Xpert MTB/RIF 檢測技術(shù)在肺結(jié)核實驗室診斷中應(yīng)用價值探析

周艷艷

（河南省南陽市第六人民醫(yī)院檢驗科 南陽 473000）

肺結(jié)核為常見呼吸疾病，是由結(jié)核分枝桿菌感染所致，可引起咳嗽、咯血、胸痛及乏力等一系列癥狀。肺結(jié)核具有較強傳染性，治療不及時不僅會持續(xù)損害患者肺功能，還可增加疾病傳播風(fēng)險[1～2]。臨床對于肺結(jié)核的防控管理較為嚴(yán)格，對于確診患者需及時開展抗結(jié)核治療，并做好日常防護(hù)工作，避免疾病傳染造成的重大社會經(jīng)濟(jì)損失。但治療及防控工作開展的前提在于早期明確診斷，故尋找準(zhǔn)確度高、檢測便捷的早期篩查方式尤為重要。臨床診斷肺結(jié)核的常規(guī)方式為痰涂片抗酸染色，具有操作簡單、取材方便、出結(jié)果快、技術(shù)要求低等優(yōu)勢，無須需特殊儀器，當(dāng)天檢測即可出結(jié)果，適用于臨床早期篩查[3～4]。但該方法陽性率偏低，存在較高漏診風(fēng)險。結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥檢測（Xpert MTB/RIF）則為新一代結(jié)核快速診斷技術(shù)，以全自動半巢氏實時PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)，以特定的基因為靶基因，能夠?qū)崿F(xiàn)對結(jié)核病的快速診斷[5～6]。但關(guān)于Xpert MTB/RIF 在肺結(jié)核診斷中的具體價值仍需進(jìn)一步明確。鑒于此，本研究分析Xpert MTB/RIF 檢測技術(shù)在肺結(jié)核實驗室診斷中的應(yīng)用價值。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2020 年1 月至2022 年1 月收治的118 例疑似肺結(jié)核患者作為研究對象，其中男67 例，女51 例；年齡39～73 歲，平均年齡（52.39±5.28）歲；體質(zhì)量指數(shù) 19～28 kg/m2，平均體質(zhì)量指數(shù)（24.39±1.48）kg/m2；臨床癥狀持續(xù)時間2～6 周，平均臨床癥狀持續(xù)時間（3.58±0.42）周；文化程度：高中及以上40 例，初中及以下78 例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)（編號：NYLYLL2022036）。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) （1）納入標(biāo)準(zhǔn)：伴有發(fā)熱、持續(xù)咳嗽或盜汗等癥狀超過2 周；胸部X 線檢查示肺部存在異常陰影；精神狀態(tài)正常；均開展痰培養(yǎng)、Xpert MTB/RIF、痰涂片染色鏡檢法檢測；臨床資料完整；患者及家屬簽署知情同意書。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：存在結(jié)核病史；合并惡性腫瘤；有嚴(yán)重肝腎衰竭；明確存在其他肺部疾病；處于妊娠或哺乳期。

