淺談動物疫病實驗室診斷與防控實用技術

羅占華

（湖南省常德市鼎城區畜牧水產事務中心，湖南 常德 415000）

為保證動物疫病防控質量與效果，彌補過往防控存在的各類問題，動物實驗室診斷具有的價值隨之上升，依據實驗室可以正確地診斷各類疫病問題，結合疫病情況、傳染源、影響范圍等來判斷疫病防控策略，以此來逐步減少動物疫病出現概率，避免養殖業社會效益、經濟效益或者生態效益等受到不必要的影響。

1.動物疫病實驗室診斷的重要價值

從衛生監督層面而言，隨著動物疫病復雜程度逐漸提高，傳統臨床觀察和識別形式已經無法讓現代動物疫情監測、診斷需求得到滿足。再者居民生活質量逐步增強，人們對于飲食衛生的關注和重視程度逐步提高，特別是動物肉制品等層面內容，這也進一步促使實驗室疫病監測價值提升。并且，目前大部分實驗室都肩負著動物疫病診斷與監測工作，這種診斷監測與防疫工作密切相關，從樣品采集、化學診斷再到數據挖掘等整個流程均由實驗室負責，能夠第一時間發現、了解疫情。

2.常見動物疫病的實驗室診斷

動物疾病實驗室診斷是快速掌握動物是否存在疫病的重要手段，也是防止有問題動物肉流入市場的關鍵措施。在診斷過程中針對不同動物以及疫病選取的診斷方式、診斷技術也各不相同，以下針對目前較為常見的疾病診斷進行簡要描述。

2.1 黃疸、黃脂肉診斷

黃疸、黃脂肉是實驗室在落實動物疫病診斷中兩種較為常見疾病，豬黃疸以及黃脂肉對于食用者安全會產生一定影響，兩者診斷可以同時進行。常見診斷方式：

在明確監測任務之后采集脂肪樣本并徹底剪碎放置到相應試管內，加入5%5ML的氫氧化鈉溶液將其適當震蕩，之后煮沸，時間為1min，利用流水冷卻試管，放入5ml的乙醚、膽汁色素，進一步震蕩試管，后在常溫環境中放置一定時間，等到溶液狀態逐步穩定之后觀察最上層乙醚當中是否融入胡蘿卜素。如果其顏色變為黃色，則可判定其為黃脂肉病癥，氫氧化鈉的顏色轉變成為黃色則為黃疸，上下層顏色全部變為黃色，即為黃脂肉、黃疸病癥合并存在。

2.2 羊瘟診斷

羊瘟作為傳染力度較高、影響范圍較遠的疫病，羊瘟常見、使用價值較高的診斷方式為熒光抗體方式。常見診斷方式：

選擇已經死亡或者瀕臨死亡的新鮮羊，采集扁桃體組織和腎臟，采集之后樣本要適當展開滅菌操作，將其冰凍后切片，放置在實驗室內載玻片當中，經過自然干燥并進一步處理，即加入純丙酮內，放置15min左右，全面結束之后取出組織切片清洗，放置在自然環境中進行干燥處理。后在已經全面處理完成的組織切片上適當滴入2-3滴熒光，放置在自然環境下，溫度保持在37℃、時間30rain，以此來保證熒光抗體可以得到全面吸收。需要注意，在染色時要盡量避免染色液干涸。染色之后可以利用PBS液浸泡、沖洗組織切片，浸泡時間2rain、次數為3次。將其取出在室溫環境下放置，半干之后展開鏡檢，觀察切片的變化，如果切片當中有較為明顯上皮細胞胞漿，并且顏色為翠綠色、有著強烈熒光表現，組織細胞有著清晰形態則為陽性，反之則屬于陰性。

2.3 羊丹毒診斷

羊丹毒疫病類型有著一定差異，在診斷監測過程中樣品采集也需要差異化展開，如敗血癥羊丹毒實驗室診斷過程中采集的樣品主要為患病動物肝腎組織、心血；患病動物病癥變現與慢性型羊丹毒疫病相關，樣品采集部位主要為腫脹位置組織。常見診斷方式：

首先展開涂片鏡檢，主要是利用顯微鏡針對樣品病變菌種展開觀察分析，觀察指標為小桿菌分布數量、分布狀態，需重點關注白細胞周圍菌體，以此來增強診斷質量與價值。其中脾腎抹片菌體監測方法使用精準度更高。接著進行分離培養。如果實驗室診斷過程中選擇的樣品屬于新鮮的材料，則培養基條件溫度盡量保持在37℃，培養時間為1-2d，此時培養基當中已經生長一定菌落，菌落顏色為透明，形狀類似于露珠。此類菌落長勢不夠良好，并且肉湯顏色會有一定渾濁，有少數白色沉淀物。最后動物接種，主要是結合疹塊情況來加入10倍比例生理鹽水，制作組織懸液，為鴿子注射組織懸液0.5-1ml；小白鼠則需要注射0.2ml組織懸液，之后結合懸液注射量取出0.5ml和0.1ml的菌液，并繼續向鴿子或者小白鼠注射。如果鴿子或者小白鼠在接種懸液3-4h之后發生死亡問題則進行涂片制作，把鴿子、小白鼠腎臟器官、心血當做關鍵材料制作相應涂片，展開鏡檢，觀察當中是否有羊丹毒桿菌。

