2型糖尿病患者血清FABP4、FOXO1水平變化與糖尿病腎病發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系

李鳴，烏仁斯琴，斯琴，張琪，王慧，張雷，肖瑞，皇甫建

1內(nèi)蒙古自治區(qū)第三醫(yī)院體檢中心，呼和浩特 010010；2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科；3北京物資學(xué)院校醫(yī)院；4常州市武進人民醫(yī)院腫瘤科；5內(nèi)蒙古自治區(qū)第三醫(yī)院教學(xué)部；6內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)分子病理學(xué)重點實驗室

糖尿病腎病（DKD）指由糖尿病引起的腎損傷，是2型糖尿病（T2DM）主要的并發(fā)癥之一［1］。近80%的T2DM患者存在異常脂代謝，脂代謝紊亂可導(dǎo)致腎小球肥大、腎小球硬化、腎小管間質(zhì)炎癥和纖維化［2］。脂肪細胞型脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4）是脂代謝過程中的參與因子，其功能是結(jié)合和轉(zhuǎn)運細胞內(nèi)的脂肪酸，調(diào)節(jié)脂肪酸的攝取、運載、儲存和釋放，推測FABP4參與了DKD的發(fā)生發(fā)展。叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O亞族1（FOXO1）是細胞內(nèi)磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信號通路的組成因子，受胰島素調(diào)控。研究顯示，F(xiàn)OXO1可作為上游因子調(diào)控下游因子FABP4的表達［3］，但二者與DKD發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系及其相關(guān)性尚有待研究。本研究通過觀察T2DM患者血清樣本中FABP4、FOXO1水平變化，分析其與DKD發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系，以期為T2DM患者DKD的早期診斷及預(yù)防提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇2018年12月—2019年12月于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院就診的T2DM無腎病患者、T2DM合并腎病患者及同期在我院體檢的健康志愿者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①T2DM患者符合世界衛(wèi)生組織1999年糖尿病的診斷和分型標(biāo)準(zhǔn)；②T2DM無腎病患者符合尿白蛋白/尿肌酐（UACR）＜30 mg/g；③T2DM合并腎病患者符合UACR≥30 mg/g且合并糖尿病視網(wǎng)膜病變（根據(jù)眼底檢查確診）；④健康志愿者空腹血糖和糖化血紅蛋白均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①短期內(nèi)尿蛋白急劇增多；②合并DKD以外的原發(fā)性和繼發(fā)性腎臟疾病。共選擇符合以上條件的T2DM無腎病患者40例（T2DM組）、T2DM合并腎病患者60例（DKD組）、健康志愿者38例（對照組）。T2DM組男24例、女16例，年齡（57.80±8.18）歲，BMI（26.48±2.63）kg／m2，腰 臀 比（WHR）（0.91±0.07）；DKD組 男46例、女14例，年齡（57.35±7.41）歲，BMI（26.62±3.15）kg／m2，WHR（0.94±0.09）；對照組男25例、女13例，年齡（47.63±9.41）歲，BMI（23.98±3.10）kg／m2，WHR（0.85±0.07）。T2DM組、DKD組年齡、BMI、WHR均高于對照組，三組性別構(gòu)成比具有可比性。

1.2 血清FABP4、FOXO1水平檢測方法采用ELISA法。入組后分別抽取各組空腹靜脈血2 mL，以3 000 r/min離心分離血清，轉(zhuǎn)入-20℃冰箱凍存待測。使用FABP4、FOXO1測定試劑盒測定血清FABP4、FOXO1，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計量資料采用單樣本K-S擬合優(yōu)度法進行正態(tài)性檢驗，若呈正態(tài)分布則以±s表示，組間比較行t檢驗；計數(shù)資料以例（%）表示，組間比較行χ2檢驗。采用Pearson相關(guān)分析血清FABP4與FOXO1的相關(guān)性。以T2DM患者是否合并腎病為因變量，以血清FABP4、FOXO1水平為自變量，采用非條件Logistic回歸分析T2DM患者血清FABP4、FOXO1與DKD發(fā)病風(fēng)險之間的關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清FABP4、FOXO1水平及其相關(guān)性比較DKD組、T2DM組、對照組血清FABP4水平分別為（9.21±2.06）、（8.36±1.99）、（6.61±1.20）ng/mL，血清FOXO1水平分別為（11.37±3.60）、（9.70±2.08）、（8.02±2.64）ng/mL。血清FABP4、FOXO1水平DKD組＞T2DM組＞對照組（P均＜0.01），且在DKD組、T2DM組、對照組中均呈正相關(guān)（r分別為0.555、0.649、0.639，P均＜0.001）。

2.2 血清FABP4、FOXO1水平與DKD發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系將T2DM患者是否合并腎病作為因變量，將血清FABP4、FOXO1水平作為自變量，納入非條件Logistic回歸分析；結(jié)果顯示，2型DKD發(fā)病風(fēng)險隨FABP4（OR=1.285，95%CI1.058～1.457，P＜0.01）及FOXO1（OR=1.394，95%CI1.064～1.826，P＜0.05）水平升高而增加。在調(diào)整了年齡、性別、BMI、WHR后，2型DKD發(fā) 病 風(fēng) 險 仍 隨FABP4（OR=1.241，95%CI1.043～1.583，P＜0.05）和FOXO1（OR=1.237，95%CI1.003～1.526，P＜0.05）水平升高而增加。

