抗Sm抗體、抗U1-RNP抗體陽性檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷不符1例報(bào)道

張 艷

（簡(jiǎn)陽市人民醫(yī)院，四川 簡(jiǎn)陽 641400）

自身免疫性疾病是指機(jī)體對(duì)自身抗原發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致自身組織損傷而引起的疾病。抗核抗體（anti-nuclear antibody，ANA）及ANA譜對(duì)于自身免疫性疾病的診斷、鑒別診斷、療效觀察及預(yù)后評(píng)估具有重要意義。抗U1-核糖核蛋白（U1-ribonucleoprotein，U1-RNP）抗體可在多種風(fēng)濕性疾病中出現(xiàn)，但高滴度抗U1-RNP抗體對(duì)混合性結(jié)締組織病（mixed connective tissue disease，MCTD）有診斷意義。抗Sm抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的高特異性血清學(xué)標(biāo)志物[1]。本研究報(bào)道1例抗Sm抗體、抗U1-RNP抗體陽性結(jié)果與臨床診斷不符的患者。

1 病例資料

1.1 病例介紹

患者，女，15歲，因“關(guān)節(jié)腫痛6個(gè)月，加重5 d”至簡(jiǎn)陽市人民醫(yī)院住院。患者無明顯誘因出現(xiàn)左手第二近端指間關(guān)節(jié)疼痛、伴腫脹、皮溫升高，無明顯發(fā)紅，后逐漸出現(xiàn)左膝關(guān)節(jié)腫痛，程度較輕，未予重視，后無明顯誘因出現(xiàn)左膝關(guān)節(jié)腫痛加重，伴皮溫升高，無局部發(fā)紅。病程中無腰部疼痛、炎性眼病、銀屑樣皮疹，無顏面部蝶形紅斑、口腔潰瘍，無光過敏、雷諾現(xiàn)象，無口眼干燥、牙齒片狀脫落等癥狀。

1.2 臨床診療

1.2.1 實(shí)驗(yàn)室檢查 ANA核顆粒型1∶100±、抗U1-RNP抗體++、抗Sm抗體++、人類白細(xì)胞抗原B27陽性、風(fēng)疹病毒IgG抗體陽性、單純皰疹病毒Ⅰ型IgG抗體陽性、紅細(xì)胞沉降率 55 mm/h，血清抗環(huán)瓜氨酸肽抗體陰性、γ干擾素釋放試驗(yàn)陰性、類風(fēng)濕因子陰性。

1.2.2 關(guān)節(jié)磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）檢查結(jié)果 MRI檢查結(jié)果示：雙側(cè)骶髖關(guān)節(jié)炎，累及關(guān)節(jié)緣，周圍肌膜腫脹；左股骨內(nèi)側(cè)踝及脛骨平臺(tái)髓內(nèi)斑片樣骨髓水腫，關(guān)節(jié)囊腫積液。行左膝增強(qiáng)MRI進(jìn)一步明確關(guān)節(jié)滑膜情況，結(jié)果示：左側(cè)膝關(guān)節(jié)滑膜廣泛增厚，增強(qiáng)掃描明顯強(qiáng)化，擬診為滑膜炎。

1.2.3 臨床診斷 根據(jù)國(guó)際脊柱關(guān)節(jié)炎專家協(xié)作組外周型脊柱關(guān)節(jié)病分類標(biāo)準(zhǔn)[2]，明確診斷為脊柱關(guān)節(jié)病（外周型）。

1.2.4 臨床反饋 患者ANA 1∶100±，抗U1-RNP抗體++，抗Sm抗體++，考慮MCTD。但患者無顏面部蝶形紅斑、口腔潰瘍、光過敏、雷諾現(xiàn)象、口眼干燥、牙齒片狀脫落，建議復(fù)查自身抗體和特定靶抗原。

2 實(shí)驗(yàn)室復(fù)查

2.1 試劑與儀器

ANA試劑盒（間接免疫熒光法）購(gòu)自德國(guó)歐蒙公司，BX51熒光顯微鏡（日本奧林巴斯公司）。分別采用Tenfly Blot-B全自動(dòng)蛋白印跡儀（深圳亞輝龍公司）及配套試劑（免疫印跡法）、EUROBlotMasterⅡ免疫印跡儀（德國(guó)歐蒙公司）及配套試劑（免疫印跡法）、iFlash 3000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（深圳亞輝龍公司）及配套試劑（化學(xué)發(fā)光法）、Tesmi F4000全自動(dòng)流式熒光免疫分析儀（嘉興凱實(shí)生物科技有限公司）及上海透景公司試劑（多重微球流式熒光免疫分析法）檢測(cè)特定靶抗原。