2.4 布魯氏菌病診斷

布魯氏菌病是一種人、禽畜共患的傳染疫病，屬于重大的動物疫病，對于人類安全以及動物養殖安全有著較為顯著影響，常見診斷檢驗方式：

一是虎紅平板凝集診斷檢驗。主要是取虎紅平板抗原以及血清各0.3ml左右，將其滴入到撥片當中均勻混合，4-10min之間出現凝集者則可判定為陽性?；⒓t平板抗原是利用虎紅抗原細菌染色呈酸性的緩沖平板抗原（ph3.65左右），能夠充分讓非特異性反應IgM受到抑制、促使異性抗體IgG活性不斷增強，反應靈活、敏感并且穩定，特異性明顯優于其他類型實驗。并且異性抗體IgG如果消失，實驗結果則會轉變為陰性。

2.5 非洲豬瘟實驗室監測診斷

非洲豬瘟與其他類型豬疾病診斷有著一定相似性，特別是豬丹毒以及藍耳病等，鑒別與診斷方式主要就是依據病原學、血清學、臨床病癥展開診斷。診斷方式：

一是病原學診斷，是利用熒光定量檢測方式，采集患豬淋巴結、脾臟、扁桃體以及肝臟等部位，制作凍切片，與其相關內源性抗原能夠充分結合非洲豬瘟熒光抗體，結合顯微鏡能夠將其直觀的顯示。

二是實驗室觀察診斷。主要通過觀察來掌握非洲豬瘟病癥，可以全面區分非洲豬瘟與藍耳病等病癥區別，其中非洲豬瘟在出現之后，肉豬會出現行動遲緩、互相對桑，皮膚、漿膜、黏膜以及實質的器官可能會發生出血改變，典型特征為盲腸與結腸黏膜位置存在紐扣狀的潰瘍，淋巴切開之后會出現大理石病變情況。而藍耳病癥發病之后患豬則會發生站立不穩、體溫上升情況，病豬解刨之后可以發現心葉變長、肺葉尖、表面有著花紋，這也是藍耳病較為典型體現。

3.動物疫病防控實用技術

動物疫病防控作為避免疫病繼續在區域內傳播的關鍵手段，通常疫病防控需要從養殖場管理、動物引進管理、疫苗免疫接種、做好驅蟲工作、疫病監測與診斷等幾個方面展開。

3.1 做好養殖場管理

養殖場管理主要分為兩個方面，一方面是動物養殖場選址以及養殖場布局管理，另一方面則是養殖場環境管理。選址和布局管理：一是定養殖場位置需要遠離居民居住區域、生活飲用水源區域以及醫院、學校等各類場所，根據國務院獸醫主管部門所制定的相關標準，養殖場距離此類區域的位置需要保持1000m往上；二是養殖場內部需要設立污水、污染物、染病動物、病死動物等相關無害化處理設備，并嚴格區分養殖場生活區域以及生產區域，養殖場生產區域附近需要設立消毒通道，盡量保證養殖場內部布局有著科學化特征，符合動物養殖需求。養殖場環境管理：一是在動物養殖過程中，需要做好場內衛生管理工作，保證場內與場外欄舍的清潔度，每天清掃的垃圾需要通過養殖場內處理設備積極展開無害化處理；二是制定消毒計劃，定期落實養殖場消毒工作，每3月針對消毒藥物進行更換，避免病原微生物出現耐藥問題。并結合消毒要求針對進出人員以及車輛展開消毒；四是做好滅鼠、滅蚊等各項工作。

3.2 動物引進管理

區域農戶在利用購買、引進等各類手段提升養殖區域禽畜養殖數量和經濟效益時，不僅需要考量動物品種、動物對于環境適應性，還需要避免攜帶有疫病的動物進入到養殖區域內。一方面，如果必須要從外部引入禽畜，則需要從未出現過疫病的區域進行購買。購買之后積極展開禽畜檢疫以及臨床觀察工作，保證禽畜符合要求之后，為其注射各類疫苗，展開體表消毒、驅蟲后才可將其引入到區域養殖場內部。全面運到養殖場內部之后，需要將其與原有禽畜隔離養殖2月左右，積極觀禽畜健康狀態以及自身情況，確保健康之后，方可將其與原有禽畜混合養殖。另一方面，需要盡量避免從外部引入不明的禽畜，降低禽畜引進頻率以及次數，在區域養殖場內部構建一個科學、穩定自繁殖養殖體系。已經發生過疫病養殖場在引進動物時，需要針對養殖場展開全面消毒，并重點監測養殖場各個區域安全程度。

