仿野生栽培冬蓀的Hg和As含量測定

楊珍,王曉敏,唐玲,張欽語

（貴州省土壤肥料研究所，貴州 貴陽 550006）

冬蓀，又稱白鬼筆（Phallus inpudicusL.ex.Pers），別稱竹下菌、竹菌、無裙蓀，屬鬼筆 科（Phallaceae）、鬼 筆 屬（Phallus）真菌［1-3］，分布于我國貴州、四川、安徽、云南、廣東、山東等地，在歐洲、非洲、北美洲和南美洲也有分布［4-5］。冬蓀為木腐菌，夏秋季節自然發生于淡竹（Phyllostachys glauca）、麻櫟（Quercus acutissima Carruth）、泡桐（Pau?lownia fortunei）等雜木林下腐殖質層中。20世紀90年代初，冬蓀在貴州省畢節市大方縣馴化為人工栽培種，之后栽培規模逐漸擴大，主產區一直在畢節，成為畢節特產。2016年，“大方冬蓀”獲國家質檢總局國家地理標志產品［4］。隨著冬蓀產業的不斷發展，其質量安全問題也越來越受重視，保障其質量安全，是將其打造為貴州地方特色食藥用菌品牌，推進貴州食用菌產業健康持續發展，進而帶動食品、保健食品行業發展，增強貴州省新型農業競爭力的重要基礎。目前，國內外對冬蓀的研究主要集中于栽培技術、菌種篩選、營養成分分析、生物學特性、組織分離培養等方面［6-9］，有關冬蓀重金屬研究的報道較少。秦維等［10］研究冬蓀對土壤重金屬的吸附機制得出，冬蓀的重金屬吸收富集相對普通作物較強，土壤環境中的重金屬污染會在冬蓀中被放大。楊珍［11］測定黔產冬蓀重金屬及農殘含量發現，重金屬在土壤-冬蓀各部位之間具有一定的遷移能力。冬蓀中的重金屬進入人體后難以被人體吸收和代謝，進而會在人體內不斷累積，超過一定限度后會引發各種疾病。因此，開展冬蓀中重金屬的相關研究，對提高其產品質量，保障消費者食用安全，促進其產業的可持續發展具有重要意義。為了解仿野生栽培冬蓀重金屬污染情況提供依據，采用Hg、As檢測中靈敏度高、試樣量少、選擇性強的原子熒光法（AFS）［12］，對冬蓀子實體中的Hg、As含量進行測定，分析其是否超過國家標準對食用菌中Hg、As的限量值，評價其重金屬Hg、As的污染程度。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 冬蓀樣品供試冬蓀采自貴州省貴陽市白云區靛山村冬蓀仿野生種植基地。采集時間為2021年11月，去除表面泥土后完整裝入樣品袋中編號，帶回試驗室；先用自來水清洗表面泥土，再用去離子水清洗，然后將冬蓀子實體分離，置于40℃鼓風干燥箱烘干，粉碎，備用。

1.1.2 儀器 原子熒光光度計AFS-933（北京吉天儀器有限公司）；自動進樣器AS-90（北京吉天儀器有限公司）；萬能高速粉碎機RRHP-200［歐凱萊芙（香港）實業公司］；電子天平AL204［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；電熱鼓風干燥箱WG-43（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.1.3 試劑 硝酸（HNO3）、雙氧水（H2O2）均為優級純（GR）；重金屬元素標準溶液采用國家標準物質研究中心提供的Hg、As單元素標準溶液；用水均為超純水，由超純水機制備，電導率為18.2 MΩ·cm（25℃）。

