慢性乙型肝炎患者HBV-DNA載量、免疫球蛋白與肝纖維化相關性分析

吳丹

廣東省東莞市中醫院 檢驗科，廣東 東莞 523000

0 引言

肝纖維化指在慢性肝臟疾病中，由肝細胞反復損傷破壞引起的機體慢性修復過程，其病理改變主要表現為以膠原纖維為主的細胞外基質過度增生并沉積于匯管區及肝小葉內，可進一步發展并逐漸演變為肝硬化[1]。在我國人群中，慢性乙型肝炎是導致肝組織破壞并進展為肝纖維化乃至肝硬化的最常見原因[2]。目前臨床多以肝臟穿刺活檢結果作為評價肝纖維化程度金標準，但其創傷性使其應用價值受到影響，而在無創性評估中，透明質酸酶（HA）、層粘連蛋白（LN）等肝纖維化四項檢查可良好反映肝纖維化進展[3]，此外，有研究提出慢性乙肝患者乙肝病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）載量及血清免疫球蛋白（Ig）水平可能與肝臟病變進展有關[4]，但兩者與肝纖維化程度的關系目前尚無統一定論，因此本研究針對慢性乙肝患者進行上述指標檢測，以分析其與肝纖維化的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入本院2018年1月-2021年5月診治的60例慢性乙肝患者作為觀察組，納入標準：①病程在6個月以上，符合慢性乙型肝炎診斷標準者[5]；②既往未進行抗病毒或抗纖維化等治療者；③年齡18～70周歲。排除標準：①合并肝細胞癌者；②藥物、乙醇、寄生蟲等其他原因引起肝臟損傷者；③其他肝炎病毒所致肝炎。另選取同期院內體檢健康者30例作為對照組。觀察組男36例，女24例；年齡23～68歲，平均（44.28±10.36）歲。對照組男17例，女13例；年齡25～67歲，平均（45.81±9.64）歲。兩組一般資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究已通過醫學倫理委員會審批，并獲取受試者知情同意。

1.2 方法

（1）進行HBV-DNA檢測。采用圣湘生物試劑盒檢測，血清樣本的采集：用無菌注射器抽取患者靜脈血2mL，注入無菌收集管，以1600rpm離心5min，隨后分離血清置于滅菌離心管備用。樣本處理：（陰性對照、陽性對照、定量參考品與待測樣本同步處理）每個PCR反應管中加入HBV-核酸釋放劑5μL（深吸淺打避免出現氣泡），隨后加入待檢樣本、陰性對照、陽性對照以及定量參考品各5μL，吸打3～5次混勻后放置10min以上，每管加入PCR混合液40μL，采用ABI7500熒光定量PCR儀行PCR擴增反應，反應結束后自動保存結果，根據分析后圖像記錄定量結果。入組患者根據檢測結果分為低載量組（HBV-DNA載量＜1000IU/mL，33例）及高載量組（HBV-DNA載量≥1000IU/mL，27例）。

（2）進行血清Ig檢測。取患者部分血液樣本，置于離心機中以3000rpm速度離心5min，取上層清液以上海科華免疫比濁法試劑盒檢測血清IgG、IgA、IgM水平，選擇貝克曼AU5800全自動生化分析儀及配套檢測試劑盒，嚴格參照使用說明進行試劑配置，隨后將待檢樣本置于生化分析儀檢測。

（3）進行肝纖維化血清標志物檢測。采用iFlash3000化學發光免疫分析儀，以亞輝龍化學發光法試劑盒檢測患者血清Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（CⅣ）、LN、HA。

1.3 統計學分析

檢測數據均采用SPSS 22.0軟件進行統計學處理，其中計量指標表示為（），行t檢驗，計數指標表示為例（%），行χ2檢驗，以Spearman檢驗進行相關性分析，P＜0.05為對比差異存在統計學意義。

2 結果

2.1 兩組Ig與肝纖維化血清標志物結果對比

觀察組IgG、IgA、IgM水平及PCⅢ、CⅣ、LN、HA均明顯高于對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組Ig 與肝纖維化血清標志物結果對比（）