3 討論

目前，臨床診斷DKD主要依據(jù)為尿白蛋白水平及糖尿病視網(wǎng)膜病變。UACR檢測簡便、結(jié)果穩(wěn)定，是評定糖尿病患者存在蛋白尿的一項敏感指標(biāo)。《2014年DKD防治專家共識》［4］提出糖尿病視網(wǎng)膜病變伴任何一期慢性腎臟病的DKD診斷標(biāo)準(zhǔn)，避免遺漏尚無蛋白尿但腎小球濾過率異常的DKD患者。

目前，部分研究探討了FABP4水平變化與DKD發(fā)生發(fā)展間的關(guān)系。張連珊［5］研究顯示，2型DKD模型大鼠腎組織中FABP4蛋白及mRNA的表達均明顯升高。李貞［6］對糖尿病腎損傷患者行腎臟穿刺病理檢查，發(fā)現(xiàn)腎小球系膜細胞FABP4的表達升高，提示FABP4可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激來介導(dǎo)DKD的腎臟系膜細胞凋亡，造成腎功能受損。血清學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，早期DKD患者的血清FABP4水平升高，與腎功能呈負相關(guān)，與UACR呈正相關(guān)［7-8］。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組及T2DM組比較，DKD組血清FABP4水平升高；調(diào)整相關(guān)影響因素的非條件Logistic回歸分析同樣顯示，DKD發(fā)病風(fēng)險隨T2DM患者血清FABP4水平升高而增加。我們推測DKD患者血清FABP4水平升高的原因可能為以下幾點：①T2DM患者脂代謝異常，血清游離脂肪酸增多，游離脂肪酸的伴侶FABP4也隨之增多，腎小管的重吸收作用使血清FABP4升高。②DKD發(fā)生時，患者體內(nèi)蛋白質(zhì)外漏，血液處于高凝狀態(tài)，加重高脂血癥，F(xiàn)ABP4也隨之增多。③血管內(nèi)皮功能紊亂在T2DM患者中較常見，T2DM患者血液循環(huán)中FABP4表達與血管內(nèi)皮細胞功能呈負相關(guān)，這也從旁佐證了FABP4參與糖尿病血管病變的發(fā)生發(fā)展［9］。DKD是微血管并發(fā)癥，存在微血管內(nèi)皮功能下降，故DKD患者循環(huán)FABP4水平升高。

FOXO1在細胞核內(nèi)可與糖異生過程中的關(guān)鍵酶葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）的靶基因結(jié)合，通過調(diào)節(jié)G-6-Pase與PEPCK的表達實現(xiàn)對糖異生的調(diào)控［10-11］。胰島素發(fā)揮作用時，F(xiàn)OXO1受PI3K/AKT通路調(diào)節(jié)發(fā)生磷酸化，解除與G-6-Pase、PEPCK靶基因的結(jié)合，抑制肝臟葡萄糖異生及肝糖原輸出，從而達到胰島素降糖作用。FOXO1與DKD間的相關(guān)性也受到學(xué)者們的關(guān)注。徐瑤［12］通過臨床血清學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，T2DM組患者血清FOXO1水平升高，且與UACR水平呈正相關(guān)，提示血清FOXO1可能成為診斷和評估糖尿病腎臟損傷病變的血清生物學(xué)標(biāo)志物。杜萌萌［13］研究發(fā)現(xiàn)，DKD小鼠腎臟足細胞的FOXO1轉(zhuǎn)錄活性下降，提高腎臟FOXO1的轉(zhuǎn)錄活性可緩解足細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化，改善足細胞功能紊亂，減輕蛋白尿，延緩DKD的發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，與T2DM組 比 較，DKD組 血 清FOXO1的 表 達 水 平 更高。DKD患者血清FOXO1水平升高的原因可能為：①胰島素-PI3K-AKT信號通路激活，F(xiàn)OXO1蛋白直接受到該信號通路磷酸化調(diào)控，出胞核、進胞質(zhì)，此時腎小球細胞及其他腎組織細胞胞膜在炎癥因素及脂肪酸過度氧化的作用下受損，導(dǎo)致FOXO1出胞，使得循環(huán)中FOXO1水平升高。②有研究表明，F(xiàn)OXO1為氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)過程中的關(guān)鍵介質(zhì)，DKD發(fā)生發(fā)展與氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)相關(guān)［14］。FOXO1過表達可影響氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)細胞因子的表達，使腎臟系膜細胞增生、細胞外基質(zhì)堆積，以此參與到DKD的發(fā)病機制中。

對于FOXO1、FABP4間的相關(guān)性亦有研究報道。宋君［15］通過特異性小干擾核糖核酸沉默F(xiàn)OXO1基因后，發(fā)現(xiàn)FABP4表達下降。本研究采用Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ABP4和FOXO1在不同組別中均呈正相關(guān)，這與宋君的報道一致。但考慮到轉(zhuǎn)錄因子FOXO1存在核轉(zhuǎn)位的特殊性，仍需要大量基礎(chǔ)實驗、臨床研究來佐證，F(xiàn)ABP4與FOXO1間相互作用及相關(guān)調(diào)控機制也有待進一步研究。