PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA在結直腸癌組織中的表達及與預后的關系

王漢星

山東省曹縣中醫院檢驗科 274400

早期診斷、早期手術切除治療是目前臨床上治療結直腸癌最有效的方法[1]。但是該病早期癥狀不明顯，隨著癌腫發展，癥狀逐漸出現，表現為大便習慣改變、腹痛、便血、腹部包塊、腸梗阻等，伴或不伴貧血、發熱和消瘦等全身癥狀，確診時常失去最佳治療時機，且預后效果較差[2]，并且該病的發生和發展機制尚未明確。研究表明[3]，cGMP依賴性蛋白激酶(PKG)、cAMP依賴性蛋白激酶(PKA)均是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在結直腸癌發病中起重要的作用，且與預后具有一定的相關性。鑒于此，本文選擇100例結直腸癌患者探究PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA在結直腸癌組織中的表達及與預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年9月—2019年9月收治的100例結直腸癌患者作為觀察對象。其中男54例、女46例；年齡35～68(52.03±11.12)歲；腫瘤最大徑1.8～4.8(3.52±1.05)cm；腫瘤部位：結腸51例，直腸49例；分化程度：高/中/低為12/63/25例；TNM分期：Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ期為11/34/48/7例；浸潤深度：T1/T2/T3/T4為12/32/46/10例。入選標準：(1)依據《中國結直腸腫瘤早診篩查策略專家共識》[4]，并經活檢、病理學檢查確診為結直腸癌者；(2)臨床資料收集完整者；(3)預計生存期在6個月以上者；(4)知情本次研究者。排除標準：(1)無法與醫護人員正常溝通者；(2)接受過相關治療者；(3)1周內有特殊用藥史者；(4)伴有其他惡性腫瘤者。本次研究獲得我院倫理委員會的認證。

1.2 試劑及藥品 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA兔單抗購于武漢博士德生物工程有限公司。免疫組織化學試劑盒、二氨基聯苯胺(DBA)顯色試劑盒均購于北京天根生化科技有限公司。

1.3 方法 用10%甲醛固定結直腸癌和癌旁組織標本，用石蠟包埋后，切4μm薄片，烘干、脫蠟后滴加PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA兔單抗。然后進行蘇木素染色。以自制磷酸鹽緩沖液(PBS)為陰性對照，用已知標志物的陽性組織切片為陽性對照。(1)PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表達情況：PKG-Ⅰ表達的陽性判定標準：陽性細胞—細胞漿出現棕黃色顆粒，在400倍鏡下觀察陽性細胞<10%判定為陰性，≥10%判定為陽性。PKG-Ⅱ表達的陽性判定標準：陽性細胞—細胞的胞膜和部分細胞質中出現呈棕黃色或棕褐色顆粒；在400倍鏡下觀察陽性細胞<25%判定為陰性，≥25%判定為陽性。PKA表達的陽性判定標準：陽性細胞—細胞質或細胞核出現棕黃色顆粒。在400倍鏡下觀察陽性細胞<10%判定為陰性，≥10%判定為陽性。(2)分析PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表達與結直腸癌臨床病理參數的關系：包括性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、分化程度、TNM分期、浸潤深度。(3)對結直腸癌患者隨訪24個月，統計PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA陽性和陰性表達結直腸癌患者24個月生存狀況。

2 結果

2.1 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表達情況 相比癌旁組織，結直腸癌組織中PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA陽性率明顯更低，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 結直腸癌組織與癌旁組織PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表達陽性率比較[n(%)]

2.2 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表達與結直腸癌臨床病理參數的關系 在結直腸癌組織中，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA陽性表達率隨著腫瘤直徑的增加、分化程度的降低、TNM分期的增加、肌層浸潤而降低差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表達與結直腸癌臨床病理參數的關系[n(%)]

2.3 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表達與結直腸癌患者24個月生存狀況的關系 結直腸癌患者24個月生存率為78.00%(78/100)，其中PKG-Ⅰ陽性表達患者24個月生存率為96.97%(32/33)，明顯高于陰性表達患者的68.66%(46/67)；PKG-Ⅱ陽性表達患者24個月生存率為100.00%(20/20)，明顯高于陰性表達患者的72.50%(58/80)；PKA陽性表達患者24個月生存率為92.31%(48/52)，明顯高于陰性表達患者的62.50%(30/48)，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

結直腸癌是來源于結腸和直腸黏膜的惡性腫瘤，發病過程較復雜，確切病因尚未明確。目前臨床上常用手術、放療、化療、靶向治療該病，但是5年生存率約為60%，生存率仍然不高[5]。故研究結直腸癌的病因，尋找新的治療方案成為研究熱點。

臨床研究表明[6]，結直腸癌的發生、轉移及預后與絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶密切相關。其中PKG、PKA均為蛋白激酶，PKG分為Ⅰ、Ⅱ型，PKG-Ⅰ分布較廣泛，在腸平滑肌細胞分布較多；PKG-Ⅱ能夠調節囊性纖維化跨膜離子通道，使得碳酸氫鹽、氯離子外排，水分進入腸腔，調節腸壁細胞內外的滲透壓；PKA能夠通過磷酸化底物蛋白或轉錄因子，調節基因的轉錄翻譯，進而調節細胞的生長、代謝及增殖等[7-8]。同時臨床研究表明[9]，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ能夠抑制腫瘤細胞的侵襲，具有抗腫瘤的作用；PKA能夠抑制細胞異常生長和增殖，起到抗腫瘤的作用。本文結果顯示，相比癌旁組織，結直腸癌組織中PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA陽性率明顯更低。均與陳晨等[10]研究的PKG兩種亞型、PKA在結直腸癌組織中表達顯著降低相一致。

另外，本文結果還發現，在結直腸癌組織中，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA陽性表達率隨著腫瘤直徑的增加、分化程度的降低、TNM分期的增加、肌層浸潤而降低。結直腸癌患者24個月生存率為78.00%，其中PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA陽性表達患者24個月生存率明顯高于陰性表達患者。分析原因：PKG-Ⅰ能夠使得血管內皮生長因子減少，減少腫瘤血管生成，抑制腫瘤細胞增殖，延長癌癥患者生存周期；PKG-Ⅱ能夠阻斷酪氨酸酶活化，抑制酪氨酸酶介導的主要通路信號，抑制癌細胞的增殖、遷移、侵襲，促進癌細胞凋亡，延長癌癥患者生存周期；PKA能夠抑制NF-κB轉錄活性，使得癌細胞的增殖活性下降，抑制結腸癌細胞遷移/侵襲，誘導結腸腫瘤細胞凋亡，從而延長癌癥患者生存周期。

綜上所述，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA在結直腸癌組織中均呈現低表達，且與臨床特征和患者預后密切相關，能夠成為結直腸癌診斷與治療的新靶點。