氣相色譜-質譜技術定性確證水產品中精神類藥物殘留

祝偉霞，郁 露，張淑霞，邢榮花，師子豪

（鄭州海關技術中心，河南鄭州 450009）

精神類藥物能直接作用于中樞神經系統，干擾神經物質分泌，在臨床具有廣泛的應用[1]。濫用精神藥類藥物能夠產生類似藥物成癮的效果，危害人類健康，為經濟發展和社會公共安全帶來威脅[2]。淡水中水生動物中精神類藥殘留源于兩種途徑，一方面養殖企業為提高經濟效益，違規將精神類藥物添加至飼料中，添加鎮靜類藥物可縮短生長周期，減少動物維持體能營養物質消耗達到增長體重目的；另一方面，醫療行業和違規吸毒的人類活動會直接污染水環境[1,3]。為保障動物源食品質量安全，我國農業部176號公告禁止在飼料和動物飲用水中使用精神類藥物。為監控水產中精神類藥物殘留現狀，建立一種水產品中精神類藥物殘留分析方法是非常必要的。

目前精神類藥物的檢測方法有免疫法[4]、紅外光譜法[5]、拉曼光譜法[6]、氣相色譜-質譜法(GC-MS)[3,7]、高效液相色譜法-質譜法[2,8]、液相色譜-高分辨質譜法[9]等檢測方法，已報告的研究主要用于藥物、體液、污水中精神藥物的測定，很少有關水生動物組織中精神類藥物殘留的報道。本文以鯉魚為分析對象，采用分散固相萃取凈化方法，建立了氣相色譜質譜法分析4種精神類藥物殘留的確證方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

GCMS-QP2020NX型氣相色譜-質譜儀（配電子轟擊源，日本島津公司）；Multi Reax渦旋振蕩器（德國Heidolph公司）；S22H超聲波清洗劑機（廈門致微儀器公司）；CT-6E型離心機(日本日立公司)。

乙腈和丙酮（美國Fisher公司，色譜純）；填料PSA和填料C18（美國Agilent公司）；正己烷、氯化鈉和硫酸鈉為市售分析純試劑，硫酸鈉使用前于650℃灼燒4小時。

安眠酮、仲丁比妥、艾司唑侖、唑吡坦標準溶液（100μg/mL，天津阿爾塔科技有限公司）；標準工作溶液的配制：分別量取100μL標準溶液，用丙酮定容至10mL，配制成質量濃度為1μg/mL的標準工作溶液。標準工作曲線的配制：量取適量的標準工作溶液，配制成質量濃度為10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL，臨用前配制。

1.2 實驗方法

取鯉魚樣品的可食部位，采用組織搗碎機制備成均勻的樣品，于-18℃條件下保存。稱取制行樣品5.0g（精確至0.001g）置于50mL離心管中，加入5.0g氯化鈉，攪拌使其均勻分散，加入20mL乙腈，超聲萃取30min，渦旋混合5min，置于8000r/min轉速下離心10min。轉取全部上清液，加入5mL乙腈飽和的正己烷液液萃取，離心后移去正己烷層，樣液中加入100mg PSA和填料150mg C18進行分散固相萃取凈化，離心后轉移上清液，并于50℃氮氣流下吹干，加入1mL丙酮定容殘渣，經0.22μm有機相濾膜過濾后，進行GC-MS測定。

1.3 GC-MS測定條件

色譜柱為5%苯基-95%甲基聚硅氧烷毛細管柱DB-5MS（柱長30m×0.25mm,0.25μm）；程序升溫條件：初始溫度140℃，保持3min，再以15℃/min的速率升至230℃，保持5min，以25℃/min的速率升至305℃，保持10min；載氣為氦氣；載氣流速為1.0mL/min；進樣口溫度280℃：進樣量1μL；進樣方式 為不分流進樣，溶劑延遲2min。

電子轟擊離子源在選擇離子模式監測，電離能量為70eV；離子源溫度為230℃；安眠酮特征離子（235*、250、91、65）、仲丁比妥特征離子為（156、141、98、55）、艾司唑侖（259、205、294、239）特征離子為、唑吡坦（235、307、92、219），帶*為定量離子，圖1列出4種分析物的氣相色譜-質譜總離子流圖。

圖1 4種精神類藥物的氣相色譜-質譜總離子流圖

2 結果與討論

2.1 提取方法的優化

精神類藥為弱極性化合物，易溶于有機溶劑[10]，對比了采用甲醇、乙腈、二氯甲烷、丙酮的提取效果。結果表明采用甲醇和乙腈進行提取時，蛋白沉淀完全，基質中干擾少，二氯甲烷和丙酮干擾峰多，甲醇提取液需要多次的溶劑轉移后可進行GC-MS測定，實驗繁瑣，本方法選用乙腈提取魚肉中精神類藥物。

試驗對比了氯化鈉和無水硫酸鈉提取4種分析物時的鹽析效率，結果表明采用氯化鈉時的提取效率為85.4%～93.4%，無水硫酸鈉的提取效率為76.8%～95.6%，方法選用氯化鈉作為鹽析試劑。

2.2 樣品定容液的選擇

樣品經過前處理凈化后，采用不同的定容液可對GC-MS響應產生影響。比較了甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正己烷作為定容液的響應值，甲醇和乙腈溶劑極性強，進行GC-MS測定時響應弱，丙酮響應最高，如圖2所示，方法選用丙酮進行定容。

圖2 不同有機溶劑作為定容液時相對響應強度的變化

2.3 進樣口溫度的選擇

分別對比了進樣口在260℃、280℃、290℃、300℃下的信號強度，試驗結果表明仲丁比妥在280℃比260℃時信號提高了15.7%，另3種精神類藥物信號強度未發生變化，因此本方法的進樣口溫度設定280℃。

2.4 方法驗證

采 用 丙 酮 配 置 質 量 濃 度 為20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的標準溶液，在優化的方法條件下進行測定，以質量濃度x對分析物面積y作圖，在該濃度范圍內呈良好的線性關系，相關系數均≥0.9994，線性方程和見表1。以信噪比≥3為方法檢出限，以信噪比≥10為方法定量限，方法檢出限為4μg/kg，定量限為10μg/kg，分別添加LOQ、2*LOQ、5LOQ，平行測定6次，計算方法回收率和精密度，結果在表。

表1 方法驗證參數

收集農貿市場13份鯉魚，樣品制備完成后，按本方法所述進行測定，13份魚鯉魚中均未檢出安眠酮、仲丁比妥、艾司唑侖、唑吡坦殘留。

3 結論

本文以魚肉中安眠酮、仲丁比妥、艾司唑侖、唑吡坦4精神藥物殘留為目標物，樣品在氯化鈉的鹽析的作用下，乙腈進行提取，正己烷除脂，加入PSA和C18固相萃取填料凈化，GC-MS選擇離子模式監測。通過優化不同的前處理和儀器條件，證明本方法測定水產品中精神類藥物，特異性強、定性準確，可以高通量測定鯉魚中4種精神類藥物殘留。