峨?yún)⑼庠葱杂泻ξ镔|(zhì)分析

王高峰

（貴州工程職業(yè)學(xué)院， 貴州 銅仁565200）

峨?yún)⑹莻阈慰贫雲(yún)僦参锒雲(yún)nthriscus sylvestris（L）Hoffm.的干燥根，俗稱(chēng)田七、金山田七等，分布于四川、重慶、云南等地，性甘，味辛、微苦，入脾、胃、肺三經(jīng)，具有補(bǔ)中益氣、補(bǔ)肺平喘、祛瘀生新之功效，可用于治療跌打損傷、脾虛腹脹、四肢乏力、肺虛咳喘等癥［1］。峨?yún)⒅泻心局仡?lèi)、黃酮類(lèi)、苯丙素類(lèi)等多達(dá)百余種化合物［2?3］，其提取物對(duì)于多種腫瘤細(xì)胞均有抑制作用［4?8］。峨?yún)⒅兄亟饘偌坝泻υ亍⑥r(nóng)藥殘留量和二氧化硫殘留量的監(jiān)測(cè)對(duì)確保峨?yún)踩哂惺种匾囊饬x，并可為峨?yún)⒌耐庠葱杂泻ξ镔|(zhì)限量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

1 材料

ICAP?Q 電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國(guó)Thermo 公司）；氣相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）；ST107?1RW 中藥二氧化硫測(cè)定儀（濟(jì)南盛泰電子科技有限公司）；AB204S 型天平（瑞士梅特勒托利多公司）；MARS6 型微波消解儀（美國(guó)CEM 公司）；SDLA?B?1101 型超純水機(jī)（重慶圣德利醫(yī)療器械研究有限公司）。

鉛（Pb）、鎘（Cd）、汞（Hg）、銅（Cu）、鍺（Ge）對(duì)照品貯備液質(zhì)量濃度均為1 000 μg／mL（美國(guó)Inorganic Ventures 公司，批號(hào)分別為P2?PB678290、M2?CD659870、N2?HG669550AA、N2?CU664921、P2?GE675320AA ），砷（As）、金（Au）、銦（In）、鉍（Bi）的對(duì)照品貯備液質(zhì)量濃度均為1 000 μg／mL（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，批號(hào)分別為GSB04?1714?2004、GSB04?1715?2004、GSB04?1731?2004、GSB04?1719?2004）；農(nóng)藥對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度均為1 000 μg／mL（中國(guó)計(jì)量研究院）；乙腈、乙酸乙酯（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；硝酸（臺(tái)灣聯(lián)仕電子化學(xué)材料股份有限公司）；鹽酸、過(guò)氧化氫溶液（成都市科龍化工試劑廠）；水為超純水。

本實(shí)驗(yàn)所用峨?yún)①?gòu)自四川省、云南省、重慶市等地，均由重慶三峽學(xué)院周濃教授鑒定為峨?yún)nthriscus sylvestris（L）Hoffm.的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 重金屬及有害元素含量測(cè)定

2.1.1 ICP?MS 條件 功率1.55 kW；模擬電壓－1.775 kV；進(jìn)樣泵轉(zhuǎn)速40 r／min；冷卻氣體積流量14 L／min；霧化氣體積流量1.07 mL／min；采樣深度5 mm；連續(xù)采樣次數(shù)3次；跳峰采集模式。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 分別精密量取Pb、As、Cd、Hg、Cu 單元素對(duì)照品溶液適量，用10% 硝酸溶液稀釋制成每1 mL分別含Pb、As、Cd、Hg、Cu 1、0.5、1、1、10 μg 的溶液，即得。精密量取Pb、As、Cd、Cu 對(duì)照品貯備液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成每l mL 含Pb、As 1、5、10、20、40 ng，含Cd 0.5、2.5、5、10、20 ng，含Cu 50、100、200、400、500 ng 混合溶液。另精密量取Hg 對(duì)照品貯備液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成每l mL 分別含Hg 0.2、0.5、1、1.5、2 ng 溶液，臨用配制。以10% 硝酸溶液作為空白溶液。精密量取Ge、In、Bi 對(duì)照品溶液各0.1 mL于同一100 mL量瓶中，用水稀釋成1 μg／mL 的混合溶液，即得內(nèi)標(biāo)溶液。

