HPLC法測定富馬酸喹硫平片含量的不確定度分析

黃春燕，何秋云，柳賢福

(1 欽州市檢驗(yàn)檢測院，廣西 欽州 535000；2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 535222)

不確定度是表征合理地賦予被測量值的分散性與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)[1]，也是一個(gè)完整的定量分析結(jié)果的重要組成部分，用于評價(jià)定量方法的可靠性及測量結(jié)果的可信程度[2]。高效液相色譜法目前已廣泛應(yīng)用于藥品檢驗(yàn)中的含量測定。富馬酸喹硫平片，主要成分為富馬酸喹硫平，化學(xué)名為11-{4-[2-(2-羥乙氧基)乙基-1-哌嗪基]}二苯駢(b，f)(1，4)硫氮雜卓富馬酸鹽(2∶1)，臨床用于治療精神分裂癥和雙相情感障礙的躁狂發(fā)作。本文通過測定富馬酸喹硫平片的喹硫平含量進(jìn)行不確定度分析，分析測量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度，為客觀地評價(jià)富馬酸喹硫平片的含量提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

LS220ASCS萬分之一電子分析天平，普利賽斯公司；HA225SM-DR十萬分之一天平,普利賽斯/上海天美天平儀器有限公司；KQ-400E超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司、容量瓶(100 mL，A級)；量瓶(50 mL，A級)；量瓶 (10 mL，A級)；移液管(1 mL，A級)；高效液相色譜儀(Agilent 1260，DAD檢測器)，安捷倫科技(中國)有限公司；富馬酸喹硫平對照品(100 mg，批號100815-201904)，中國食品藥品檢定研究院；色譜級甲醇(4L)，賽默飛世爾科技(中國)有限公司。

2 測定方法

2.1 色譜條件

Thermo BDS HYPERSIL-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；以甲醇-水-三乙胺(670∶330∶4)(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.8)為流動(dòng)相；檢測波長為289 nm；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣體積20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液

取富馬酸喹硫平對照品適量，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，使每1 mL約含富馬酸喹硫平30 μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于喹硫平25 mg)，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲使富馬酸喹硫平溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

2.3 測定法

精密量取供試品溶液與對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，并將結(jié)果乘以0.8686。

3 測量不確定度分析

3.1 建立數(shù)學(xué)模型

外標(biāo)法測定富馬酸喹硫平片含量的標(biāo)示百分含量的計(jì)算公式：

根據(jù)不確定度來源，對結(jié)果有影響的因素均在上述公式中，因此，建立不確定度的數(shù)學(xué)模型。

3.2 測量不確定度分析

圖1 測量不確定度來源Fig.1 Sources of measurement uncertainty

根據(jù)溶液的配制和數(shù)學(xué)模型分析，不確定度來源如圖1所示，不確定度主要來源于對照品純度、對照品稱樣量、供試品稱樣量、供試品平均片重、對照品稀釋體積、供試品稀釋體積、對照品峰面積、供試品峰面積8個(gè)分量。按照標(biāo)準(zhǔn)不確定度分類可分為A類和B類，A類不確定度由測量數(shù)據(jù)的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差表征，B類不確定度采用非統(tǒng)計(jì)方法評定[3]。

(2)本次試驗(yàn)中質(zhì)量不確定度來源包括對照品稱樣量、供試品稱樣量、供試品平均片重。對照品稱量所用天平為HA225SM-DR十萬分之一天平(普利賽斯/上海天美天平儀器有限公司)，由該天平的計(jì)量檢定證書可知，示值誤差為0.04 mg(0≤m≤5 g)，供試品稱量所用天平為LS220ASCS萬分之一電子分析天平(普利賽斯公司))，由該天平的計(jì)量檢定證書可知，示值誤差為0.1 mg(0≤m≤50 g)。

(3)本次試驗(yàn)中溶液定容體積的不確定度來源有對照品稀釋體積、供試品稀釋體積操作因素，主要影響這兩個(gè)因素不確定度有溫度、重復(fù)性和稀釋過程。

(6)合成不確定度評定

表1 各分量的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Table 1 Relative standard uncertainty of each component

各分量獨(dú)立且不相關(guān)，則合成不確定度為：

高效液相色譜法測定富馬酸喹硫平片的富馬酸喹硫平含量為101.6%，其測量擴(kuò)展不確定度 U=2×0.6654%=1.3308%(K=2)。測量不確定度報(bào)告為(101.6±1.3308)%，K=2。

4 結(jié) 論

由表1可知，試驗(yàn)中的稀釋過程引入的不確定度較大，要求在試驗(yàn)中盡可能一步稀釋到位，避免分人分次稀釋引入較大誤差。本次試驗(yàn)考慮引入不確定度因素是過程中較為常見的，還有一些其它因素沒有納入本次不確定度考慮范圍，在以后試驗(yàn)中可考慮其它因素，如高效液相色譜儀的儀器性能、流動(dòng)相配制過程、色譜柱的選擇、取樣稱樣均勻性、樣品測定重復(fù)性等。在檢驗(yàn)檢測實(shí)驗(yàn)室中，要對每個(gè)品種、每次實(shí)驗(yàn)均報(bào)告不確定度不現(xiàn)實(shí)，也不經(jīng)濟(jì)，但是實(shí)驗(yàn)室努力找出影響檢測結(jié)果的不確定度分量非常必要而且可行[10]，特別是當(dāng)工作中的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)接近臨界值邊緣時(shí)，為了提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，降低實(shí)驗(yàn)報(bào)告風(fēng)險(xiǎn)，也為客戶提供更多信息，此時(shí)出具實(shí)驗(yàn)報(bào)告時(shí)附上不確定度更具說服力，本次試驗(yàn)可為HPLC法測定其它藥物的含量方法提供參考。