乳雙歧桿菌M8口服對重度燒傷患者免疫功能的調節作用

陳寧杰，李夢婕，楊金存，張偉，隋洪濤，王海濤，

1山東大學附屬威海市立醫院燒傷整形科，山東威海 264200；

2濱州醫學研究生院；3濰坊醫學院研究生院

腸道具有數量多樣且龐大的微生物群，其與健康宿主之間保持著動態平衡以阻止致病菌侵入，這對維持腸黏膜屏障功能具有重要意義［1-2］。重度燒傷會導致腸黏膜屏障不同程度受損及機體免疫功能降低，如細胞免疫抑制因子白細胞介素6（IL-6）表達增加，導致病原菌及其產生的毒素侵入機體，引發炎癥反應，嚴重者甚至可引發全身炎癥反應綜合征或多器官功能障礙，危及生命［3］。益生菌是一類能在體內存活，有益于宿主健康的微生物，其具有特異性、效價強度和可證明的臨床效能，可調節腸道菌群平衡，保護腸黏膜，減輕炎癥反應，從而達到改善機體免疫力的作用［4-5］。其中，雙歧桿菌是定植于健康人腸道中的優勢菌，具有免疫調節、改善腸道屏障等多種生理功能［4］。既往研究顯示，在重度燒傷患者中應用益生菌有調節腸道菌群紊亂、維護腸道屏障、減輕炎癥反應等作用［6-8］。母乳作為嬰幼兒最自然安全的食源，蘊含對新生兒健康有益的多種益生菌，這些益生菌不僅能夠促進新生兒腸道建立正常的菌群平衡，還能夠促進免疫系統成熟［2］。因此，母乳中的有益微生物具有重要價值。乳雙歧桿菌M8是從母乳中提取的益生菌，具有良好的胃腸消化耐受性及免疫調節作用，與市面上其他雙歧桿菌產品比較，具有生物相容度高、耐酸性高等優勢［9-10］。2018年8月—2021年12月，本研究觀察了口服乳雙歧桿菌M8對重度燒傷患者白細胞總數、中性粒細胞百分比、T淋巴細胞亞群、血清免疫球蛋白水平和細胞因子水平的影響，探討其對重度燒傷患者免疫功能的調控作用，以期為重度燒傷患者的治療及愈后提供一定的臨床經驗。

1 資料與方法

1.1 臨床資料經山東大學附屬威海市立醫院醫學倫理委員會批準，收集我院燒傷整形外科同期收治的重度燒傷患者。納入標準：①年齡18～65歲；②燒傷總面積31%～50%總體表面積（TBSA）或Ⅲ°燒傷面積10%～20% TBSA；③燒傷時間24 h內；④傷后接受補液抗休克、抗感染、臟器功能保護和創面處理等常規燒傷治療；⑤簽署知情同意書。排除標準：①伴有嚴重系統性疾病；②合并嚴重復合傷；③患精神疾病或依從性差難以配合治療；④妊娠、哺乳期；⑤伴免疫功能缺陷。共收集符合標準的重度燒傷患者30例，采用隨機數字表法分為M8組及對照組各15例。對照組男9例、女6例，年齡（37.00±12.18）歲，燒傷總面積（37.87%±0.04%）TBSA，Ⅲ°燒傷面積（12.80%±0.02%）TBSA。M8組男10例、女5例，年齡（40.20±11.77）歲，燒傷總面積（40.87%±0.05%）TBSA，Ⅲ°燒傷面積（13.67%±0.02%）TBSA。兩組性別、年齡、燒傷總面積、Ⅲ°燒傷面積具有可比性。

1.2 乳雙歧桿菌M8及安慰劑制備方法選取內蒙古農業大學乳品生物技術與工程教育部重點實驗室于2017年自健康人母乳中分離的1株新型乳雙歧桿菌M8制成粉劑，將其分裝成50 g每份，保存于-20℃冰箱備用。另委托該實驗室生產不含乳雙歧桿菌M8但形狀、大小、色澤、重量等外觀均與M8粉劑相同的安慰劑，同樣分裝為50 g每份，封裝在相應外包裝中。

1.3 治療方法對照組予以燒傷常規治療（補液抗休克、抗感染、臟器功能保護和創面處理等）并口服安慰劑粉劑50 g，每日1次；M8組在常規治療基礎上口服乳雙歧桿菌M8粉劑50 g，每日1次，共治療14 d。

