Hepatology Communications|CRISPR介導的單堿基編輯可高效沉默HBV S基因

HBV感染是肝硬化和肝細胞癌的主要危險因素之一。聚集的規則間隔短回文重復序列(CRISPR)/CRISPR相關蛋白9(Cas9)已被用于精確編輯HBV基因組，并通過雙鏈斷裂(DSB)的非同源末端連接修復清除HBV。然而，CRISPR/Cas9介導的DSB引發宿主基因組的不穩定性，編輯基因組的效率較低，限制了其應用。CRISPR胞苷堿基編輯器(CBE)可以通過產生提前終止密碼子來沉默基因。吉林大學第一醫院和明尼蘇達大學開展的一項聯合研究開發了一種CRISPR堿基編輯器來精確編輯HBV基因組內的單核苷酸，從而沉默HBV基因的表達。

HBsAg由HBV S基因編碼。研究者設計了一種單導向RNA(sgRNA)來編輯HBV S基因的第30個密碼子，可將其從CAG(谷氨酰胺)修改成終止密碼子TAG。研究者使用攜帶HBV基因組的人肝癌PLC/PRF/5細胞建立了表達CBE的穩定細胞系(PLC/PRF/5-CBE)。然后用慢病毒將sgRNA導入PLC/PRF/5-CBE細胞。結果發現在表型上71%的PLC/PRF/5-CBE細胞在S基因內形成了一個提前終止密碼子。HBs mRNA水平顯著降低。在PLC/PRF/5-CBE細胞中觀察到HBsAg分泌減少92%。經gRNA_S治療后，細胞內HBsAg也降低了84%。此外，在HBV基因組中預測的脫靶位點中未檢測到脫靶效應。序列分析證實HBV基因型B、C、F、G和H的95%、93%、93%、9%和72%的S基因序列具有sgRNA的結合位點。

綜上所述，CRISPR介導的單堿基編輯是沉默HBV S基因的有效方法，具有清除HBV的治療潛力。

摘譯自ZHOU H, WANG X, STEER CJ, et al. Efficient silencing of hepatitis B virus S gene through CRISPR-mediated base editing[J]. Hepatol Commun, 2022. DOI: 10.1002/hep4.1933. [Online ahead of print]