2.2 復(fù)查結(jié)果

ANA核顆粒型1∶100±。2種免疫印跡法檢測(cè)抗U1-RNP抗體、抗Sm抗體均為陽性。

化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗U1-RNP抗體和抗Sm抗體的結(jié)果分別為2.1、0.32 AU/mL，均為陰性。多重微球流式熒光免疫分析法檢測(cè)抗U1-RNP抗體和抗Sm抗體的結(jié)果分別為0.02、0.06 AU/mL，均為陰性。

3 討論

ANA是以真核細(xì)胞的各種成分為靶抗原的自身抗體的總稱。ANA檢測(cè)可分為針對(duì)總抗體的檢測(cè)和針對(duì)靶抗原/抗體的特異性自身抗體的檢測(cè)。本例患者2次ANA結(jié)果均為核顆粒型1∶100±，但特定靶抗原檢測(cè)結(jié)果不一致，抗U1-RNP抗體和抗Sm抗體免疫印跡法均為陽性，而化學(xué)發(fā)光法和多重微球流式熒光免疫分析法均為陰性，不同檢測(cè)方法之間檢測(cè)結(jié)果存在明顯差異。自身抗體檢測(cè)必須采用相應(yīng)的靶抗原進(jìn)行免疫結(jié)合反應(yīng)，即抗體針對(duì)的靶抗原才是核心，自身抗體檢測(cè)結(jié)果與靶抗原的序列、肽段三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)、抗原決定簇暴露位置等有關(guān)。由于不同的抗原生產(chǎn)商會(huì)對(duì)抗原進(jìn)行重新設(shè)計(jì)和改造，因此靶抗原結(jié)構(gòu)會(huì)有一定的差異，若該抗原決定簇與其他抗原不同或不完全相同，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果不相符[3]。抗U1-RNP抗體屬于小核核糖核蛋白（small nuclear ribonnuclear protein，snRNP），抗U1-RNP抗體靶抗原的主要成分為相對(duì)分子質(zhì)量70 000的蛋白、蛋白A（相對(duì)分子質(zhì)量32 000）和蛋白C（相對(duì)分子質(zhì)量2 000）。抗U1-RNP抗體具有多個(gè)蛋白結(jié)構(gòu)，包括U1-snRNA分子、U1A、U1C和U1-70K蛋白[4]。抗Sm抗體也屬于snRNP，靶抗原主要成分為B/B'、D、E、F、G蛋白多 肽[5]。2種抗體的蛋白結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 抗U1-RNP抗體和抗Sm抗體的蛋白結(jié)構(gòu)

本研究使用的2種免疫印跡法試劑均采用U1-RNP全片段，因此無法區(qū)分抗U1-RNP抗體蛋白結(jié)構(gòu)中某1個(gè)或多個(gè)蛋白陽性。免疫印跡法試劑的膜條采用固相包被，抗原以固相方式固定在硝酸纖維素膜上，空間構(gòu)象會(huì)發(fā)生細(xì)微變化，且抗原片段較大，個(gè)別非特異性位點(diǎn)暴露，可能會(huì)導(dǎo)致假陽性。因U1-70K蛋白（又稱RNP70）對(duì)MCTD的診斷特異性最高[6]，因此在化學(xué)發(fā)光法及多重微球流式熒光免疫法試劑中僅使用了RNP70片段，其陰性結(jié)果提示針對(duì)RNP70的檢測(cè)結(jié)果為陰性。

MCTD是一種血清中有高滴度的斑點(diǎn)型ANA和抗U1-RNP抗體，臨床癥狀有雷諾現(xiàn)象、雙手腫脹、多關(guān)節(jié)痛或關(guān)節(jié)炎、肢端硬化、肌炎、食管運(yùn)動(dòng)功能障礙、肺動(dòng)脈高壓等特征的臨床綜合征[7]。兒童MCTD中，有雷諾現(xiàn)象者占50%～70%，有關(guān)節(jié)疾病者占36%～57%[8]。兒童MCTD的關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)痛表現(xiàn)為多發(fā)性，且多為四肢小關(guān)節(jié)受累[9]。本例患者雖無雷諾現(xiàn)象，但關(guān)節(jié)腫痛6個(gè)月，因此存在兒童MCTD的可能。在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果中，化學(xué)發(fā)光法及多重微球流式熒光免疫分析法試劑都僅采用RNP70片段作為包被抗原，雖然提高了檢測(cè)方法的特異性，但因?yàn)榘豢乖牟蝗妫赡軙?huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

目前，自身抗體檢測(cè)尚無溯源標(biāo)準(zhǔn)，也沒有可溯源的確證試驗(yàn)，因此對(duì)自身抗體的檢測(cè)應(yīng)結(jié)合多種檢測(cè)方法。結(jié)合本例患者的檢測(cè)結(jié)果，建議針對(duì)抗U1-RNP抗體的檢測(cè)，可以選用特異性高的抗原，如RNP70來替代大片段抗原，以降低由方法學(xué)引起的非特異性干擾。