家畜口蹄疫的免疫抗體檢測(cè)方法

張 夢(mèng)

貴州省黔西南州興仁市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州黔西南 562300

口蹄疫主要發(fā)生于偶蹄動(dòng)物，因此家畜的發(fā)病概率較高，給養(yǎng)殖戶帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前該病主要發(fā)生在寒冷的冬季和初春，死亡率比較高，已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織認(rèn)定為烈性動(dòng)物傳染病。目前主要采用疫苗免疫來進(jìn)行該病的防控，借助于免疫抗體檢測(cè)能夠更準(zhǔn)確的掌握家畜的免疫效果，以便可以及時(shí)查漏補(bǔ)缺，降低口蹄疫對(duì)家畜的影響，保障養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益不受損害。

1 口蹄疫以及免疫抗體檢測(cè)概述

口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄動(dòng)物共患的急性、熱性、接觸性傳染病，在家畜養(yǎng)殖中，口蹄疫的發(fā)生以牛為首（外來種奶牛、黃牛、牦牛皆極易感染，水牛稍次），其次為豬，再次為綿羊、山羊和駱駝。其中犢牛和仔豬不但易感且死亡率也較高，而且口蹄疫的毒力強(qiáng)弱也會(huì)受到季節(jié)、氣溫、地理環(huán)境、自然條件等因素的影響，差異比較明顯，就當(dāng)前的獸醫(yī)臨床實(shí)踐來看，在口蹄疫流行的情況下，牛群的發(fā)病率為90%～100%，病毒通過豬3代后發(fā)病率高達(dá)50%～100%，而羊群發(fā)病率較低，為20%～50%，同樣癥狀也會(huì)比較輕。

在口蹄疫防控中所采取的主要手段就是疫苗免疫，已經(jīng)研發(fā)成功的口蹄疫疫苗種類主要包括常規(guī)滅活疫苗、基因工程疫苗、DNA 疫苗、合成肽疫苗、重組活載體疫苗、可飼疫苗等，其中滅活疫苗是我國重要采取的免疫措施，而我國實(shí)行的是強(qiáng)制免疫，每年都需要投入大量的人力、物力、財(cái)力等進(jìn)行免疫工作。但實(shí)際上，由于口蹄疫病毒的免疫原性比較弱，再加上受到其他多種因素的影響，因此，臨床中免疫效果不理想甚至免疫失敗的現(xiàn)象屢見不鮮。而免疫抗體檢測(cè)能夠充分掌握動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的抗體水平，從而更好的評(píng)估免疫工作的效果，對(duì)基層工作部門來說也能夠及時(shí)掌握免疫注射工作的成效，衡量區(qū)域內(nèi)的疫情風(fēng)險(xiǎn)水平等，從而做好該病的預(yù)防工作，降低口蹄疫對(duì)家畜養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的負(fù)面影響，為養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益獲得提供堅(jiān)實(shí)的保障[1]。

2 家畜口蹄疫的免疫抗體檢測(cè)方法

2.1 中和抗體

當(dāng)病原微生物入侵機(jī)體中的細(xì)胞時(shí)，病原體自身表達(dá)的特定分子首先會(huì)與細(xì)胞上的受體結(jié)合，以此起到感染細(xì)胞的作用，并且還能夠在細(xì)胞中進(jìn)一步進(jìn)行擴(kuò)增，B 淋巴細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生中和抗體，這樣在病原微生物侵入機(jī)體時(shí)就能夠及時(shí)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體來改變病毒表面構(gòu)型，從而阻止病毒吸附于易感細(xì)胞，以此可以有效的組織病毒進(jìn)入到健康的細(xì)胞中。同時(shí)巨噬細(xì)胞還能夠吞噬并清除病毒與中和抗體形成的免疫復(fù)合物，如果是有包膜的病毒表面抗原與中和抗體結(jié)合后也會(huì)激活補(bǔ)體，最終會(huì)使得病毒溶解。采用病毒中和試驗(yàn)來進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)也是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織所推薦的標(biāo)準(zhǔn)防范，但是該實(shí)驗(yàn)中所使用的病毒必須是具有感染性的活病毒。

