 可知，隨著pH 的增加，脫色率呈先增加后減小趨勢(shì)，變化幅度較小；由圖7、圖8 可知，隨著脫色時(shí)間的增加，脫色率呈先增加后減小趨勢(shì)，變化幅度較小；綜上可知，活性炭用量對(duì)脫色率的影響程度要大于pH 和脫色時(shí)間，這也與方差分析結(jié)果一致。

圖6 活性炭用量與pH 的交互作用對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色率的影響Fig.6 Interaction effect of dosage of activated carbon and pH on decolorization rate of Antarctic krill peptides

圖7 活性炭用量與脫色時(shí)間的交互作用對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色率的影響Fig.7 Interaction effect of dosage of activated carbon and decolorization time on decolorization rate of Antarctic krill peptides

圖8 pH 與脫色時(shí)間的交互作用對(duì)南極磷蝦蛋白肽脫色率的影響Fig.8 Interaction effect of pH and decolorization time on decolorization rate of Antarctic krill peptides

經(jīng)Design Expert V8.0.6 軟件分析得到南極磷蝦蛋白肽脫色的最佳條件為：活性炭用量4.0%、pH1.42、脫色時(shí)間1.1 h，在此條件下模型預(yù)測(cè)的脫色率為85.86%。為方便實(shí)際操作，將最佳脫色條件調(diào)整為：活性炭用量4.0%、pH1.5、脫色時(shí)間1.0 h，在此條件下進(jìn)行三次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，脫色率為82.19%±0.20%，與理論值接近，證明該模型可靠。同時(shí)，在最佳脫色工藝條件下，蛋白保留率為90.93%±2.28%，表明優(yōu)化后的工藝可行。

2.5 脫色前后南極磷蝦蛋白肽的組成分析

脫色處理前后南極磷蝦蛋白肽的組成分析結(jié)果見(jiàn)表5、表6。脫色處理后樣品的蛋白質(zhì)含量由80.57%±0.40%降低至71.18%±0.19%（P＜0.01），而鹽分、灰分含量極顯著提高（P＜0.01），這可能與脫色處理導(dǎo)致的蛋白損失、調(diào)節(jié)最佳工藝條件時(shí)酸堿的引入以及脫色吸附劑殘留等原因有關(guān)。脫色處理前后南極磷蝦蛋白肽的必需氨基酸含量分別占總氨基酸含量的39.29%±0.12%和39.41%±0.34%，必需氨基酸與非必需氨基酸的比值分別為64.72%±0.34%和65.05%±0.92%；脫色處理前后南極磷蝦蛋白肽的分子量均主要分布在189～6500 Da 范圍，占比分別為86.06%±1.16%和86.79%±1.19%；綜上可知，采用優(yōu)化工藝對(duì)南極磷蝦蛋白肽進(jìn)行脫色處理，樣品氨基酸組成中必需氨基酸與非必需氨基酸的占比以及樣品的分子量分布均未發(fā)生顯著變化（P＞0.05）。脫色后獲得的南極磷蝦蛋白肽，氨基酸組成基本符合聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織規(guī)定的優(yōu)質(zhì)蛋白標(biāo)準(zhǔn)（必需氨基酸占氨基酸總量的40%，必需氨基酸與非必需氨基酸的比值為60%），分子量分布符合生物活性肽分子量分布范圍[31]，具有良好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。需要關(guān)注的是，脫色后獲得的南極磷蝦蛋白肽，色澤得到改善，但仍存在鹽分含量較高的問(wèn)題，這不僅會(huì)影響蛋白肽的口感和功能，也會(huì)給消費(fèi)者健康帶來(lái)一定的潛在風(fēng)險(xiǎn)[23,32]，如何去除樣品中過(guò)量的鹽分應(yīng)進(jìn)一步研究。

表5 脫色前后南極磷蝦蛋白肽的組成Table 5 The compositions of Antarctic krill peptides before and after decolorization

表6 脫色前后南極磷蝦蛋白肽的分子量分布Table 6 The molecular weight distribution of Antarctic krill peptides before and after decolorization

3 結(jié)論

活性炭吸附法能夠有效實(shí)現(xiàn)南極磷蝦蛋白肽中色素的脫除，粉末活性炭的脫色效果優(yōu)于顆粒活性炭；當(dāng)脫色溫度為50 ℃時(shí)，經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化得到最佳脫色工藝條件為：活性炭用量4.0%、pH1.5、脫色時(shí)間1.0 h；在此條件下，脫色率達(dá)到82.19%±0.20%。采用優(yōu)化工藝脫色處理后，樣品氨基酸組成中必需氨基酸與非必需氨基酸的占比以及樣品的分子量分布均無(wú)明顯變化。考慮到脫色后獲得的南極磷蝦蛋白肽鹽分含量較高，后續(xù)研究需關(guān)注樣品的脫鹽處理，以進(jìn)一步提升產(chǎn)品品質(zhì)。本研究對(duì)于南極磷蝦蛋白產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和規(guī)模化生產(chǎn)具有重要參考價(jià)值。