羊水染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應用

張慶娥 李敏(通信作者) 周月云 董晶晶

224007 鹽城市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，江蘇鹽城

染色體病在臨床中較為常見，通常是先天性染色體數(shù)目或結構異常(包括染色體片段缺失、重復和異位等)，新生兒發(fā)病后常伴多發(fā)畸形、智力低下等表現(xiàn)。染色體病會給胎兒及其家庭帶來較大影響，不利于胎兒健康和發(fā)育。通常染色體病可以通過產(chǎn)前檢查進行篩查，避免新生兒出生后攜帶此病。研究發(fā)現(xiàn)，染色體病病情較輕時，胎兒沒有明顯表現(xiàn)，不易被發(fā)現(xiàn)，一旦病情發(fā)展嚴重，胎兒可能尚未娩出就會死亡，即使分娩成功，也會在數(shù)小時內死亡[1-2]。染色體病篩查是產(chǎn)前檢查的重點內容，臨床方法較多，如紅細胞滲透、血紅蛋白電泳等。染色體病的產(chǎn)前診斷是胎兒出生前，在子宮內對胚胎的發(fā)育狀態(tài)進行檢測診斷，分析染色體核型，辨別染色體病患兒[3-4]。羊膜穿刺術進行染色體核型分析是預防和治療染色體疾病最經(jīng)濟可行的方法[5]。本研究探討羊水染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應用效果，報告如下。

資料與方法

選取2017年1月-2018年12月于鹽城市婦幼保健醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心進行產(chǎn)前體檢孕婦503例為研究對象。初產(chǎn)婦383 例，經(jīng)產(chǎn)婦220 例；年齡20～46 歲，平均(31.46±1.87)歲；孕周18～24 周，平均(22.03±1.26)周；孕次1～4次，平均(1.38±0.31)次。本次研究通過醫(yī)學倫理委員會批準。

納入標準：①育齡期女性；②孕婦在接受檢查診斷和隨訪調查期間，意識清晰、自主配合；③孕婦均有產(chǎn)前診斷指征[6]；④孕婦臨床資料完整，無中途退出情況；⑤孕婦對本研究知情同意。

排除指標：①合并惡性腫瘤者；②合并嚴重器質性病變者；③依從性差者；④有羊膜腔穿刺禁忌證的高齡孕婦，如先兆流產(chǎn)、有感染征象、術前2次測量體溫(腋溫)＞37.2°C、有出血傾向(血小板≤70×109/L，凝血功能異常)、中央性前置胎盤、前置或低置胎盤有出血現(xiàn)象；⑤有妊娠合并癥及產(chǎn)科并發(fā)癥的孕婦[7]。

方法：①羊膜穿刺術前，完善孕婦基本情況，包括血常規(guī)、血型、凝血四項(凝血酶原時間、纖維蛋白原時間、活化部分凝血活酶時間和凝血酶時間)、肝腎功能、乙肝兩對半檢查(乙型肝炎病毒表面抗原、乙型肝炎病毒表面抗體、乙型肝炎病毒e 抗原、乙型肝炎病毒e抗體、乙型肝炎病毒核心抗體)、丙型肝炎抗體、艾滋病抗體、快速血清反應素試驗、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗等多項檢查，結合產(chǎn)科超聲準確了解孕齡、胎兒數(shù)量、羊水量、胎盤位置等，確保羊水穿刺成功。②對孕婦進行羊水穿刺指導，指導孕婦排空膀胱，平躺于穿刺床上，雙手置于頭部兩側。彩色多普勒超聲常規(guī)檢查胎兒，確定穿刺部位、穿刺深度。確定針的角度和深度后，穿刺針以最快速度準確穿過腹壁和子宮肌層進入羊膜腔，拔出針芯。取羊水，控制量約2 mL，然后丟棄，另一注射器取羊水20 mL，并及時檢查。取針后，超聲再次觀察胎心率。抽取的羊水進行離心，羊水中細胞進行接種，按3∶1 的比例接種于Mc Coy's 5A 培養(yǎng)基和胎牛血清混合培養(yǎng)基中。③細胞原位培養(yǎng)，包括收集細胞、切片和G顯帶顯微鏡下核型分析。