表1 兩組Ig 與肝纖維化血清標志物結果對比（）

2.2 不同HBV-DNA載量患者肝纖維化血清標志物對比

高載量組PCⅢ、CⅣ、LN、HA水平均明顯高于低載量組（P＜0.05）。見表2。

表2 不同HBV-DNA 載量患者肝纖維化血清標志物對比（）

表2 不同HBV-DNA 載量患者肝纖維化血清標志物對比（）

2.3 HBV-DNA載量、Ig與肝纖維化相關性分析

HBV-DNA 載量、IgG、IgA、IgM 水平均與P CⅢ、CⅣ、LN、HA 存在明顯正相關（P＜0.05）。見表3。

表3 HBV-DNA 載量、Ig 與肝纖維化相關性分析

3 討論

肝纖維化可由病毒性肝炎、酒精性肝病、寄生蟲感染等多種疾病引起，其病理基礎在于長期肝細胞損傷導致以膠原纖維、糖蛋白等成分為主的細胞外基質增生，有較多研究顯示PCⅢ、CⅣ、LN、HA與肝臟損傷及纖維化進程存在密切聯系[7]，可作為反映肝纖維化情況的潛在評估指標，同時也應繼續探索更多無創檢測手段以提高肝纖維化評估準確性，及時防止疾病進展。

慢性乙肝屬免疫介導性肝臟損傷，患者在感染HBV后可經歷病毒耐受期、病毒消除期及靜止期[8]，病毒耐受期HBV處于大量復制增殖階段，導致HBV-DNA水平持續增高，但該時期幾乎不引起機體免疫應答，肝組織受損較小，肝功能大多正常[9]，而隨著病情進一步發展，大量HBV可激活機體非特異性免疫并引起肝細胞進行性損傷壞死，進而激活肝星狀細胞，產生大量膠原、蛋白多糖等基質成分并沉積于肝小葉內，促使肝纖維化發生，而HA作為蛋白多糖主要成分，細胞外基質大量沉積可使血清HA水平明顯增高，PCⅢ、CⅣ及LN可反映基質膠原纖維合成情況，與肝纖維化進展密切相關。HBV的大量增殖可引起DNA抗原載量明顯升高，同時引發肝細胞免疫損傷，進而導致PCⅢ、CⅣ、LN、HA等肝纖維化血清指標明顯上升[10]。羅艷[11]研究指出，慢性乙肝患者PCⅢ、CⅣ、LN、HA等指標水平在不同HBV-DNA載量分組中存在明顯差異，與上述機制相符。本研究結果發現，高HBV-DNA載量組PCⅢ、CⅣ、LN、HA水平均明顯高于低載量組（P＜0.05），且相關性分析結果顯示HBVDNA載量與上述肝纖維化血清指標水平存在明顯正相關，提示慢性乙肝患者HBV-DNA載量可隨肝纖維化程度不斷加重而逐漸升高。

據研究顯示，慢性乙肝患者多發生體液免疫紊亂，導致血清Ig水平上升[12]，其機制仍未明確，有學者指出，HBV可暴露干細胞表面特異性脂蛋白[13]，后者可作為抗原激活免疫應答，進而導致自身抗體形成，促使肝細胞損傷，此外隨著肝組織纖維化不斷加重，肝功能逐漸降低，可致庫普弗（Kupffer）細胞活性異常，使其對抗原及細胞碎片等物質清除作用減弱[14]，可進一步導致血清Ig升高。既往研究顯示血清Ig可良好反映肝臟炎癥活動水平及纖維化程度[15]，其機制在于血清Ig水平升高可促進自然殺傷細胞對肝細胞介導的促凋亡作用，進而導致肝細胞進一步損傷，且可刺激肝組織間質細胞，使其分泌PCⅢ、CⅣ、LN、HA增多，從而促進肝纖維化進程，本研究發現觀察組IgG、IgA、IgM水平及PCⅢ、CⅣ、LN、HA均明顯高于對照組（P＜0.05），且IgG、IgA、IgM均與上述肝纖維化血清標志物存在明顯正相關，證明慢性乙肝患者Ig水平與肝纖維化存在密切聯系，可作為反映肝纖維化情況的良好指標。

綜上所述，慢性乙肝患者HBV-DNA載量及血清Ig水平與肝纖維化血清標志物具有明顯相關性，對上述指標進行檢測可有效評估患者肝纖維化程度，進而指導臨床治療。