2.1.3 供試品溶液制備 取峨?yún)悠酚?0 ℃干燥2 h，粉碎成粗粉，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸5 mL，混勻，蓋上內(nèi)蓋，旋緊外套，置微波消解爐中進(jìn)行消解，消解程序?yàn)橄冉?jīng)15 min 由室溫升溫至120 ℃，保持5 min，然后以4.5 ℃／min 升溫至150 ℃，保持7 min，再以4.5 ℃／min 升溫至180 ℃，保持15 min。消解完全后，用水轉(zhuǎn)移至50 mL 量瓶中，加入Au 單元素溶液（1 μg／mL）各200 μL，并用水稀釋至刻度，搖勻，即得。同法制備試劑空白溶液。

2.1.4 測(cè)定法 測(cè)定時(shí)選取的同位素為63Cu、75As、114Cd、202Hg和208Pb，其中63Cu、75As 以72Ge 作為內(nèi)標(biāo)，114Cd 以115In作為內(nèi)標(biāo)，202Hg、208Pb 以209Bi 作為內(nèi)標(biāo)。

2.1.5 方法學(xué)考察 線性關(guān)系及加樣回收率試驗(yàn)：將“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣分析，得各元素線性關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表1，相關(guān)系數(shù)為0.999 0～0.999 9，各元素的平均加樣回收率為86.71%～97.90%，RSD 為0.90%～3.10%。

精密度與重復(fù)性試驗(yàn)：取Pb、Cd、Hg、As、Cu 對(duì)照品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)條件下進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)測(cè)定6次，RSD 分別為0.82%、0.93%、1.20%、0.91%、0.64%，結(jié)果表明儀器精密度符合要求。取樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，平行6份，計(jì)算Pb、Cd、Hg、As、Cu 5 種元素含 量 RSD 分別為0.93%、0.82%、1.10%、0.83%、0.70%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.6 含量測(cè)定 對(duì)不同產(chǎn)地的6 份峨?yún)⒅? 種重金屬元素進(jìn)行測(cè)定，平行3份，結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)《中醫(yī)藥?中藥材重金屬限量》ISO 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)［9］的限量規(guī)定發(fā)現(xiàn)，所有產(chǎn)地的重金屬及有害元素均符合要求。同時(shí)與2020 年版《中國(guó)藥典》部分藥材限量值標(biāo)準(zhǔn)［10］比較發(fā)現(xiàn)，樣品S4（四川峨眉）、S6（云南景洪）中 的Cd 含量分別為0.33、0.51 mg／kg，超出限值的10%和70%，Pb、Hg、As、Cu 均符合相關(guān)要求。

表2 5 種重金屬元素含量測(cè)定結(jié)果（mg／kg，n＝3）

2.2 農(nóng)藥殘留量測(cè)定

2.2.1 氣相色譜?質(zhì)譜條件 安捷倫毛細(xì)管柱TG?5LIMS（30 m×250 μm×0.25 μm）；程序升溫（初始溫度60 ℃，保持1 min，以40 ℃／min 升溫至120 ℃，然后以5 ℃／min 升溫至290 ℃）；載氣高純氦；氣體體積流量1.0 mL／min；進(jìn)樣口溫度230 ℃，脈沖不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量1 μL；離子源EI；離子源溫度280 ℃；傳輸線溫度280 ℃；四極桿溫度150 ℃；掃描方式多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（dMRM）。

2.2.2 溶液制備 取混合均勻的峨?yún)⒎勰? g，精密稱(chēng)定，置于50 mL 塑料離心管中，加水8 mL 浸泡30 min，加入15.0 mL 1%醋酸?乙腈，渦旋混勻后超聲處理30 min，冷凍30 min，加入QuECHERS 萃取鹽包（4 g 硫酸鎂、1 g 氯化鈉、0.5 g 檸檬酸氰二鈉、1 g 檸檬酸鈉）和1 顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上蓋子，劇烈震蕩1 min 后4 000 r／min 離心5 min。準(zhǔn)確吸取9.0 mL 上清液于凈化管中（1 200 mg 硫酸鎂、400 mg PSA 及200 mg GCB），渦旋混勻1 min，4 000 r／min離心5 min，準(zhǔn)確吸取2.0 mL 上清液于氮吹管中，40 ℃水浴氮吹至近干，加入1.0 mL 乙酸乙酯復(fù)溶，加入40 μL 內(nèi)標(biāo)溶液，0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾。