1.3 檢測方法 所有疑似患者均開展痰培養(yǎng)、痰涂片抗酸染色、Xpert MTB/RIF 檢測，均于清晨漱口后，用力咳出深部痰液，將其收集于無菌杯內(nèi)，及時送檢。（1）痰培養(yǎng)：嚴(yán)格參照《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊》進(jìn)行痰培養(yǎng)操作，陽性質(zhì)控菌株為卡介菌株D2BP302S11，將大腸埃希菌ATCC25922 作為陰性質(zhì)控，質(zhì)控有效前提下，長期觀察可見菌落生長，且經(jīng)抗菌染色法驗證為陽性。（2）痰涂片抗酸染色法：于載玻片上滴加1 滴無菌蒸餾水，將待染色菌挑選完成后置于無菌蒸餾水中，涂布均勻后，自然風(fēng)干涂片并加熱固定；于涂片上放置玻片濾紙，滴加1 滴石碳酸復(fù)紅染液，置于酒精燈上加熱，冒蒸汽后移開火焰靜置5 min，去除濾紙，自來水沖洗，一邊搖動一邊開展脫色處理，至無染色液浮出，確保完全脫色；再以自來水沖洗，滴加復(fù)染液進(jìn)行20～30 s 復(fù)染，清洗后風(fēng)干，油鏡下觀察，分枝桿菌顏色為紅色，并以大腸埃希菌為對照，大腸埃希菌為藍(lán)色。（3）Xpert MTB/RIF 檢測：先將痰液標(biāo)本按要求配比加入Xpert MTB/RIF 樣品處理液中，渦旋振蕩器上振搖20 s，靜置15 min，之后以無菌吸管吸取2 ml 處理好的標(biāo)本，將其緩慢加入Xpert MTB/RIF 試劑盒內(nèi)，放入儀器內(nèi)開展檢查，經(jīng)2 h 反應(yīng)結(jié)束后，由儀器自動生成檢測報告。結(jié)果判斷：若循環(huán)閾值（Ct）值≤38 則可判斷為陽性，并可參考Ct值半定量結(jié)核分枝桿菌，若Ct 值不足16 為高含量，16～22 則為中含量，若處于22～28 則為低含量，超過28 則為極低含量；利福平耐藥性檢測則基于結(jié)核分枝桿菌特異性分子信標(biāo)早期Ct 值和晚期Ct 值之差（△Ct 值），當(dāng)△Ct 值超過3.5 則為利福平耐藥，反之則為利福平敏感；在結(jié)核分枝桿菌陽性的情況下方進(jìn)行利福平檢測。質(zhì)量控制：所有標(biāo)本采集及檢測操作均需按照規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)開展，其中痰涂片抗酸染色需進(jìn)行盲法復(fù)檢及室內(nèi)質(zhì)控；Xpert MTB/RIF 檢測需定期對每個檢測匣開展樣品處理質(zhì)量控制及探針質(zhì)量控制，確保檢測系統(tǒng)合格。最終結(jié)果以痰培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，分析兩種檢測方法的診斷效能。

1.4 觀察指標(biāo) （1）肺結(jié)核檢出情況：以痰培養(yǎng)為最終金標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF 檢測法肺結(jié)核檢出的情況。（2）診斷價值：以痰培養(yǎng)為最終金標(biāo)準(zhǔn)，分析痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF 檢測診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值，靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%，特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%，準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）/（真陽性+真陰性+假陽性+假陰性）×100%，陽性預(yù)測值=真陽性/（真陽性+假陽性）×100%，陰性預(yù)測值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。（3）一致性分析：采用kappa 檢驗驗證痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF 檢測診斷肺結(jié)核與痰培養(yǎng)的一致性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0 軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以%表達(dá)，行χ2檢驗，計量資料以（）表示，采用t檢驗；一致性采用kappa 檢驗（kappa＞0.75 表明一致性極好，0.4～0.75 表明一致性尚可，＜0.4 表明一致性差）。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺結(jié)核檢出情況 118 例疑似患者痰培養(yǎng)檢出92 例，其中痰涂片抗酸染色法檢出80 例，檢出率為 86.96%（80/92）；Xpert MTB/RIF 檢測檢出 90 例，檢出率為 97.83%（90/92）；Xpert MTB/RIF 檢測檢出率高于痰涂片抗酸染色法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.731，P=0.005）。

2.2 診斷價值 Xpert MTB/RIF 檢測診斷肺結(jié)核的 靈 敏 度 [96.74 %（89/92）]、 準(zhǔn) 確 度 [96.61%（114/118）]及陰性預(yù)測值[89.29%（25/28）]高于痰涂片抗酸染色法 [84.78%（78/92）、86.44%（102/118）、63.16%（24/38）]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；kappa 檢驗顯示，Xpert MTB/RIF 檢測與痰培養(yǎng)一致性極好（kappa 值 =0.904，P=0.000）；痰涂片抗酸染色法與痰培養(yǎng)一致性尚可（kappa 值=0.661，P=0.000）。見表 1、表 2。

表1 肺結(jié)核檢出情況比較（例）

表2 診斷一致性比較[%（例/ 例）]

