鹽酸小檗堿共振光散射光譜法測定酚磺乙胺的含量

王 振，姜瑩瑩，吳佳懿，賀高韻，馬衛興

(江蘇海洋大學藥學院，江蘇 連云港 222005)

酚磺乙胺(Etamsylate)化學名稱為2，5-二羥基苯磺酸二乙胺鹽，是促凝血因子活性藥物[1-2]，可用于預防手術前后出血[3-5]，對治療腦出血、肝出血、消化道出血、泌尿道出血等十分有效。酚磺乙胺片劑是其常見的一種制劑形式。目前關于酚磺乙胺的測定方法主要有高效液相色譜法[6-7]、示波伏安法[8]、化學發光法[9]和可見分光光度法[10]等，以上各種方法各有優缺點，因此開發靈敏快速測定酚磺乙胺的新方法具有現實意義。共振光散射光譜法[11-13]是一種靈敏快速檢測技術，至今未見用于酚磺乙胺的含量測定。

實驗發現酚磺乙胺無共振光散射信號，而酚磺乙胺的磺酸根陰離子在與鹽酸小檗堿發生離子締合反應后，產生的離子締合物使得共振光散射信號顯著增強。依此建立共振光散射光譜法測定藥物酚磺乙胺的含量。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

pHS-3D型酸度計,中國上海精密科學儀器有限公司；RF-6000型熒光分光光度計,日本島津公司；JJ224BC型電子分析天平,常熟市雙杰測試儀器廠。

酚磺乙胺(Etamsylate)，(分析純，羅恩試劑)，配置成1 mg·L-1的水溶液；鹽酸小檗堿(Berberine hydrochloride，分析純，天圣制藥集團股份有限公司)，配置成5×10-4mol·L-1的鹽酸小檗堿溶液；在 0.04 mol/L的磷酸(分析純，南京化學試劑有限公司)、硼酸(分析純，南京化學試劑有限公司)和醋酸(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)混合液中加入不同體積的 0.2 mol/L的氫氧化鈉制成伯瑞坦-羅賓森(Britton-Robinson，BR)緩沖溶液，在酸度計上調制pH值；實驗用水為去離子水。

2 實驗方法

試劑制備：將酚磺乙胺溶液、鹽酸小檗堿溶液和BR緩沖溶液分別加入10 mL比色管中并用去離子水稀釋至刻度，進行充分的振蕩后靜置待測，該溶液為樣品溶液。另以鹽酸小檗堿混合BR溶液于10 mL比色管中，用去離子水稀釋至刻度，做試劑空白溶液參比。

方法：在RF-6000熒光分光光度計上設置同步掃描并且令激發波長(λex)等于發射波長(λem)，繪制共振光散射圖譜，測得樣品溶液最大散射峰峰值為IRSL1，試劑空白溶液最大散射峰峰值為IRSL2，以試劑空白參比的樣品溶液共振光散射強度為ΔIRSL， ΔIRSL=IRSL1-IRSL2。

3 結果與討論

3.1 光譜分析

按照實驗方法配制樣品溶液和試劑空白溶液，掃描 200 ～400 nm范圍內(λex=λem)的共振光散射光譜，結果如圖1所示，曲線2為樣品溶液的共振光散射圖譜，曲線1為試劑空白溶液共振光散射圖譜，由圖可知兩種溶液在297 nm處出現最大共振光散射峰峰值且差值也為最大值，說明離子締合物在此處使共振光散射信號增強，故選擇 297 nm作為檢測波長。

圖1 共振光散射光譜圖Fig.1 Resonance light scattering spectra

3.2 pH值影響

在鹽酸小檗堿測定酚磺乙胺含量的實驗中，緩沖介質起著重要的作用，因此對緩沖液的pH值進行優化。通過實驗考察了多種緩沖液如：Clark-Lubs、鹽酸、BR等對共振光散射體系的影響后，由于BR緩沖液在反應體系中維持穩定的pH值，故選用BR緩沖液作為緩沖介質。

按照實驗方法配制樣品溶液和試劑空白溶液且固定兩者用量并在pH1.81～6.09范圍內對緩沖液pH值進行優化測試，計算ΔIRSL。結果如圖2所示，隨著pH值的不斷升高，ΔIRSL呈現先增強到最大值后緩慢降低的趨勢，pH值等于2.87時ΔIRSL為最大值，故選擇pH 2.87的BR緩沖液作為緩沖介質進一步實驗。

