高效液相色譜法測定油性抑菌產品中三氯生含量

張學清

（江西康美醫藥保健品有限公司，江西樟樹 331200）

三氯生，化學名為二氯苯氧氯酚，對真菌、酵母及革蘭氏陽性菌等都有殺滅及抑制作用[1]。相比傳統的殺菌和抑菌劑，三氯生具有優越的配伍性，是目前廣泛用于個人護理用品的高效、新型消毒劑，如抑菌產品。為了更安全地使用抑菌產品，《化妝品衛生規范》對三氯生在相關產品中允許的使用濃度有明確規定。

抑菌產品中三氯生的定量檢測主要采用儀器檢測法[2]。由于受產品中其他原輔料的影響，分光光度法檢測抑菌液中三氯生含量的方法準確度較低。高效液相色譜法具有方便、快速、簡單等優勢，已報道的檢測方法缺少對油性抑菌產品的針對性說明，盡管有采用離心、萃取的方法對樣品進行前處理的報道，但對設備和操作的要求較高，其準確性和重復性也存在問題[3]。

為了找到一種可以同時檢測常規抑菌產品和油性產品中三氯生的高效液相色譜檢測方法，本文對提取溶劑、色譜條件等進行了優化。

1 材料與方法

1.1 儀器

Essentia LC-16型高效液相色譜儀，日本島津公司；KQ-100DE型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；FA1104N型電子天平，上海科曉科學儀器有限公司；UV-2450型紫外分光光度計，日本島津公司；ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美國安捷倫公司。

1.2 試劑

四氫呋喃，分析級，西隴化工股份有限公司；乙腈，色譜級，福州奧研實驗器材有限責任公司；純化水，符合《分析實驗室用水規格和試驗方法》（GB/T 6682—2008）的二級水[4]；三氯生對照品，以C12H7Cl3O2計，含量為100.0%，中國食品藥品檢定研究院。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

流動相為75%的乙腈水溶液，檢測波長為281 nm，柱溫為35 ℃，流速為1 mL/min，進樣量為10 μL。

1.3.2 標準工作曲線

以四氫呋喃為溶劑，精確（精確至0.1mg）稱量適量的三氯生對照品，溶解配制成1 mg/mL的標準溶液。以1 mg/mL的三氯生標準溶液為原液，通過稀釋配制成0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.30 mg/mL、0.40 mg/mL和0.50 mg/mL的標準溶液，繪制標準工作曲線。

1.3.3 供試品檢測

84種抑菌液產品，市售普通品牌。精確稱取5 mg（精確至0.1 mg）的抑菌液于10 mL容量瓶中，以四氫呋喃溶解、定容后于清洗器中超聲10～20 min，按照1.3.1項下的方法檢測。

2 結果與分析

2.1 檢測波長的選擇

使用紫外分光光度計檢測三氯生標準品的最大吸收波長為281 nm，因此液相檢測波長確定為281 nm。

2.2 樣品溶劑的選擇

用不同的溶劑溶解抑菌液，觀察發現，油性抑菌液在甲醇、乙醇、乙腈等溶劑中不能全溶，出現明顯分層；在乙酸乙酯和四氫呋喃中可以全溶。考慮到液相色譜柱的損耗問題，四氫呋喃作溶劑較佳。

2.3 流動相的選擇

檢測發現，在其他條件相同的情況下，乙腈和水的體積比=3∶1時，出峰時間和分離度較佳，而乙腈和水的體積比=2∶1時主峰的分離度較差，因此流動相確定為75%的乙腈水溶液。

2.4 標準曲線的繪制與檢出限

在檢測條件下，三氯生的液相檢測標準色譜圖如圖1所示，主峰的出峰時間在6.5 min。以濃度（mg/mL）為橫坐標，峰面積（×106）為縱坐標作圖，得出三氯生的回歸方程式為Y=10.05X+0.033，r2=0.999 7，通過計算可得出濃度（以百分含量計）與峰面積的回歸方程式為Y=9.95×10-11X-3.70×10-6，見圖2。按照S/N=3計算，該檢測方法的檢出限為0.20 μg/L。

圖1 抑菌產品中三氯生標準色譜圖

圖2 三氯生標準曲線

2.5 回收率

準確稱取0.5 g抑菌液（油性）樣本3份，分別加入三氯生含量為100.1 mg/L、250.1 mg/L和480.5 mg/L的標準液，每個樣品重復檢測6次，檢測結果見表1。

表1 抑菌液（油性）中三氯生的加標回收率

2.6 樣品測定

本實驗選擇的抑菌產品包括抑菌洗滌液、抑菌凝露、抑菌護理液、抑菌泡沫劑、抑菌液（油性）、抑菌噴劑和抑菌凝膠，共計84個樣品，按照上述方法測定其中的三氯生含量，見表2。結果發現，抑菌洗滌液中沒有檢測出三氯生，抑菌液（油性）和抑菌凝膠中的三氯生檢出率超過15%，分別為21.4%和16.7%；所有樣品中的三氯生含量低于0.3%。

表2 抑菌產品中三氯生的檢出情況表

3 結論

本方法快速、簡便、準確，對三氯生加標含量為0.10～0.50 mg/mL的樣品檢測回收率在95%～102%，RSD為1.08%～1.35%（n=6），適合抑菌產品中三氯生的測定。