基于多指標成分含量的酒萸肉干燥方式研究Δ

范天慈，毛 睿，劉麗婷，竇志英，劉亞男，孫佳惠，常艷旭，龔博煬（天津中醫藥大學中藥學院/天津市中藥化學與分析重點實驗室，天津 301600）

山茱萸為山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalisSieb.et Zucc.的干燥成熟果肉，可補益肝腎、收澀固脫[1]，具有保護肝腎、免疫調節、抗衰老等藥理作用[2]。酒萸肉為山茱萸加黃酒浸潤后酒燉或酒蒸制得的飲片，較山茱萸增強了補益肝腎的功效[3]。酒萸肉現收載于2020年版《中國藥典》（一部），以馬錢苷、莫諾苷為指標成分[1]。研究顯示，酒萸肉含有的山茱萸新苷、沒食子酸，具有護肝、抗炎、抗菌等作用[4]；其總黃酮類成分具有抗氧化、護肝等作用[5]；5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，5-HMF）為炮制過程中產生的醛類化合物，為中藥炮制品尤其是酒蒸、酒炙品的常用檢測指標[6]。因此，多指標成分含量測定對于綜合評價酒萸肉的質量具有重要意義。

中藥質量受產地、采收時間、加工方式、炮制方法等多因素影響，而干燥是關鍵環節[7]?！肚Ы鹨矸健分赋觯骸胺蛩幉扇?，不依陰干、曝干，雖有藥名，終無藥實”[8]，而《中國藥典》也未對酒萸肉的干燥參數作具體規定，因此市場上不同干燥方式制得的酒萸肉質量參差不齊[8]，從而影響臨床療效。紅外干燥、冷凍干燥等技術在中藥干燥中得到逐步應用，兩種或多種干燥方式的聯合應用具有彌補單一干燥方式的不足，同時滿足多種需求的特點[9－10]，但在中藥加工中尚未廣泛應用。因此，本研究通過測定酒萸肉中沒食子酸、5-HMF、馬錢苷、莫諾苷、山茱萸新苷和總黃酮等成分的含量，探討不同干燥方式對酒萸肉質量的影響，旨在為酒萸肉的干燥方式優選提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司），DHG-9245A型鼓風干燥箱（上海躍進醫療器械有限公司），YHG 300-BS-Ⅱ型真空干燥箱（上海百典儀器設備有限公司），ALPHA 1-2 LD plus型真空冷凍干燥機（德國 Marin Christ 公司），RWBS-08S型微波干燥機（南京蘇恩瑞干燥設備有限公司），SB-3200DTN型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技有限公司），FA2004型電子分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司），FW100型高速粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 主要藥品與試劑

沒食子酸對照品（批號YA0505YA14）、5-HMF對照品（批號H12M9Z61023）、馬錢苷對照品（批號P22F10F81444）、莫諾苷對照品（批號P11M11F112846）、山茱萸新苷對照品（批號Y07A7H12648）均購自上海源葉生物科技有限公司，純度均不小于98%；蘆丁對照品（批號L-001-160520，純度＞98%）購自成都瑞芬思生物科技有限公司；黃酒（批號20190219，酒精度13%）購自浙江古越龍山紹興酒股份有限公司；乙腈為色譜純，甲醇、磷酸均為分析純，水為純凈水。

山茱萸于2020年10月采自浙江省淳安縣，經天津中醫藥大學中藥學院李天祥教授鑒定為山茱萸科山茱萸屬植物山茱萸C.officinalisSieb.et Zucc.的新鮮成熟果實。

2 方法與結果

2.1 酒萸肉的制備

取山茱萸，去核后于75 ℃鼓風干燥，制成山萸肉飲片。取山萸肉飲片，加入50%黃酒，攪拌均勻，于密閉容器中悶潤1 h后，隔水蒸2 h。取出攤開放涼，分別采用不同方式干燥制得22批酒萸肉，其干燥方式見表1。

表1 22批酒萸肉的干燥方式

2.2 酒萸肉中沒食子酸等6種成分的含量測定

2.2.1 檢測條件 （1）沒食子酸等5種成分的色譜條件：以Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）為色譜柱，以0.3%磷酸溶液（A）-乙腈（B）為流動相進行梯度洗脫（0～10 min，7%B；10～35 min，7%B～15%B；35～50 min，15%B～30%B；50～55 min，30%B～7%B；55～60 min，7%B）；柱溫為30 ℃；流速為1 mL/min；進樣量為10 μL；檢測波長為240 nm。（2）總黃酮的檢測條件：采用“NaNO2-Al（NO3）3-NaOH”顯色法進行檢測。取供試品溶液1 mL，加入5% NaNO2溶液0.5 mL反應6 min，再加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，搖勻后反應6 min，最后加入5% NaOH溶液1 mL混勻，靜置15 min，于510 nm波長處測定吸光度[11]。

