不同炮制方法對蘭州百合化學成分的影響＊

金 月，張 巖，趙海鷹，戴浩恩，史巧霞

（甘肅中醫藥大學附屬醫院制劑中心，甘肅 蘭州 730000）

百合來源于多年生植物卷丹（Lilium lancifolium Thunb），百合（L.brouni FE.Broun Var Viridulum Baker）和細葉百合（li Pumilum DC）的干燥肉質鱗葉，其性味甘、寒，歸心、肺經[1]，具有養陰清肺，清心安神之功效。臨床主要用于治療咳嗽吐血，虛煩不安，心慌驚悸等病癥[2]。據報道，百合鱗莖主要含黃酮、總皂苷、多酚、多糖等成分[3]，其中酚類具有抗菌、消炎、降壓、清熱解毒、利尿等作用，在抗氧化、抗癌方面有顯著效果，皂苷具有抗菌、抗炎、抗抑郁、抗氧化等作用，多糖具有抗腫瘤、提高免疫力、抗疲勞、降血糖等多種作用[4]。查閱文獻發現不同炮制方法會引起百合炮制前后化學成分如百合多糖、總磷脂等有效成分的變化，這會改變百合的藥理作用和臨床療效。文獻記載其主要炮制方法為蒸制、蒸焙、蜜制等方法[5]，以期改變百合的藥性及臨床療效。

百合品種較多，其中蘭州百合為百合科植物蘭州百合（Lilim dar）的干燥肉質鱗葉，主產甘肅蘭州、臨洮、臨夏等地[6]。蘭州百合作為中藥材百合的甘肅省地方習用品，收載于2009版《甘肅省中藥材標準》。蘭州百合是全國唯一食用甜百合，也是蘭州市乃至甘肅省的特色產業，蘭州百合已有400年的種植歷史，其味道甘甜鮮美，有“蘭州百合甲天下”的美譽[7]。目前對蘭州百合的研究主要集中在栽培、管理、采挖及加工等技術的研究，藥用方面的研究也集中在化學成分、藥理作用方面，缺乏炮制工藝方面的研究[8]。因此本文以不同方法炮制百合，并采用不同分析方法探討蘭州百合炮制后總黃酮、總皂苷、多酚、多糖等成分的含量變化，以期為蘭州百合的臨床應用提供理論依據。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器與試劑

UV-3300型紫外可見分光光度計（上海美普達儀器有限公司）；電子天平（CPA225D，Sartorius公司）；數控超聲波清洗器（KQ-500VDE型，昆山市超聲儀器有限公司）；數顯恒溫水浴鍋（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）；離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；旋轉蒸發儀（SHB-3A，鄭州杜甫儀器廠）。

蘆丁對照品（批號B20771；上海源葉生物科技有限公司），沒食子酸對照品（批號111539- 200001；中國食品藥品檢定研究院），薯蕷皂苷元對照品（批號110831- 201906；中國食品藥品檢定研究院），無水葡萄糖對照品（批號BW4009；上海源葉生物科技有限公司）

1.2 實驗藥材

蘭州百合，購自七里河區西果園，經醫院主任中藥師鑒定為百合科植物蘭州百合（Lilim dar）的干燥肉質鱗葉。藥用百合購自甘肅中醫藥大學附屬醫院中藥房，為百合（Lilium brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker）的干燥肉質鱗葉。

2 實驗方法與結果

2.1 蘭州百合的不同炮制品制備

取蘭州凈百合適量，按不同炮制方法炮制后測定水分，具體見表1。

表1 蘭州百合不同炮制方法及水分測定結果

2.2 不同標準曲線的制備

黃酮類化合物標準曲線的制備：精密稱取蘆丁對照品5.86 mg于25 mL容量瓶中，得濃度為0.234 4 mg/mL的對照品溶液，精密移取0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于10 mL容量瓶中，依次加入0.3 mL 5%NaNO2，5 min后再加入0.3 mLAl（NO3），3～5 min后再加入2.0 mL NaOH，50%乙醇定容至刻度。于510 nm下測定A值，得到標準曲線。類似的，按不同方法制備總皂苷、多酚、多糖的標準曲線，具體見表2。

表2 蘭州百合中不同化合物標準曲線的制備

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度考察

取不同對照品溶液重復測定6次，記錄A值，不同對照品的相對標準偏差（RSD），蘆丁、薯蕷皂苷元、沒食子酸、無水葡萄糖測得值RSD%分別為2.67%、2.99%、0.89%、0.83%，表明精密度良好。

2.3.2 穩定性考察

將樣品分別按各有效部位溶液制備方法制備供試品溶液，各樣品分別于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h測定A值，總黃酮、總皂苷、多酚、多糖含量RSD 值分別為1.08%、0.90%、2.42%、1.32%。結果表明各樣品溶液在24 h內基本穩定。