1.4 指標觀察方法①外周血白細胞總數及中性粒細胞百分比：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，采用全血細胞檢測儀檢測白細胞總數及中性粒細胞百分比。②外周血T淋巴細胞亞群：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，流式細胞儀檢測CD4＋、CD8＋T淋巴細胞比例。③血清IgA、IgG：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，離心取上清液，置于EDTA抗凝管中，ELISA檢測試劑盒檢測各組血清IgA、IgG。④細胞免疫抑制因子IL-6水平：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，離心取上清液，采用ELISA檢測試劑盒檢測各組血清IL-6水平。

1.5 統計學方法采用SPSS21.0統計軟件。計量資料采用Shapiro-Wilk進行正態性檢驗，呈正態分布的連續變量以±s表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血白細胞總數及中性粒細胞百分比比較對照組、M8組白細胞總數分別為（8.64±1.75）×109/L、（6.72±2.01）×109/L，中性粒細胞百分比分別為73.95%±8.42%、65.97%±8.19%，M8組外周血白細胞總數、中性粒細胞百分比均低于對照組（P均＜0.05）。

2.2 兩組外周血CD4＋、CD8＋T淋巴細胞比例比較對照組、M8組外周血CD4＋T淋巴細胞比例分別為38.12%±4.30%、48.09%±3.21%，CD8＋T淋巴細胞比例分別為（9.38%±1.01%、11.83%±1.30%，M8組外周血CD4＋、CD8＋T淋巴細胞比例均高于對照組（P均＜0.05）。

2.3 兩組血清IgA、IgG比較對照組、M8組血清IgA分別為（2.55±0.74）g/L、（3.28±0.90）g/L，血清IgG分別為（13.56±4.23）g/L、（17.30±3.37）g/L，M8組血清IgA、IgG均高于對照組（P均＜0.05）。

2.4 兩組血清IL-6比較對照組、M8組血清IL-6分別 為（161.87±65.48）pg/mL、（99.69±67.58）pg/mL，M8組血清IL-6低于對照組（P＜0.05）。

3 討論

人體正常的腸黏膜屏障包括機械屏障、化學屏障、免疫屏障和生物屏障，腸道微生物在維持腸黏膜屏障穩定、調節機體免疫以及抵御病原菌侵入方面均發揮重要作用［1，4］。腸道微生物對腸道屏障功能的影響主要包括以下幾個方面：①調節腸上皮細胞系的分化及發育，進而影響其免疫功能；②改善及維持腸黏膜層的保護性作用；③調節Paneth細胞分泌抗菌肽，維持菌群的動態平衡，從而提供一個綜合的物理抗菌屏障，以防止病原菌的附著及侵入［11-12］。健康情況下，腸道屏障允許水溶液和免疫調節因子通過，可以有效防止病原菌入侵和毒素吸收；而當機體遭受燒（創）傷、大手術等情況時，創傷應激反應可導致腸道黏膜屏障破壞，致病菌和毒素穿過腸黏膜屏障進入人體，并通過血液循環侵害重要組織器官，嚴重影響機體健康［1，13］。研究表明，重度燒傷免疫失調與腸道菌群紊亂密切相關：一方面，重度燒傷能夠導致腸道菌群紊亂，誘導炎癥因子分泌，導致腸黏膜屏障損壞，進而加重病情；另一方面，腸道菌群紊亂及屏障受損可增加重度燒傷發生全身炎癥反應及多器官功能障礙的概率，進一步加重病情［14］。臨床重度燒傷治療中，在積極的創面處理原發病和臟器支持治療基礎上，深入了解益生菌的免疫失調及其調控機制，對提高重度燒傷的救治水平和改善預后具有重要意義［15］。

重度燒傷因應激反應、血液濃縮等原因，早期多出現血液白細胞總數和中性粒細胞百分比急劇增高，少量患者因白細胞附壁，可能會出現血液白細胞總數及中性粒細胞百分比略有下降，但短時間內可恢復正常。重度燒傷患者血液中白細胞總數及中性粒細胞百分比隨病程進展逐漸升高，這可能與應激反應、感染等因素有關。機體適當的炎癥反應可防止病原菌及其產生的毒素侵入機體，但過度的炎癥反應可引發全身炎癥反應綜合征或多器官功能障礙，甚至危及生命。研究顯示，應用益生菌制劑對維持正常有效的白細胞計數、中性粒細胞百分比具有重要作用［8］。本研究發現，與常規治療相比，重度燒傷患者口服乳雙歧桿菌M8能維持血液白細胞總數和中西粒細胞百分比在正常有效的范圍，可能有減輕燒傷后的炎癥反應和機體的損傷的作用。