3 討論

正常情況下結(jié)核分枝桿菌入侵后會被機體免疫系統(tǒng)消滅，若機體免疫力欠佳，結(jié)核分枝桿菌侵入機體后則難以被免疫系統(tǒng)清除，會于肺部大量繁殖，進(jìn)而引起肺結(jié)核，損傷肺組織并降低肺部正常功能，誘發(fā)咳嗽、咳痰、咯血等癥狀，甚至出現(xiàn)大咯血等嚴(yán)重并發(fā)癥，威脅生命[7～8]。同時，肺結(jié)核具有較強傳染性，結(jié)核分枝桿菌耐干燥、酸、冷等能力較強，即使處于陽光直射下，痰液內(nèi)該病菌也需2～7 h 才會被殺死，疾病發(fā)生后若控制不及時，會傳染與患者有過直接或間接接觸的其他人群，造成較大社會經(jīng)濟(jì)損失[9～10]。

痰培養(yǎng)為當(dāng)前肺結(jié)核診斷金標(biāo)準(zhǔn)，通過采集標(biāo)本開展培養(yǎng)能夠準(zhǔn)確鑒別疾病，但操作較為復(fù)雜，周期較長，在疾病早期篩查中存在一定局限性，仍需尋找更為簡便、準(zhǔn)確的早期篩查方式[11～12]。痰涂片抗酸染色在早期篩查中應(yīng)用較為廣泛，具有操作簡單、取材便捷等優(yōu)點，由于結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁內(nèi)脂質(zhì)含量較高，充分包裹于肽聚糖外圍，使得該病菌著色困難，需長時間加熱、染色方可著色，且病菌內(nèi)分枝菌酸結(jié)合染料后難以被酸性脫色劑脫色，故通過染色后結(jié)核分枝桿菌可呈紅色，區(qū)別于其他細(xì)菌及背景的藍(lán)色，便于疾病鑒別診斷。但痰涂片抗酸染色易受操作者主觀性、操作過程中誤差等因素影響，存在較高漏診風(fēng)險。本研究結(jié)果顯示，Xpert MTB/RIF 檢測診斷肺結(jié)核的靈敏度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測值高于痰涂片抗酸染色法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；kappa 檢驗顯示，Xpert MTB/RIF 檢測與痰培養(yǎng)一致性極好（kappa 值 =0.904，P=0.000）；痰涂片抗酸染色法與痰培養(yǎng)一致性尚可（kappa 值=0.661，P=0.000）。提示Xpert MTB/RIF 檢測診斷肺結(jié)核檢出率較高，能夠提高診斷靈敏度、準(zhǔn)確度，便于肺結(jié)核早期治療及防控。究其原因為Xpert MTB/RIF 檢測為新一代檢測技術(shù)，是一個將定量PCR 擴(kuò)增、樣品準(zhǔn)備及熒光檢測等集為一體的核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)，具有操作簡單、檢測時間短、核酸污染低等特點[13～14]。該方法在檢測過程中以全自動半巢式實時PCR 技術(shù)作為基礎(chǔ)，檢測重點為肺結(jié)核分枝桿菌DNA，檢測過程中可排除非結(jié)核分枝桿菌的干擾，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。針對病菌RopB 基因81bp 利福平耐藥決定區(qū)設(shè)計引物、探針，通過檢測其是否出現(xiàn)突變，2 h 內(nèi)即可獲得檢測報告，從而判斷患者是否患有結(jié)核病，明確對利福平是否發(fā)生耐藥性，為臨床診治提供可靠指導(dǎo)。相較于常規(guī)檢查，Xpert MTB/RIF 檢測在整個檢測過程中可將樣品所需的試劑一次性提前裝入其中，避免操作過程中的污染，確保試驗結(jié)果的精準(zhǔn)性，且對于結(jié)核分枝桿菌的臨床檢出閾值偏低，僅需131 CFU/ml 即可獲得陽性結(jié)果，故診斷效能更高，值得廣泛推廣[15]。

綜上所述，Xpert MTB/RIF 檢測在肺結(jié)核診斷中的靈敏度、準(zhǔn)確度較痰涂片抗酸染色更高，與痰培養(yǎng)結(jié)果存在較高的一致性，且操作簡單、快速，能夠同時對利福平耐藥性進(jìn)行檢查，更好協(xié)助臨床早期疾病診療及預(yù)防隔離。