2型糖尿病患者血清sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18表達(dá)及意義

邢 旭

河南省南陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南南陽 473000

2型糖尿病是臨床常見疾病，病變的發(fā)生與遺傳和肥胖等因素密切相關(guān)[1]。近年學(xué)者發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)與該病有關(guān)，并認(rèn)為不同程度炎癥性的損傷加速了病變進(jìn)展。抗衰老蛋白Klotho是與心血管疾病和內(nèi)分泌疾病相關(guān)因子，通過抑制炎癥反應(yīng)來保護(hù)糖尿病引起的腎損傷[2]。研究認(rèn)為腎臟出現(xiàn)損傷時(shí)，血清中分泌型Klotho(sKlotho)的表達(dá)明顯下降[3]，而中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)的表達(dá)明顯升高[4]。白細(xì)胞介素-6(IL-6)和白細(xì)胞介素-18(IL-18)均為促炎相關(guān)因子，在糖尿病患者血清中的表達(dá)升高，參與病變的進(jìn)展[5-6]。本研究檢測(cè)2型糖尿病患者血清sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18的表達(dá)，分析與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年3月至2021年10月在南陽市第一人民醫(yī)院確診為2型糖尿病的患者作為觀察組，納入?yún)⒄铡吨袊?guó)2型糖尿病防治指南(2013年版)》中的標(biāo)準(zhǔn)[7]，空腹血糖(FPG)≥7.0 mmol/L和(或)口服糖耐量試驗(yàn)2 h血糖(2 h PG)≥11.1 mmol/L。共選擇178例，年齡42～79歲，中位數(shù)58.2歲，其中男95例，女83例。參照尿清蛋白/肌酐比值(UACR)的檢測(cè)指標(biāo)不同將患者分為3組，即正常尿清蛋白組(UACR<30 mg/g)共60例，其中男33例，女27例；微量尿清蛋白組(30 mg/g≤UACR<300 mg/g)共62例，其中男30例，女32例；大量尿清蛋白組(UACR≥300 mg/g)共56例，其中男32例，女24例。收集健康成年人血清78例作為對(duì)照組，年齡38～63歲，中位數(shù)52.1歲，其中男39例，女39例。二組在常規(guī)資料的比較中差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2方法

1.2.1sKlotho、NGAL、IL-6、IL-18的檢測(cè)方法 觀察組和對(duì)照組均采集清晨空腹靜脈血3 mL，2 500 r/min離心10 min后分離血清，于-20 ℃冰箱中凍存。樣本均于4周內(nèi)集中檢測(cè)，血清sKlotho、NGAL、IL-6、IL-18的檢測(cè)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作，減少誤差，做好質(zhì)量控制。應(yīng)用北京伯輝生物科技有限公司酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值(A值)。

1.2.2數(shù)據(jù)收集 收集觀察組患者的年齡、性別、體重、血壓、估算腎小球?yàn)V過率(eGFR)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、FPG、口服糖耐量試驗(yàn)2 h血糖(2 h PG)、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)及尿清蛋白的相關(guān)數(shù)據(jù)。

2 結(jié) 果

2.1各組間相關(guān)臨床資料的比較 觀察組中正常尿清蛋白組、微量尿清蛋白組及大量尿清蛋白組患者的收縮壓和舒張壓均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，各組間體質(zhì)量指數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組間相關(guān)臨床資料比較

2.2各組間的血清檢測(cè)指標(biāo)比較 觀察組eGFR、HbA1c、FPG、2 h PG、HOMA-IR、TC和TG在不同腎臟損傷程度分組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組間的血清檢測(cè)指標(biāo)比較

續(xù)表2 各組間的血清檢測(cè)指標(biāo)比較

2.3各組間血清sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18水平比較 觀察組sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18的水平在不同腎臟損傷程度分組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組血清sKlotho、NGAL、IL-6、IL-18水平比較

2.4觀察組血清sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析 相關(guān)分析顯示sKlotho水平與UACR、HbA1c、FPG、2 h PG、HOMA-IR、TC、TG呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與eGFR呈正相關(guān)(P<0.05)； NGAL、IL-6、IL-18水平與體質(zhì)量指數(shù)、UACR、HbA1c、FPG、2 h PG、HOMA-IR、TC、TG呈正相關(guān)(P<0.05)，與eGFR呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 觀察組血清sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)分析