3.3 動物疫病免疫接種

每個養殖場需要結合所養殖的動物、疫病發生情況、動物數量等來制定與本場相符合的疫病免疫方案，并將其嚴格落實。以牛、羊養殖為例，一般情況下，需要在犢牛百日時展開初次免疫，接種牛口蹄疫苗，一個月之后進行再次接種，強化免疫能力，后續春季、秋季等各免疫接種一次；每年3月份與4月份需要接種氣腫疽疫苗、牛出敗疫苗各接種一次。對于羊口蹄疾病則在羔羊45日齡時接種疫苗，一月后進行強化接種，后續在春季與秋季分別接種一次；每年羊痘疫苗接種一次；2月底－3月初、9月份接種2次四聯疫苗（防治猝狙、快疫、羔羊痢疾、腸毒血證），接種過程中無論羊只多大，都可在其皮下或者肌肉當中注射疫苗，疫苗量為5ml。依據疫病種類、動物種類為其提供針對性疫苗，能夠極大地降低疫病發生率，對于疫病防治有著十分重要的幫助。

3.4 做好驅蟲工作

動物驅蟲作為較為關鍵疫病防控手段，驅蟲工作需要定時展開，結合不同季節選擇針對性驅蟲藥物。每次驅蟲工作過程中需要全場同時進行，避免驅蟲不夠徹底而發生互相感染以及重復感染問題。驅蟲次數一般為兩月一次，每次驅蟲后間隔7d，再投入第二次驅蟲藥物。需要注意，在驅蟲過程中要重點關注驅蟲藥物、驅蟲時間、藥物計量等，例如：在利用藥浴技術驅蚧螨、虱時，需要盡量選擇在天氣晴朗時間進行，保證所有動物都可被均勻地涂抹上相應藥物；驅除線蟲、絳蟲過程中則可使用阿苯達唑，（生牛藥物計量保持在15±5mg/kg；生豬藥物在7.5±2.5mg/kg；羊計量在10±5mg/kg）；去除肝片吸蟲過程中則可選取硝氯酚，計量一般保持在3～8mg/kg。禽畜驅蟲之后半個月內的糞便需要全面集中在一起，將其密封展開無害化、發酵處理，以此來防止蟲害問題繼續擴展。

3.5 建立疫病預報機制

農戶所養殖的禽畜經常會在某一季節暴發疫病問題，所以需要結合疫病暴發情況展開預報工作。由于禽畜傳染性疾病極易受到外界各類因素限制和影響，需要提高關注力度，例如：在每年6-8月份時期正是炭疽病、豬姜片蟲吸蟲等病癥高發時期，如果此時氣候出現多雨、高溫現象則極易造成傳染范圍增加；進入到7-10月份之后，受到風的影響，口蹄疫傳播強度會不斷提高。因此，需要針對口蹄疫傳播情況展開預警工作。獸醫人員需要提前依據網絡、實地走訪等各類手段針對這一季節常見疫病展開宣傳，并告知區域養殖戶在這一時期需要接種的疫苗、消毒工作開展形式等，將預警工作全面落實，以此來避免病毒在區域內部流行。農戶在養殖過程中一旦發現疫病，如非洲豬瘟、牛瘟、狂犬病、口蹄疫、禽流感、牛瘟等各類疫病時也需要積極向上級部門匯報。由上級部門下派獸醫團隊和工作小組，在第一時間利用科學化、高效化的疫病防控技術和防控方案，針對屠宰場展開監測，把疫病影響最大化的降低，讓養殖人員經濟損失可以全面減少。

3.6 增強疫病診斷力度

農業部門所頒發的《國家動物疫病監測計劃》當中精準表明，我國各個區域需要結合疫病發生狀況和情況，積極落實動物疫病監測工作。在實際開展中，可以結合動物疫病癥狀診斷、臨床癥狀以及疫病病理學改變、疫病流行學調查等展開疫病診斷。診斷過程中，需要基于病原學展開監測，從病料當中將致病病菌分離，依據致病病菌情況以及致病病菌的種類，判斷病料當中是否存在病毒感染、細菌感染或者寄生蟲感染問題。對于細菌性感染問題，則需要結合藥敏實驗來充分選取高敏抗生素展開科學化、針對性治療。寄生蟲診斷方法則主要為沉淀法，通過檢測動物糞便或者部分組織當中成蟲或者寄生蟲，判斷、評估動物是否受到寄生蟲感染，如果感染則可采取針對性手段來驅除寄生蟲。

4.結束語

綜上所述，在落實動物疫病防控過程中，將診斷技術以及防控技術當作基礎，可以讓疫病得到及時處理，避免疫病在區域內繼續的進行傳播。不過在實際展開診斷和防控過程中，并沒有適用性較強、與各個區域診斷和防控要求相符合技術，極易造成疫病防控質量、效果持續降低。為此，在未來仍舊需要對實驗室診斷以及動物防控實用性較強技術展開研究，不斷改善技術成熟度以及技術使用效果，盡量結合不同動物、疫病研發出針對性的防控技術，為養殖業健康、長期發展奠定良好基礎。