2.2.3 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液制備 稱(chēng)取空白樣品基質(zhì)，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，除不添加內(nèi)標(biāo)溶液外同法制備空白基質(zhì)溶液。精密量取環(huán)氧七氯溶液（100 μg／mL）1.0 mL，置于20 mL 量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，制得5.0 μg／mL 的內(nèi)標(biāo)溶液。精密量取農(nóng)藥對(duì)照品溶液100 μL 置于10 mL 量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，得10 μg／mL 混合對(duì)照品工作液，然后用乙酸乙酯稀釋?zhuān)觅|(zhì)量濃度為5、10、20、50、100、200、500 ng／mL 的混合對(duì)照品工作液。空白基質(zhì)溶液氮?dú)獯蹈桑謩e加入1.0 mL 混合對(duì)照品工作液復(fù)溶，加入40 μL 內(nèi)標(biāo)溶液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜配置成基質(zhì)混合對(duì)照品工作液。

2.2.4 方法學(xué)考察 將“2.2.3”項(xiàng)下的系列對(duì)照品工作液在“2.2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，以各化合物與內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度比為橫坐標(biāo)（X），化合物與內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)（Y），繪制回歸方程。取空白樣品進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)，測(cè)定信噪比，通過(guò)計(jì)算，以信噪比為3 時(shí)的質(zhì)量濃度作為檢出限。如表3 所示，結(jié)果顯示各化合物回歸方程的r為0.997 5～0.999 9，各化合物的平均加樣回收率為74.39%～109.80%，RSD 為 0.73%～5.75%，檢出限為 0.4～17.5 μg／kg，表明所用方法準(zhǔn)確度均良好，靈敏度高，符合農(nóng)藥殘留測(cè)定的要求。

表3 各化合物線性關(guān)系及加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.5 農(nóng)藥殘留量測(cè)定 對(duì)6 批峨?yún)⑦M(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示樣品S3、S4 中氯唑磷的含量分別為0.012、0.014 mg／kg，樣品S2、S3、S4、S6 中地蟲(chóng)硫磷含量分別為0.013、0.013、0.012、0.016 mg／kg，其他農(nóng)藥均未檢出。

2.3 二氧化硫殘留量 參照2020 年版《中國(guó)藥典》四部方法對(duì)6 批峨?yún)⑦M(jìn)行二氧化硫殘留量測(cè)定［11］，結(jié)果顯示6批藥材均檢出較高的二氧化硫殘留量，含量為180～339 mg／kg（表4），均超過(guò)限量值（150 mg／kg），超標(biāo)率為100%。

表4 二氧化硫殘留量測(cè)定結(jié)果

3 討論

近年來(lái)，外源性有害物質(zhì)污染問(wèn)題受到廣泛關(guān)注，中藥材中重金屬和農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題日益凸顯［12］，危害著人體健康，嚴(yán)重制約中藥產(chǎn)業(yè)的成長(zhǎng)發(fā)展。

本研究采用ICP?MS 法對(duì)不同產(chǎn)地的峨?yún)⑦M(jìn)行重金屬含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)單快速、檢出限低、結(jié)果準(zhǔn)確。分析發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的藥材重金屬及有害元素含量差異較大［13］。兩批藥材Cd 超標(biāo)可能與該地的種植環(huán)境（土壤、水源）有關(guān)［14］。采用氣相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法（GC?MS／MS）對(duì)峨?yún)⒅?4 種農(nóng)藥進(jìn)行快速篩查，包括有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)，覆蓋面廣、種類(lèi)齊全，測(cè)定方法快速簡(jiǎn)單準(zhǔn)確。6 批峨?yún)z出率不高，安全性較高。峨?yún)⒃诹蜓^(guò)程中，存在超量使用情況，應(yīng)規(guī)范峨?yún)⒌募庸すに嚒?/p>

本研究通過(guò)測(cè)定不同產(chǎn)地峨?yún)⒅兄亟饘俸俊⑥r(nóng)藥殘留和二氧化硫殘留量，反映其安全性指標(biāo)情況，可為峨?yún)⑾蘖繕?biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。