3 討 論

2型糖尿病患者持續(xù)性的高血糖可以引起眼、腎、心臟及外周神經(jīng)等組織的繼發(fā)性病變[8]，肥胖是胰島素敏感性降低的重要原因[9]。2型糖尿病患者由于早期臨床表現(xiàn)不典型，患者治療常不及時(shí)，因此形成的并發(fā)癥可能會(huì)較重。尋找相關(guān)早期診斷客觀因子對(duì)臨床早期治療可能有重要的價(jià)值。Klotho在體內(nèi)由腎臟、腦和甲狀旁腺分泌，主要調(diào)控哺乳動(dòng)物的衰老進(jìn)程。研究認(rèn)為Klotho合成不足可導(dǎo)致各種衰老情況的發(fā)生[10]。Klotho包括膜型和分泌型兩種。膜型Klotho主要在腎臟和小腸表達(dá)，sKlotho不含跨膜結(jié)構(gòu)，以游離形式存在，能在血液、尿及腦脊液中檢測(cè)到[11]。NGAL也稱為脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2，主要參與人體的脂質(zhì)代謝、免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等[12]。NGAL也是一種載鐵蛋白，通過介導(dǎo)Fe3+向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞分化[13]。IL-6和IL-18是機(jī)體內(nèi)炎性反應(yīng)的重要介質(zhì)，能調(diào)控多種炎癥因子的形成，刺激免疫細(xì)胞行使功能[14-15]。IL-18能增強(qiáng)Fas-FasL介導(dǎo)的細(xì)胞毒和免疫調(diào)節(jié)作用，引起TNF-α分泌增加。IL-6具有趨化和激活單核巨噬細(xì)胞的作用，可引起細(xì)胞黏附因子的改變，引起炎癥細(xì)胞向病變部位聚集，形成趨化作用[16]。體內(nèi)高血糖狀態(tài)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6有促進(jìn)作用，也有研究證實(shí)了此結(jié)論[17]。IL-18可能參與病變進(jìn)展中慢性炎癥反應(yīng)過程或免疫性反應(yīng)的過程。

本研究結(jié)果顯示，2型糖尿病患者病變嚴(yán)重程度與血壓有關(guān)，提示糖尿病與血壓存在某種關(guān)聯(lián)；且eGFR、HbA1c、FPG、2 h PG、HOMA-IR、TC、TG、sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18在不同腎臟損傷程度分組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并經(jīng)相關(guān)分析進(jìn)行驗(yàn)證，提示血清中sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18的水平異常程度與病變的形成和進(jìn)展有關(guān)，也提示聯(lián)合檢測(cè)這4項(xiàng)指標(biāo)可能對(duì)判斷病變嚴(yán)重程度有一定價(jià)值。多種指標(biāo)綜合判斷病變的嚴(yán)重程度，可以為臨床觀察病情的改變及檢驗(yàn)治療效果提供客觀依據(jù)。eGFR、HbA1c、FPG、2 h PG、TC和TG為臨床中常用的指標(biāo)，檢測(cè)容易，實(shí)施方便。sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18的檢測(cè)方法為ELISA法，方法簡(jiǎn)單，可靠性強(qiáng)，適合在臨床中推廣應(yīng)用。呂秀娟等[18]通過觀察sKlotho對(duì)高糖狀態(tài)下小鼠成骨細(xì)胞增殖與分化的影響，發(fā)現(xiàn)sKlotho能改善高糖狀態(tài)下小鼠MC3T3-E1細(xì)胞的增殖與分化功能，且該作用呈濃度依賴性，認(rèn)為sKlotho在成骨細(xì)胞損傷的狀態(tài)下高表達(dá)是對(duì)機(jī)體的保護(hù)作用。有學(xué)者探討血漿NGAL對(duì)急性腎功能損害患者腎功能恢復(fù)的預(yù)測(cè)作用，發(fā)現(xiàn)NGAL聯(lián)合BNP對(duì)預(yù)測(cè)急性腎功能損害的恢復(fù)具有更好的敏感性[19]。這與本研究的結(jié)果較為一致。劉洪等[20]檢測(cè)到2型糖尿病患者血清e(cuò)GFR、HbA1c、FPG、2 h PG、TC、TG的水平隨病情加重逐漸增加，并認(rèn)為sKlotho和NGAL可能成為2型糖尿病的早期診斷標(biāo)志物，其機(jī)制可能與炎癥反應(yīng)及腎臟損傷的程度有關(guān)。作為炎性促進(jìn)因子的IL-6、IL-18對(duì)腎損傷有促進(jìn)作用，林武榮[21]也發(fā)現(xiàn)血清IL-6、IL-18水平的改變，能增加高血壓腎損害的發(fā)生概率。血清中IL-6和IL-18的水平也可以作為監(jiān)測(cè)治療效果的指標(biāo)[22]。

總之，2型糖尿病患者血清中sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18水平異常，與腎臟損傷的程度相關(guān)。sKlotho、NGAL、IL-6和IL-18可能作為早期診斷標(biāo)志物，其機(jī)制與炎癥反應(yīng)和腎臟損傷程度有關(guān)。