接骨木莓運動營養粉的抗疲勞功效研究

劉京，張璐*，張勝楠，張閃閃，史東林，謝鳳玲，劉素穩

（1.石家莊以嶺藥業股份有限公司，河北石家莊 050000；2.河北體育學院，河北石家莊 050000；3.河北科技師范學院，河北秦皇島 066000）

接骨木屬是忍冬科小喬木或落葉灌木，該屬植物在全世界主要生長在溫帶和亞熱帶，約20多種，在我國分布有5、6種。接骨木屬植物中很多種類具有非常高的美容價值、食用價值和藥用價值[1]。接骨木的食用在我國古籍中就有記載，但并不普遍，西方國家以其花、果入食較為常見。接骨木的果實通常被稱為接骨木莓，可開發利用為具有極高價值的功能性產品，公元前4世紀古希臘醫師希波克拉底就一直使用接骨木莓來治療感冒和發燒[2]。接骨木莓傳統上用于治療流感、普通感冒、糖尿病和其他疾病，有關接骨木莓在運動中的作用研究卻很少。

運動性疲勞是機體出現的氧化應激反應，是運動中常見的生理現象，通過補充合理的藥物或營養補劑可以延緩疲勞的產生，是緩解運動性疲勞的有效方法[3]。疲勞可分為外周疲勞與中樞疲勞，最直接的表現是運動耐力的下降，因此可以通過動物耐力實驗結合生化指標評價受試物的抗疲勞能力。

本研究采用接骨木莓果粉、食用葡萄糖、水解乳清蛋白等原料制備運動營養粉，并建立運動性疲勞小鼠模型，通過記錄小鼠的負重游泳時間以及檢測小鼠肝糖原和血清尿素等生化指標，研究接骨木莓運動營養粉的抗疲勞功效，以期為以接骨木莓為原料的抗疲勞類保健食品的開發提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

接骨木莓運動營養粉含接骨木莓果粉（含量約1.5%）、食用葡萄糖（含量約22%）、水解乳清蛋白（含量約4%）等原料，由實驗室制作提供，置于避光干燥處，保質期24個月。

1.2 實驗動物

SPF級KM種小鼠，體重16～18 g，144只，雄性。共分為三批分別進行負重游泳實驗、血清尿素檢測、肝糖原檢測，每批隨機分成4組，每組12只。

1.3 實驗劑量

接骨木莓運動營養粉的服用劑量以成人（按60 kg體重計）每日10.0 g為基準，相當于0.167 g/（kg BW·d）。依據《保健食品檢驗與評價技術規范（2003版）》（新版尚未頒布，本文僅參考其評價方法，研究結果不作為產品申報依據），實驗設置基準服用劑量的5倍、10倍、30倍為低、中、高劑量組，即0.83 g/（kg BW·d）、1.67 g/（kg BW·d）、5.00 g/（kg BW·d）。每日灌胃一次受試物，連續灌胃45 d。同時設置一個空白對照組[0 g/（kg BW·d）]，用去離子水代替受試物，每日灌胃量與其他各劑量組相同。各劑量組均正常給予維持飼料。

1.4 儀器與試劑

UV-1800紫外可見分光光度計，日本島津公司；3100全自動生化分析儀，日本日立公司；JA21002、MP3KC電子天平，上海舜宇恒平科學儀器有限公司。

尿素試劑盒，批號201041，中生北控生物科技股份有限公司；三氯乙酸、葡萄糖、硫酸、乙醇、蒽酮、硫脲，分析純，國藥集團化學試劑有限公司。

1.5 實驗方法

根據《保健食品檢驗與評價技術規范（2003版）》相關要求，開展以下實驗。

1.5.1 負重游泳實驗

末次灌胃受試物并間隔30 min后，將尾部負重5%體重鉛絲的小鼠置于水深30 cm、水溫25 ℃的游泳箱中。小鼠的負重游泳時間為從游泳開始到死亡。

1.5.2 血清尿素測定

末次灌胃受試物并間隔30 min后，將小鼠置于水溫30 ℃的水中游泳90 min，靜息60 min后立即拔出眼球采血0.5 mL。置于4 ℃冰箱約3 h，待血凝固后3 000 r/min離心15 min，取上層血清，生化分析儀上測定。