2.2 結(jié)構(gòu)蛋白抗體

動(dòng)物機(jī)體的免疫系統(tǒng)會(huì)識(shí)別進(jìn)入機(jī)體的異己蛋白質(zhì)，并會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，從而阻斷病原微生物，通過注射滅活疫苗主要就是通過改造已經(jīng)沒有了病毒的毒性，但實(shí)際上并非所有的結(jié)構(gòu)抗體都有抗病毒的作用。以此為基礎(chǔ)可以采用以下幾種方式進(jìn)行免疫抗疫檢測(cè)。

2.2.1 液相阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試驗(yàn)（國際貿(mào)易指定法）

口蹄疫液相阻斷ELISA 抗體檢測(cè)技術(shù)具有良好的敏感性、快速診斷性和可重復(fù)性,與攻毒保護(hù)有很好的相關(guān)性,現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于口蹄疫免疫抗體水平的檢測(cè)過程中，其在實(shí)際應(yīng)用中還展現(xiàn)出安全性高、適用范圍廣等優(yōu)勢(shì)，能夠擺脫對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的依賴，因此普通的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室就可以進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)。其在實(shí)際應(yīng)用中主要有兩個(gè)作用：一是可以檢測(cè)口蹄疫非免疫動(dòng)物特異性抗體；二是可以監(jiān)測(cè)免疫抗體，評(píng)價(jià)口蹄疫疫苗的免疫效力，從而為免疫工作的開展提供科學(xué)的依據(jù)[2]。

2.2.2 正向間接血凝試驗(yàn)

正向間接血凝試驗(yàn)簡(jiǎn)單易行，適合基層單位應(yīng)用。在實(shí)際應(yīng)用中，抗原與其對(duì)應(yīng)的抗體相遇且會(huì)在一定的條件下形成抗原抗體復(fù)合物，其分子團(tuán)很小，肉眼看不見，然后需要將抗原吸附(致敏)在紅血球表面，再與抗體結(jié)合，這時(shí)候可以發(fā)現(xiàn)紅血球出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，其靈敏度比較高，用于檢測(cè)動(dòng)物血清中的口蹄疫抗體水平有著較高的準(zhǔn)確度。

2.2.3 VP1 結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)試驗(yàn)

當(dāng)口蹄疫合成肽疫苗免疫后進(jìn)行抗體檢測(cè)時(shí)可采用VP1 結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)試驗(yàn)，其具有高效、特異、快捷及強(qiáng)悍的生物安全性等優(yōu)點(diǎn)，但其在實(shí)際應(yīng)用中與液相阻斷ELISA 抗體檢測(cè)結(jié)果存在差異。

3 家畜口蹄疫的免疫抗體檢測(cè)流程

3.1 材料與方法

3.1.1 樣品來源

檢測(cè)血清主要來源于已經(jīng)成功注射牛羊o 型-亞洲I 型口蹄疫雙價(jià)滅活疫苗的牛血液樣品與羊血液樣品，在21 d 左右的時(shí)間進(jìn)行血樣提取，然后在實(shí)驗(yàn)中需要隨機(jī)抽取檢測(cè)血清，其中牛羊血清各抽取100 份。進(jìn)行血清分離，并將其置于4 ℃左右的冰箱保存。注意嚴(yán)格分類存放，避免樣品受到污染。

3.1.2 診斷試劑

選用診斷試劑為同一生產(chǎn)批號(hào)的口蹄疫O 型正向血凝抗原、陽性血清、陰性血清、稀釋液以及O型口蹄疫液相阻斷ELISA 檢測(cè)試劑盒。

3.1.3 檢測(cè)方法及結(jié)果判定

進(jìn)行正向間接血凝試驗(yàn)，選取羊的血清，將抗原(或抗體)包被于紅細(xì)胞表面，成為致敏的載體，然后與相應(yīng)的抗體(或抗原)結(jié)合，從而使紅細(xì)胞拉聚在一起，這時(shí)候會(huì)出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)，如果抗體的效價(jià)高于1:32，即可視抗體為合格；按照O型口蹄疫液相阻斷試驗(yàn)進(jìn)行操作，如果被檢血清的OD 值高出臨界值，那么為陰性孔，如果低于臨界值，就為陽性孔，需要注意的是，陽性孔的最高稀釋度就是血清的抗體效價(jià)，如果高于1:64，可以認(rèn)為抗體合格[3]。