圖2 pH值的影響Fig.2 Effect of pH-value

3.3 緩沖液用量影響

檢測酚磺乙胺需要穩定的pH環境，BR緩沖液作為實驗的重要介質，在確定緩沖液pH值后，對緩沖液的用量進行優化實驗。按照實驗方法配置樣品溶液和試劑空白溶液，在測定過程中逐量提高pH 2.87 BR緩沖液的用量，測定后計算ΔIRSL。

結果如圖3所示，當pH 2.87 BR緩沖液用量0.8 mL時，ΔIRSL出現最大值，而隨著緩沖液用量增加時，散射信號差值逐漸降低，說明介質離子增多發生了競爭關系才使得信號差值降低。故選擇0.8 mL作為緩沖液的最佳用量。

圖3 緩沖液用量的影響Fig.3 Effect of buffer dosage

3.4 鹽酸小檗堿用量影響

鹽酸小檗堿是測定酚磺乙胺片劑中主要成分含量的重要試劑也是與酚磺乙胺反應的離子締合劑，其用量影響測定結果的精確性，為此考察鹽酸小檗堿溶液用量對ΔIRSL產生的影響。按照實驗方法配制樣品溶液和試劑空白溶液，在測定過程中逐量提高鹽酸小檗堿溶液的用量，測定后計算ΔIRSL，結果如圖4所示：共振光散射強度差值總體趨勢呈先增后減，在0.8 mL產生最大差值，因此選用0.8 mL的鹽酸小檗堿溶液作為反應最佳的離子締合試劑。

圖4 鹽酸小檗堿用量的影響Fig.4 Effect of the volume of berberine hydrochloride

3.5 工作曲線和檢測限

在系列10 mL比色管中，分別準確加入1 mg·L-1的酚磺乙胺標準溶液，按照實驗方法進行檢測，其掃描光譜以及繪制的工作曲線如圖5與圖6所示，酚磺乙胺在0.02 ～0.10 mg·L-1濃度范圍內其離子締合物的共振光散射強度與濃度的線性關系良好，線性回歸方程為：IRLS=32060.36C+178.02，相關系數R=0.9994，檢出限(LOD)公式為LOD=3d/k，其中，對試劑空白進行測定11次，求得標準偏差即為d，工作曲線的斜率即為k，依據實驗測得的數據計算得出該方法的檢出限：0.013 mg·L-1。

圖5 酚磺乙胺體系共振光散射光譜圖Fig.5 Resonance light scattering spectra of etamsylate system

圖6 工作曲線Fig.6 Work curve

3.6 干擾物質的影響

表1 干擾試驗結果Table 1 Interference test results

酚磺乙胺作為藥物較多為片劑，在片劑的制作過程中需加入輔料，因此在最佳實驗條件下本研究考察了常見的金屬離子、氨基酸、淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、葡萄糖等物質對反應體系共振光散射強度的影響。考察結果見表1，測定誤差在±5%范圍內，以下物質對實驗體系幾乎不造成影響，符合藥物分析的要求。

3.7 回收實驗

將酚磺乙胺片研磨成粉，稱取適量模擬片粉于200 mL容量瓶中，加去離子水稀釋定容制成1 μg·mL-1的待測液，按照實驗方法進行光譜掃描測定，平行測定11次，測定結果如表2所示。回收率在98.75%～101.30%范圍內，平均回收率為100.58%，相對標準偏差RSD為0.87%。

表2 回收實驗結果Table 2 The result of the recovery experiment

3.8 樣品分析

將酚磺乙胺片(標示量為0.25 g/片)研磨成粉，精密稱取100 mg置于1 L的容量瓶中，加入去離子水定容，搖勻得酚磺乙胺片樣品制備原液。將該原液用去離子水稀釋100倍，得樣品稀釋液，準確吸取適量該樣品稀釋液，按照實驗方法配制測定溶液并進行光譜掃描測定，實驗結果如表3所示，本法測定結果與可見分光光度法[10]所得結果進行比較，精密度更佳。

表3 樣品分析實驗結果Table 3 Sample analysis experiment results

4 結 論

在pH 2.87 B-R介質中，基于酚磺酸根陰離子與鹽酸小檗堿陽離子發生離子締合反應生產離子締合物導致體系共振光散射信號在297 nm處增強，建立了共振光散射光譜測定酚磺乙胺的新方法，用于酚磺乙胺片劑含量測定符合藥物分析要求，方法靈敏度高、重現性好，為酚磺乙胺片劑質量控制提供了新思路。