UPLC-MS/MS法檢測中藥制劑中非法添加的抗組胺類藥物

王超 姜鑫 矯筱蔓 陳權

【關鍵詞】UPLC-MS/MS；中藥制劑；非法添加；抗組胺類藥物

中藥凝聚了中華民族數千年的智慧，在我國有著悠久的歷史，深受患者的青睞[1-2]。近年來，一些不法商家為了謀求利益，在中藥制劑中非法添加化學藥品的情況時有發生[3-4]。這可能導致患者出現嚴重的不良反應，甚至可能會危害到患者的健康和生命安全[5-6]。因此，國家藥品監督管理總局頒布了一系列針對非法添加的補充檢驗方法。目前，已報道的抗組胺類藥物的檢測方法多為液相色譜法[7-9]和液質聯用法[10]，但超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜（UPLC-MS/MS）法以其專屬性強、靈敏度高等優點廣泛應用于中藥制劑中非法添加的檢測[11-15]。本文選取13 種常用的抗組胺類藥物，采用UPLC-MS/MS法建立中藥制劑中非法添加的抗組胺類藥物的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

曲吡那敏、溴苯那敏來自LGC公司，氯苯那敏、苯海拉明、地氯雷他定、異丙嗪、阿司咪唑、賽庚啶、羥嗪、西替利嗪、氯丙嗪、特非那定、氯雷他定來自中國食品藥品檢定研究院。

甲醇為色譜純；甲酸、甲酸銨均為質譜級；水為超純水。中藥制劑樣品均為市售樣品。

1.2 儀器與設備

XEVO TQ超高效液相色譜儀串聯三重四級桿質譜聯用儀（美國Waters 公司）；XPE205DR電子天平（梅特勒-托尼多儀器有限公司）；Milli -Q Advantage A10 超純水儀（美國Millipore 公司）；AS3120A超聲清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18 色譜柱（2.1 mm×150mm，1.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動相A 為10 mmol/L 甲酸銨-0.1%甲酸水溶液，流動相B 為甲醇，梯度洗脫（0～2 min，45%B；2～8 min，45%～60% B；8～12.5 min，60%～75% B；12.5～13min，75% B～95% B；13～16 min，95% B；16.5～20 min，45% B）；進樣體積：1 μL。

1.3.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子（ESI）源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（MRM），毛細管電壓：4.0 kV；脫溶劑氣溫度：400 ℃；脫溶劑氣流速：800 L/Hr；錐孔氣流速：50 L/Hr；碰撞氣流速：0.15 mL/min。

1.3.3 對照品儲備液的制備

精密稱取各對照品約10 mg，分別置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解定容，配制成質量濃度約為1 mg/mL的對照品儲備液。分別精密吸取各對照品儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成1 μg/mL的混合對照品溶液。

1.3.4 供試品溶液的制備

取樣品約1 g，精密稱定，置50 mL 量瓶中，加入甲醇45mL，超聲提取10 min，放冷至室溫，加甲醇定容至刻度，混合搖勻，經0.22 μm濾膜濾過，作為供試品溶液。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的優化

分別考察水、0.1%甲酸水及10 mmol/L甲酸銨-0.1%甲酸三種水溶液作為水相的分離效果。結果發現：水相為純水時，部分色譜峰峰型較寬，拖尾嚴重；當體系中加入酸時，可增加各組分的響應，峰型也得到了一定的改善，但部分組分保留時間過短；使用甲酸銨-甲酸體系作為水相，可明顯抑制拖尾現象，且保留時間合適。分別考察甲醇和乙腈兩種溶劑作為有機相的分離效果，結果表明兩種溶劑的分離效果相差不大，考慮到供試品溶液的提取溶劑為甲醇，故采用10 mmol/L 甲酸銨-0.1%甲酸水溶液和甲醇作為流動相。

2.2 質譜條件的優化

采用100 ng/mL的混合對照品溶液以流動注射的方式進行質譜條件的優化。正離子模式下采用一級質譜掃描方式進行母離子掃描，確定各組分的準分子離子峰，并對錐孔電壓進行優化；對待測物的分子離子進行子離子全掃描，并對碰撞能量進行優化，選取豐度最強的碎片離子作為定量離子，次強的碎片離子作為定性離子，不同組分質譜分析條件見表1。

2.3 樣品前處理的選擇

試驗通過比較不同的提取溶劑（甲醇、乙腈），不同溶劑質量分數（50%、75%、100%）以及不同超聲時間（5 min、10 min、15 min）對加標樣品的提取效率進行考察。結果表明，超聲時間延長對提取效率的影響不大，但隨著提取溶劑中有機相比例減少，提取效率稍有降低；甲醇和乙腈的提取效率相差不大，由于對照品是用甲醇溶解，故選擇甲醇作為提取溶劑超聲10 min。

2.4 方法學考察

2.4.1 專屬性試驗

取混合對照品溶液（10 ng/mL）按“1.3.1”和“1.3.2”項下的色譜條件和質譜條件進樣、測定，色譜圖見圖1。取不含任何化學成分的中藥制劑按“1.3.4”項的方法處理并測定，陰性樣品色譜圖上均無干擾。

2.4.2 標準曲線及線性范圍

用甲醇將混合對照品溶液稀釋成一系列質量濃度（ng/mL）分別為2、5、10、20、50 的線性溶液，進樣分析，以濃度為橫坐標，定量離子對峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結果表明，各組分在其線性范圍內，質量濃度與峰面積均有良好的線性關系，相關系數（r）均大于0.999，見表2。

2.4.3 檢出限和定量限

取混合對照品溶液，用甲醇逐級稀釋后進樣分析，按信噪比為3（S/N=3）計算檢出限（LOD），按信噪比為10（S/N=10）計算檢定量限（LOQ），結果見表2。

2.4.4 加標回收試驗

以不含任何化學成分的中藥制劑為基質，采用3 個質量濃度（2.5、5、25 ng/mL）添加混合對照品溶液，按“1.3.4”項下方法處理并測定，計算不同組分的加標回收率，結果表明，各組分的加標回收率在91.1%～101.3%之間，RSD均小于5%，見表3。

2.4.5 精密度試驗

取混合對照品溶液（10 ng/mL），連續進樣6 次，計算峰面積的RSD，結果表明，各組分的精密度RSD均小于2.5%，見表3，說明儀器具有較好的精密度。

2.4.6 穩定性試驗

取加標回收試驗樣品溶液（5 ng/mL），在配制后分別放置0、2、4、8、12、24 h，進樣測定，計算各組分含量的RSD，結果表明，各組分的穩定性RSD均小于5%，見表3，說明供試品溶液在24 h 內穩定。

2.4.7 樣品測定

按擬定的含量測定方法，對10 批市售中藥制劑進行測定，均未檢出上述組分。

3 結論

本研究基于UPLC-MS/MS技術，建立了13 種抗組胺類組分的定性、定量分析方法。所建方法前處理方法簡單、準確、靈敏，專屬性強，分析時間短，可用于中藥制劑中非法添加抗組胺類組分的檢測，可為藥品監管部門提供技術支撐。