小體系連續快速批量測定淡水亞硝酸鹽氮分光光度法

李嘉敬，韋明肯，盧勇杰，陳心如，鄺春議，朱 穎，孫 巍

廣東石油化工學院，生物與食品工程學院，廣東 茂名 525000

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑與儀器材料

福晨(天津)化學試劑有限公司生產的4-氨基苯磺酰胺(分析純)，天津大茂化學試劑廠生產的N-(1-萘基)-乙二胺二鹽酸鹽(分析純)、亞硝酸鹽鈉(分析純)、高錳酸鉀(分析純)、草酸鈉(優級純)，西隴科學股份有限公司生產的三氯甲烷(分析純)、磷酸(分析純)、硫酸(分析純)。

實驗室級超純水機(南京易普達科技發展有限公司)、酶標儀(BIO-RAD imark酶標儀)、移液槍(Eppendorf艾本德)、移液器槍頭(RonMark 榮碼)。

1.1.2 試劑配制

顯色劑：于100 mL燒杯中加入25 mL純水，然后移入5 mL磷酸，再加入4 g 4-氨基苯磺酰胺，將0.2 g N-(1-萘基)-乙二胺二鹽酸鹽溶解，轉移到100 mL的容量瓶中定容，加純水稀釋到標線，搖勻，貯于一個棕色的試劑玻璃瓶中避光低溫2～5 ℃保存。

磷酸：使用15 mol/L(質量濃度1.70 g/mL)磷酸。

高錳酸鉀標準溶液(1/5 K2MnO4,0.05 mol/L)：于1 000 mL燒杯中將0.8 g高錳酸鉀溶于600 mL的純水中，再煮沸0.5～1 h，使體積降至500 mL左右，放置一個晚上后，用漏斗過濾，貯于一個棕色的試劑玻璃瓶中避光保存。

草酸鈉標準溶液(1/2 Na2C2O4,0.050 mol/L)：于100 mL燒杯中將經烘箱105 ℃烘燒2 h的無水草酸鈉(GR)0.335 g溶于75 mL純水中，轉移到100 mL的容量瓶中定容，加純水稀釋到標線，搖勻，貯于玻璃瓶中保存。

亞硝酸鹽氮標準貯備液(質量濃度 250 mg/L)：于100 mL 燒杯中將0.123 2 g亞硝酸鈉溶于15 mL純水中，轉移到100 mL的容量瓶中定容，加純水稀釋到標線，搖勻，貯于一個棕色的試劑玻璃瓶中避光低溫2～5 ℃保存一個月。

硫酸：使用18 mol/mL(質量濃度 1.84 g/mL)硫酸。

1.2 實驗設計

1.2.1 反應體系的體積優化設計

1.2.2 小體系反應的顯色時間優化設計

1.2.3 小體系反應的顯色劑用量優化設計

1.2.4 小體系反應適用的pH范圍

1.3 標準工作曲線繪制與樣品測定方法

按照國標的測定方法，繪制小體系下分光光度法的標準工作曲線。

2)加入20 μL顯色劑，混勻，反應20 min。

3)用1 mL移液槍移0.3 mL待測樣液到標準平底96孔酶標板中，放入酶標儀內在540 nm的波長下測定各個待測樣液的吸光度(Ab)，記錄待測樣液的吸光度。

1.4.2 新方法實測環境樣品的準確性驗證

2 結果與討論

2.1 小體系測定體積優化

圖1 不同體積對測定含量的影響Fig.1 Effect of different volumes ondetermination of content

2.2 小體系測定顯色時間優化

圖2 不同顯色時間對小體系測定含量的影響Fig.2 Effect of different color developmenttime on determination of content in small system

2.3 小體系測定顯色劑用量優化

圖3 不同顯色劑用量對小體系測定含量的影響Fig.3 Effect of different amount of developer ondetermination of content in small system

2.4 pH對小體系反應的影響

圖4 不同pH對小體系測定含量的影響Fig.4 Effect of different pH on determination of content in small system

2.6 小體系測定的線性檢測范圍

圖5 小體系與國標法測定含量的線性擬合與正交擬合驗證曲線Fig.5 Linear fitting and orthogonal fittingverification curve for determination of content by small system andnational standard method

2.7 樣品中實測的準確性驗證

圖6 小體系快速測定淡水中的濃度范圍Fig.6 Concentration range of in freshwater quickly determined by small system

表1 小體系與國標法測定環境樣品含量的結果比較Table 1 Comparison of determination results of in environmental samples by small systemand national standard method

3 結論