2.2.2 對照品溶液的制備 分別稱取沒食子酸、5-HMF、莫諾苷、馬錢苷、山茱萸新苷對照品1.013、1.531、1.085、1.002、1.013 mg，置于10 mL容量瓶中，用80%甲醇溶解并定容，搖勻，制成上述各成分質量濃度分別為101.3、153.1、108.5、100.2、101.3 μg/mL的混合對照品溶液。另稱取蘆丁對照品9.80 mg，置于10 mL容量瓶中，加入80%乙醇溶解并定容，得到蘆丁質量濃度為0.98 mg/mL的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 稱取樣品粉末（過三號篩）約0.2 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，加80%甲醇25 mL，超聲（功率180 W，頻率40 kHz，下同）處理40 min，冷卻至室溫，稱定質量，用80%甲醇補足缺失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得用于測定沒食子酸等5種成分的供試品溶液（Ⅰ）。另精密稱取樣品粉末（過三號篩）約0.2 g，加入45%乙醇25 mL，超聲處理20 min，冷卻至室溫，稱定質量，用45%乙醇補足缺失的質量，濾過，取續濾液，即得用于測定總黃酮的供試品溶液（Ⅱ）。

2.2.4 沒食子酸等5種成分的系統適用性試驗 取混合對照品溶液、供試品溶液（Ⅰ）及空白溶液（80%甲醇），按“2.2.1（1）”項下檢測條件進樣測定，記錄色譜圖（圖1，空白圖略）。結果顯示，各成分分離度均大于1.5，理論板數均大于3 000，空白溶液對測定無干擾。

2.2.5 線性關系考察 取“2.2.2”項下沒食子酸等5種成分的混合對照品溶液和蘆丁對照品溶液，用80%甲醇稀釋，得系列線性工作溶液，分別按“2.2.1（1）（2）”項下檢測條件進樣測定。以各待測成分的質量濃度為橫坐標（X）、對應的峰面積或吸光度為縱坐標（Y）進行線性回歸分析。結果見表2。

表2 沒食子酸等5種成分和蘆丁的回歸方程與線性范圍

2.2.6 方法學考察 2種檢測方法經方法學考察結果顯示，精密度、重復性及準確度均較好，供試品溶液在室溫下放置24 h內穩定（RSD均小于3%）。

2.2.7 各批次酒萸肉的含量測定 取22批酒萸肉樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1（1）（2）”項下檢測條件進樣測定，記錄峰面積或吸光度并按標準曲線法計算樣品含量，每批樣品平行測定3次。結果見表3。

表3 酒萸肉樣品中沒食子酸等5種成分和總黃酮的含量測定結果（n＝3，mg/g）

2.3 層次分析法綜合評價酒萸肉質量

參考文獻[12―13]，采用層次分析法判斷各成分的重要性，得到酒萸肉中各成分的重要性依次為：馬錢苷＞莫諾苷＞山茱萸新苷＞沒食子酸＞5-HMF＞總黃酮，得到判斷優先矩陣結果見表4。

表4 沒食子酸等5種成分和總黃酮的判斷優先矩陣結果

根據表4結果，采用層次分析法計算得到馬錢苷、莫諾苷、山茱萸新苷、沒食子酸、5-HMF、總黃酮的權重系數分別為 0.380 6、0.251 6、0.160 2、0.100 9、0.064 3、0.042 5。一致性比例因子為0.019 4（＜0.10），表明該判斷優先矩陣符合一致性檢驗，權重系數合理有效。按公式計算綜合評分：綜合評分＝（Y1×0.100 9+Y2×0.064 3+Y3×0.251 6+Y4×0.380 6+Y5×0.160 2+Y6×0.042 5）×100（Y1～Y6依次為沒食子酸、5-HMF、馬錢苷、莫諾苷、山茱萸新苷、總黃酮的含量）。綜合評分越高，表示酒萸肉質量越優[14]。結果顯示，ZW3樣品的綜合評分最高，其次為ZG2和ZH2，詳見表5。

表5 22批酒萸肉的綜合評分結果

3 討論

22批酒萸肉中沒食子酸、5-HMF、莫諾苷、馬錢苷、山茱萸新苷、總黃酮的含量分別為1.043 8～1.563 8、0.648 5～2.358 8、5.031 0～10.305 7、6.681 2～7.534 2、0.986 5～1.148 8、33.657 2～50.741 5 mg/g。60 ℃鼓風烘干、遠紅外干燥時所得飲片的質量優于同法45、75、90 ℃所得飲片，這可能與高溫影響成分穩定、破壞成分有關[15]。微波干燥速率快，60、75、90 ℃微波干燥所得飲片的綜合評分較高，質量較優。－80 ℃下預凍所得飲片的質量優于－20 ℃預凍所得飲片，其原因可能為－80 ℃預凍效果好，水分升華快。聯合干燥方式在酒萸肉干燥中未展現出優勢，其原因可能為飲片蒸制過程中產生的自由水較多，而鼓風干燥、遠紅外干燥產生的水較少，可實現快速干燥。

遠紅外干燥通過紅外波穿透的方式實現干燥[16]，對飲片外觀影響較小，顏色保留程度高。鼓風干燥可能會褪除部分顏色。微波干燥升溫急劇，飲片易產生棕褐色、輕微皺縮等特征，與其他干燥方式有明顯差異。鼓風、遠紅外、微波等加熱干燥方式與曬干、陰干、冷凍干燥等不經過高溫干燥方式處理的酒萸肉樣品滋味有明顯區分。這表明加熱干燥方式與自然干燥、低溫干燥對飲片滋味影響有差異。

綜上所述，酒萸肉的干燥方式宜采用75 ℃微波干燥、60 ℃鼓風干燥或60 ℃遠紅外干燥。