重度燒傷作為一種應激性打擊可致應激激素異常分泌，引起免疫細胞功能改變和免疫活性物質水平上調或下調，導致免疫功能紊亂，其中免疫紊亂以細胞免疫功能受損為主，亦可累及體液免疫。細胞免疫是以T淋巴細胞為核心的免疫應答，重度燒傷后T淋巴細胞分化、增殖為免疫T淋巴細胞，具體表現為外周血T淋巴細胞數量減少，CD4＋T淋巴細胞和CD8＋T淋巴細胞比例下降，提示T淋巴細胞的功能受到抑制，進而導致機體對感染、膿毒癥和多器官衰竭的易感性增強［3］。王鄉寧等［6］研究發現，重度燒傷患者應用益生菌聯合谷氨酰胺的腸內營養可改善患者營養狀況，提高患者免疫功能，縮短創面愈合時間。翟云等［10］通過對免疫抑制模型大鼠灌服乳雙歧桿菌M8發現，與模型對照組比較，高劑量乳雙歧桿菌M8組大鼠全血CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞百分比明顯升高，提示乳雙歧桿菌M8可提高免疫抑制模型大鼠的特異性和非特異性免疫應答調控能力。本研究也有相似的發現，M8組在治療14 d后，外周血CD4＋T淋巴細胞、CD8＋T淋巴細胞百分比均高于對照組，提示乳雙歧桿菌M8對調節重度燒傷的細胞免疫具有積極作用。

T淋巴細胞的功能受到抑制還反映在分泌細胞因子的能力上。燒傷后，T淋巴細胞分泌具有免疫促進作用的IFNγ、IL-2等因子的水平下降，分泌具有免疫抑制作用的IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等細胞因子的水平上升，這是導致傷后免疫功能抑制的重要機制，與燒傷的嚴重程度密切相關［3］。諸多細胞因子通過彼此消長以及與免疫細胞間的相互作用，使機體形成一個復雜而有序的免疫調控網絡。嚴重燒傷后上述細胞因子的合成、分泌、儲存和釋放水平發生改變，使得原先完整有序的免疫調控網絡的平衡關系被破壞，呈現細胞因子和炎癥介質的過度表達以及免疫應答和調控相關因子的分泌受抑，從而形成了燒傷后免疫功能紊亂的病理生理基礎［3］。本研究發現，乳雙歧桿菌M8治療重度燒傷能夠降低血液IL-6濃度，對糾正其免疫失調具有一定的作用。

體液免疫是由特異性抗體起主要作用的免疫應答反應。機體免疫系統可合成、分泌IgA、IgG等多種免疫球蛋白，而這些蛋白可識別并特異性結合抗原，進而介導免疫細胞活性，增強吞噬細胞的吞噬功能，其中IgA的特異性免疫功能尤為重要。一些研究表明，益生菌可以改善腸道微生物群，減少細菌移位，增加IgA分泌，進而達到免疫調節的作用［16-17］。我們的研究也發現，口服乳雙歧桿菌M8可上調重度燒傷患者血清IgA、IgG水平，進而可能達到部分的免疫調節作用。

綜上所述，乳雙歧桿菌M8能夠通過改善重度燒傷患者腸道微生物群紊亂、增強傷后腸道屏障來減輕患者炎癥反應，以達到免疫調節的作用，其可能對改善燒傷患者的治療及愈后具有一定的積極意義。本研究尚存一些不足：首先，本研究只觀察了乳雙歧桿菌M8對重度燒傷患者免疫功能的調控作用，沒有將其與市面其他雙歧桿菌產品進行對比，今后將與其他產品進行對比研究；其次，本研究中采用乳雙歧桿菌M8單一益生菌治療重度燒傷患者，沒有探究是否多種益生菌聯合使用或聯合益生元是否具有更好的效果；再次，雖然大部分研究表明益生菌在重度燒傷中有積極的作用，但是也有研究發現益生菌應用僅可以糾正燒傷患者腹瀉、吸收不良等癥狀，而與燒傷患者預后改善無關，并且有導致菌群紊亂的風險［18］，因此燒傷患者常規使用益生菌還需進一步研究。