1.5.3 肝糖原測定（蒽酮法）

末次灌胃受試物并間隔30 min后，將小鼠處死取出肝臟，并用生理鹽水漂洗干凈，用濾紙吸干水分；準確稱取肝臟100 mg，加入4.0 mL TCA，震蕩1 min，混勻后倒入離心管，3 000 r/min離心15 min；取上清液0.5 mL，加入2 mL 95%乙醇，混合均勻后用塞子塞上，室溫下放置過夜。3 000 r/min離心15 min，棄去上清液后使試管倒置10 min。

用2.00 mL去離子水溶解糖原進行測定。取0.25 mL待測液和0.25 mL去離子水于試管中，混合均勻。標準管：吸0.125 mL葡萄糖標準液（50 mg/dL）、0.375 mL去離子水于試管中，混合均勻。

取2.5 mL蒽酮試劑用力加入各試管，沸水浴15 min，轉移到冰水浴中進行冷卻，然后在620 nm波長下測定吸光度。按照式（1）計算肝糖原含量。

式中：肝糖原含量，mg/100 g肝；DU和DS分別為樣品和標準品的吸光度；V為提取液的體積，mL；G為肝臟重量，g；0.062 5為0.125 mL葡萄糖標準液中的葡萄糖含量；16為稀釋倍數；0.9為將葡萄糖換算成糖原的系數。

1.6 數據處理

用SPSS 17.0軟件進行數據分析，結果以均值±標準差表示。采用單因素方差分析法進行分析，P＜0.05表示有顯著性差異。

2 結果與分析

2.1 接骨木莓運動營養粉對小鼠體重的影響

由表1可見，與空白對照組相比較，三批實驗動物各劑量組小鼠的初始體重均無顯著性差異（P＞0.05），所選小鼠符合實驗要求。

表1 各組小鼠的初始體重

由表2可見，灌胃小鼠不同劑量的接骨木莓運動營養粉45 d后，與空白對照組相比較，三批實驗動物各劑量組小鼠體重均無顯著性差異（P＞0.05），表明接骨木莓運動營養粉對小鼠體重增長無不良影響。

表2 接骨木莓運動營養粉對小鼠體重的影響

2.2 接骨木莓運動營養粉對小鼠負重游泳時間的影響

小鼠負重游泳力竭時間的長短是評價受試樣品抗疲勞能力的最直接指標。由表3可見，灌胃小鼠不同劑量的接骨木莓運動營養粉45 d后，與空白對照組相比，高劑量組小鼠負重游泳的時間明顯高于空白對照組（P＜0.05），表明高劑量的接骨木莓運動營養粉有助于增強運動耐力，延長運動的時間。

表3 不同劑量接骨木莓運動營養粉對小鼠負重游泳時間的影響

2.3 接骨木莓運動營養粉對小鼠游泳后血清尿素水平的影響

當機體在劇烈運動時，血糖供應不足，為了維持運動，體內蛋白質和氨基酸分解代謝速度加快，致使體內尿素氮濃度增大，因此尿素氮含量可反映機體的疲勞程度[4]。由表4可見，灌胃小鼠不同劑量的接骨木莓運動營養粉45 d后，與空白對照組比較，高劑量組小鼠游泳后血清尿素含量顯著降低（P＜0.01），表明高劑量的接骨木莓運動營養粉可顯著減少運動時體內蛋白質的分解利用。

表4 不同劑量接骨木莓運動營養粉對小鼠游泳后血清尿素的影響

2.4 接骨木莓運動營養粉對小鼠肝糖原含量的影響

研究表明，運動后導致的體力消耗與肌糖原的消耗是同步的，為了維持運動狀態所需的血糖水平會持續消耗肝糖原，若體內肝糖原的儲備充足，則可以延遲疲勞出現的時間，因此肝糖原含量是衡量機體疲勞程度的重要指標[5]。由表5可見，灌胃小鼠不同劑量的接骨木莓運動營養粉45 d后，與空白對照組比，高劑量組小鼠肝糖原含量顯著升高（P＜0.01），說明接骨木莓運動營養粉能夠增加肝糖原的合成和/或減少運動時肝糖原的消耗，從而達到抗疲勞的目的。

表5 不同劑量接骨木莓運動營養粉對小鼠肝糖原含量的影響

3 結論

本研究考察了接骨木莓運動營養粉的抗運動性疲勞的活性。經口給予小鼠不同劑量的接骨木莓運動營養粉45 d后，其對小鼠體重增長無不良影響；與空白對照組比較，高劑量組能顯著延長小鼠的負重游泳時間，降低蛋白的分解作用，升高疲勞小鼠肝糖原含量，具有緩解體力疲勞的功效。