2.3.3 重復性考察

將樣品分別按各有效部位溶液制備方法制備供試品溶液，各平行制備6份，測定A值，總黃酮、總皂苷、多酚、多糖含量RSD值分別為1.61%、1.57%、2.22%、0.57%。結果表明各供試品溶液重復性良好。

2.3.4 加樣回收率

精密稱取已知含量的樣品各6份，分別精密加入樣品中蘆丁、沒食子酸、薯蕷皂苷元、無水葡萄糖對照品含量的100%對照品溶液，制備各供試品溶液，測定A，計算平均回收率及RSD。總黃酮、總皂苷、多酚、多糖平均回收率分別為98.3%、97.7%、98.8%、97.1%，RSD值分別為1.98%、2.71%、2.14%、1.42%。

2.3.5 水溶性浸出物

參照2020版《中國藥典》，取各供試品約2 g，精密稱定，置錐形瓶中加水50 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h，連接冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h，放冷，取下錐形瓶，密塞，再次稱重，用水補足減失重量，搖勻抽濾，量取續濾液20 mL，置于干燥至恒重的蒸發皿上，水浴蒸干，105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量（%）。

2.4 各成分的實驗測定結果

連續測定3批，測定結果采用均數±標準差，不同炮制品蘭州百合中的各類化合物的結果見表3。

表3 不同炮制品蘭州百合中的各類化合物的結果

2.5 方差分析及相關性分析

為清晰比較蘭州百合5種不同炮制方法、藥用百合之間化學成分的差異性，本實驗采用方差分析（ANOVA）進行兩兩比較，并繪制柱狀圖，見圖1，相關性分析見表4。

表4 樣品中化學成分含量的相關性分析

圖1 不同炮制品蘭州百合中化學成分的含量比較

由上述結果可知，總黃酮含量排序為：酒蒸＞藥用百合＞蜜炙＞烘干＞蒸焙＞曬干；總皂苷含量排序為：蜜炙＞蒸焙＞烘干＞曬干＞酒蒸＞藥用百合；多酚含量排序為：蜜炙＞藥用百合＞酒蒸＞曬干＞蒸焙＞烘干；多糖含量排序為：曬干＞烘干＞蜜炙＞酒蒸＞蒸焙＞藥用百合；水溶性浸出物含量排序為：蜜炙＞酒蒸＞蒸焙＞烘干＞曬干＞藥用百合。由兩兩比較結果可知，黃酮含量，蜜炙與烘干、藥用品間無統計學差異（P＞0.05）；多酚含量，曬干與蒸焙、酒蒸、烘干間無統計學差異（P＞0.05），酒蒸與曬干、蒸焙、藥用品間無統計學差異（P＞0.05），烘干與曬干、蒸焙間無統計學差異（P＞0.05），藥用品與蜜炙、酒蒸無統計學差異（P＞0.05）；其余皂苷、多糖、水溶性浸出物含量各組之間均有統計學差異（P＜0.05）。

利用相關分析去研究黃酮、皂苷、多酚、多糖、水溶性浸出物之間的相關關系，使用Pearson相關系數去表示相關關系的強弱情況。具體分析可知：黃酮與多糖之間呈現出顯著性（P=0.003＜0.01），相關系數值是-0.657，意味著黃酮與多糖之間有著負相關關系。皂苷與水溶性浸出物之間全部均呈現出顯著性（P=0＜0.01），相關系數值分別是0.831，意味著皂苷與水溶性浸出物之間有著正相關關系。其他項之間并無相關關系。

3 實驗結果與討論

百合在我國資源豐富，作為藥食兩用的中藥已在人們的日常餐桌和中醫臨床上廣泛應用，用不同的炮制方法炮制百合，不僅可以擴大百合的臨床使用，還可以更深入了解其有效成分的變化。本文采用曬干、烘干、蜜炙、蒸焙、酒蒸等傳統炮制工藝對蘭州百合進行炮制，并與藥用百合對比，研究其不同炮制品百合中的總黃酮、總皂苷、多酚、多糖等有效成分變化以及水溶性浸出物的差異，發現不同炮制品中的各類有效成分含量均有所變化，結果顯示總黃酮含量以酒蒸百合最高，總皂苷、多酚、水溶性浸出物含量均以蜜炙百合最高，而曬干百合中的多糖含量最高。

另一方面采用相關性分析方法發現黃酮與多糖之間呈現出統計學意義，黃酮與多糖之間有負相關關系,即黃酮含量越高，多糖含量越低。皂苷與水溶性浸出物之間呈現出統計學意義，皂苷與水溶性浸出物之間有正相關關系，即水溶性浸出物越高，皂苷含量越高。其他項之間并無相關關系。以上研究為蘭州百合的炮制提供理論依據，也為百合在中醫臨床的應用提供參考。