觀察指標：①觀察分析羊水細胞正常和異常核型，對異常核型進行分類，主要包括染色體數(shù)目異常和染色體結構異常。異常核型占比=異常核型例數(shù)/染色體結構異常例數(shù)×100%。②觀察不同適應證羊膜穿刺術染色體檢查結果，記錄唐氏篩查高風險、無創(chuàng)胎兒DNA 高風險、高齡(預期年齡35歲)、B 超顯示多發(fā)畸形數(shù)目，陽性檢出率=不同適應證羊膜穿刺術染色體異常例數(shù)/不同適應證例數(shù)×100%。

統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)應用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件予以處理；計數(shù)資料以[n(%)]表示，比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

羊水細胞異常染色體核型：對503 例孕婦進行羊水穿刺，取足量羊水進行羊水培養(yǎng)，檢出異常核型66例，染色體數(shù)目異常55 例，染色體結構異常11 例。兩種異常類型比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 羊水細胞異常染色體核型[n(%)]

不同適應證羊膜穿刺術染色體檢查結果：唐氏篩查高風險70 例，異常4 例，陽性檢出率為5.71%；無創(chuàng)胎兒DNA 高風險85 例，異常例數(shù)38 例，陽性檢出率為44.71%；高齡171 例，異常例數(shù)12 例，陽性檢出率為7.02%；B 超異常45 例，異常例數(shù)4 例，陽性檢出率為8.89%；其他132 例，異常例數(shù)8 例，陽性檢出率為6.06%。見表2。

表2 不同適應證羊膜穿刺術染色體檢查結果分析[n(%)]

討 論

新生兒缺陷是指新生兒出生時存在的缺陷，包括身體結構和功能的異常。新生兒缺陷種類較多，如先天畸形、先天性代謝病、先天性智力低下等，誘發(fā)因素主要包括遺傳因素和環(huán)境因素，最常見的遺傳因素是染色體異常，積極采取有效措施預防和治療，才能實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育[8-9]。關于胎兒染色體病的檢查診斷是臨床研究中的重點內容，針對孕婦進行產(chǎn)前檢查，聯(lián)合應用血紅蛋白電泳法、羊水穿刺等可以得到較為準確的檢測結果。有學者提出，聯(lián)合應用核型分析檢查診斷，可有效分析胎兒染色體情況，檢測胎兒染色體是否存在異常，還可聯(lián)合影像學成像結果進一步觀察，判斷胎兒是否存在染色體疾病[10-11]。

羊水穿刺術提取羊水細胞進行染色體核型分析是產(chǎn)科中常見的優(yōu)生檢查方法，利用率相對較高，可以起到產(chǎn)前診斷的作用。羊水穿刺提取羊水細胞進行染色體核型分析操作相對簡單，準確率高，并發(fā)癥少[12]。在超聲穿刺的有效引導下，穿刺效果良好，無流產(chǎn)、感染、胎兒丟失等并發(fā)癥，充分保障了安全性。本研究結果顯示，共有66例胎兒屬于異常核型，異常率為13.12%，遠高于相關文獻數(shù)據(jù)，可能與樣本選取數(shù)量、地區(qū)差異等因素有關，亦與無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測篩查后羊膜穿刺術提高陽性率有關[13]。無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測高風險、B超異常、高齡等產(chǎn)前診斷指征的孕婦更易出現(xiàn)羊水細胞染色體核型異常，應加強上述產(chǎn)前診斷指征孕婦檢查，以便指導新生兒染色體病的防治工作。但無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測目前僅是接近于診斷的篩查，具有假陽性和假陰性。建議具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦，需慎重考慮，行羊水穿刺胎兒染色體核型分析，避免胎兒異常漏診[14]。

核型分析是細胞遺傳學的金標準，在產(chǎn)前診斷中占有一定地位，但也有其不足之處。常規(guī)核型分析能檢查出＞10 Mb 的異常，目前的高分辨核型，可檢出＞5 Mb 的異常，需要培養(yǎng)、分析，報告周期長，有培養(yǎng)失敗的風險。產(chǎn)前診斷技術近年來發(fā)展迅猛，更新快，已從傳統(tǒng)的核型分析到染色體微陣列技術及全外顯子技術。染色體微陣列技術可在全基因組內檢測100 Kb 的微重復和微缺失，不需要培養(yǎng)，出報告周期短，在產(chǎn)前診斷中應用越來越重要，特別是B超提示胎兒異常等染色體微陣列技術尤為重要[15]。

綜上所述，羊水染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中應用，可有效降低缺陷兒的出生率，提高生育質量，應用價值較高。