1.2 方法

1.2.1 標準曲線溶液的制備與標準曲線繪制Hg和As標準儲備液的濃度均為1 000 mg/L，使用去離子水將標準儲備液分別逐級稀釋成Hg標準使用液（100 μg/L）和As標準使用液（100 μg/L）。之后，吸取1 mL Hg標準使用液于100 mL容量瓶中，用5%HCl溶液定容至標線，搖勻，即得到1.0 μg/L的Hg標準儲備液，使用儀器自動將其稀釋為0.2 μg/L、0.4 μg/L、0.6 μg/L、0.8 μg/L、1.0 μg/L系列的標準曲線溶液；吸 取0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL As標 準 使 用 液 于6個100 mL容量瓶中，用2%HCl溶液定容至標線，搖勻，即配制成0 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、6 μg/L、8 μg/L、10 μg/L系列的As標準曲線溶液。以樣品溶液中Hg和As元素的含量值（μg/L）為橫坐標，儀器信號計數值（cps）為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.2 樣品的消解及測定 測定前，各儀器按照其使用手冊調節運行條件及參數。試驗器皿在試驗前用10%HNO3溶液浸泡24 h，然后用超純水清洗后備用。

供 測 樣 品 采 用HNO3-H2O2（V1∶V2=3.5∶1）微波消解，原子熒光分光光度計測定（原子熒光光譜儀工作條件見表1）。測定Hg濃度時，配制5%HCl溶液作載流劑，1%硼氫化鈉-0.5%氫氧化鈉作還原劑。每個樣品測定3次，計算平均值及相對標準偏差。同時，采用相同方法對生物成分分析標準物質-大蔥標準物質［GBW10049（GSB-27）］中Hg、As含量進行測定，比較實測值是否超過標準參考值，檢驗測定方法是否符合檢測質量控制要求，以確保測定方法對待測樣品溶液的測定結果準確可靠。

1.2.3 冬蓀重金屬污染評價采用《綠色食品 食用菌》（NY/T 749—2018）（Hg、As）作為冬蓀中的重金屬限量評價標準，即Hg、As的限量參比值分別為0.20 mg/kg、1 mg/kg。

1.3 數據記錄與分析

采用Excel 2019對數據進行記錄與分析。

2 結果與分析

2.1 測定方法的準確度檢驗

由表2可知，配制的Hg、As標準曲線溶液，其線性回歸方程相關系數分別為0.999 9和0.999 4，均達0.999 0以上，表明試驗儀器及操作的精密度符合檢測要求，待測樣品溶液可用于冬蓀子實體中Hg、As含量的檢測。

由表3可知，試驗所用測定方法對生物成分分析標準物質-大蔥標準物質［GBW10049（GSB-27）］中Hg、As含量的實測值分別為0.013 mg/kg、0.550 mg/kg，均未超過標準參考值，且相對標準偏差分別為0.12%、1.48%，均小于5.0%。表明試驗所用測定方法的準確度符合檢測質量控制要求，可用于冬蓀子實體中Hg、As含量的檢測。

表3 標準參考物質的實測值與標準參考值

2.2 冬蓀子實體的Hg、As含量

由表4可知，冬蓀子實體樣品中Hg、As含量的平均值分別為0.25 mg/kg、1.15 mg/kg，分別為《綠色食品 食用菌》（NY/T 749—2018）中Hg、As限 量 值 的1.25、1.15倍，略微超出限量值，屬于輕度污染。表明冬蓀子實體對重金屬Hg、As具有一定的富集能力，可能與采樣區早年的煤礦開采活動有關。

表4 冬蓀子實體樣品的Hg、As含量

3 結論

采用原子熒光法測定仿野生栽培冬蓀子實體中Hg、As含量，結果表明，樣品中Hg、As含量的平均值分別為0.25 mg/kg、1.15 mg/kg，根據《綠色食品 食用菌》（NY/T 749—2018）中的限量標準，其Hg、As含量略微超出限量值，屬輕度污染，表明冬蓀子實體對重金屬Hg、As具有一定的富集能力，與前人對冬蓀子實體重金屬富集的研究結果［10-11］一致。對此，從冬蓀的生物學特性分析，冬蓀屬于中低溫型真菌，產地多為微酸性土壤，子實體附著于重金屬含量最高的淺層土壤，菌絲生長期間土壤含水率為40%～50%，子實體開傘大氣相對濕度80%。因此，冬蓀的生物學特性決定其生長過程中對重金屬吸收、富集能力超過普通作物。另外，對試驗操作和方法的準確度檢驗得出，試驗方法符合檢測質量控制要求，表明原子熒光法測定冬蓀子實體中Hg、As含量的結果準確可靠。