3.2 結(jié)果

通過正向間接血凝檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)抽取的牛羊樣本中，口蹄疫的免疫合格率分別為88%和86%，也就是說在所抽取的100 頭牛和100 只羊中，分別有88 頭和86 只羊的抗體檢測(cè)是合格的。

3.3 分析

通過采用正向間接血凝檢測(cè)以及液體阻斷檢測(cè)方法可以發(fā)現(xiàn)，此次檢測(cè)結(jié)果基本相符，試驗(yàn)結(jié)果科學(xué)、可靠。

4 家畜口蹄疫的預(yù)防建議

口蹄疫對(duì)家畜危害較大，養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖期間也需要加強(qiáng)預(yù)防工作，提高對(duì)口蹄疫的認(rèn)識(shí)，降低該病的影響。一是要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理工作，在養(yǎng)殖期間要為家畜營(yíng)造一個(gè)良好的生長(zhǎng)環(huán)境，制定科學(xué)的衛(wèi)生消毒制度，保持干凈的衛(wèi)生，在寒冷的季節(jié)尤其要做好保溫工作；二是要嚴(yán)格按照家畜的生長(zhǎng)階段提供營(yíng)養(yǎng)充分且均衡的飼料，提高其自身的疫病抵抗能力；三是要重視疫苗免疫，養(yǎng)殖戶應(yīng)該結(jié)合養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)際制定科學(xué)的免疫程序，在實(shí)際工作中，需要在每年夏秋對(duì)豬、牛、羊等家畜進(jìn)行疫苗免疫，針對(duì)外來引種的家畜或者是流動(dòng)的家畜也需要進(jìn)行強(qiáng)制性的免疫工作，接種期間還需要做好疫苗過敏反應(yīng)的處理，從而提高疫苗免疫效果。目前在免疫環(huán)節(jié)中，由于防疫員因文化、年齡等各方面的差異，或者是設(shè)備等方面的問題經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致免疫工作達(dá)不到預(yù)期效果，因此還需要村級(jí)動(dòng)物防疫員充分發(fā)揮作用，按照免疫要求及時(shí)申報(bào)資金，以便進(jìn)行免疫注射器械和疫苗冷藏設(shè)備的更新等。在防疫結(jié)束后組織人員對(duì)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)進(jìn)行防疫檢測(cè)，保證免疫效果，為養(yǎng)殖戶的健康養(yǎng)殖提供保障；四是要加強(qiáng)巡視工作，一旦發(fā)生疫情要及時(shí)上報(bào)，病死家畜要及時(shí)進(jìn)行無害化處理，并使用2%火堿，或10%石灰水，或30%熱草木灰水對(duì)被病畜污染的用具、場(chǎng)所等進(jìn)行全面徹底的消毒；五是要加強(qiáng)藥物預(yù)防，比如可以使用一些中草藥進(jìn)行該病的預(yù)防，使用筋骨草、蒲公英、黃花稔、一點(diǎn)紅各120 g，加水煎煮夠灌服給家畜即可取得較好的預(yù)防效果[4]。

5 結(jié)語

綜上所述，口蹄疫的死亡率較高，一旦形成大規(guī)模的流行會(huì)給養(yǎng)殖戶造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且其作為一種人畜共患病，對(duì)人的健康也有較大的危害，為了保障免疫預(yù)防的效果，必須要重視起口蹄疫的免疫抗體檢測(cè)工作，嚴(yán)格按照相關(guān)要求選擇合適的檢測(cè)方法，形成對(duì)免疫工作的全面監(jiān)測(cè)，保證免疫效果，從而為養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖工作提供保障。