補(bǔ)腎法中藥調(diào)控ERK/MAPK信號通路對Aβ25-35誘導(dǎo)的阿爾茨海默病大鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用研究*

劉 爽 徐家淳 孫偉明 曹藝萌 王以申

（天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300250）

隨著社會人口老齡化急劇發(fā)展，阿爾茨海默病（AD）發(fā)病率呈明顯上升趨勢［1-2］。AD是以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和行為損害為特征的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。因此，AD患者極易發(fā)生跌倒等意外事故，繼而引發(fā)髖部骨折等一系列并發(fā)癥。同時，有認(rèn)知缺陷的AD患者患腦血管疾病的風(fēng)險明顯增加［3-4］。既往報告中指出大約2/3的AD患者為女性［5］。表明AD發(fā)病與中老年女性雌激素水平變化密切相關(guān)［6］。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，雌激素E2水平降低后會導(dǎo)致胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK/MAPK）信號通路中各關(guān)鍵因子活化水平下降，進(jìn)而激活一系列下游效應(yīng)因子加重AD的病理變化［7］。基于此，本研究以ERK/MAPK信號通路關(guān)鍵靶點p-ERK1/2為切入點，探討補(bǔ)腎法中藥治療AD的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選擇SPF級3月齡雌性SD大鼠36只，體質(zhì)量200～300 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2012-0001。所有大鼠在SPF級隔離飼養(yǎng)環(huán)境下飼養(yǎng)，給予充足的飼料和飲水，22℃，光照為12 h光照/黑暗循環(huán)。

1.2 藥物及試劑

1）補(bǔ)腎法中藥制備：組成為淫羊藿10 g，補(bǔ)骨脂5 g，制首烏5 g，女貞子10 g（購于天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥房）。將上述藥物150 g（共5劑）混勻，加1 000 mL蒸餾水浸泡12 h，再加水1 000 mL，以80℃超聲30 min，過濾、提取，反復(fù)3次，混合濾液，以100℃水浴加熱，濃縮至500 mL，最終生藥質(zhì)量濃度為0.3 g/mL。藥液常溫冷卻后，置4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?）Aβ25-35的制備：無菌生理鹽水將Aβ25-35（Sigma公司）稀釋成4 μg/μL，37℃孵育96 h變?yōu)榫奂癄顟B(tài)備用。

1.3 實驗儀器

Morris水迷宮實驗裝置（北京碩林苑科技有限公司），SDS-PAGE電泳儀和轉(zhuǎn)膜儀（BIO-RAD公司），凝膠成像系統(tǒng)（美國Bio Image system Gene公司），大鼠腦立體定位儀（BENCHmark公司）。……