快速檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留的超高效方法

耿春輝，張忠一，張嘉楠，段培姿

（1.衡水市食品藥品檢驗檢測中心，河北 衡水 053000；2.滄州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，河北 滄州 061000；3.秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，河北 秦皇島 066000；4.衡水市農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督管理站，河北 衡水 053000）

擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是模擬天然除蟲菊素由人工合成的一類殺蟲劑，使用頻繁，占全世界農(nóng)藥銷售量的1/3以上。目前報道過的擬除蟲菊酯的毒性效應(yīng)和健康風(fēng)險主要有：神經(jīng)毒性、細(xì)胞毒性、基因毒性、生殖毒性、生長發(fā)育毒性、代謝毒性、攝入風(fēng)險、殘留風(fēng)險和致癌風(fēng)險等[1]。為保障人民的食品安全，建立一種快速、簡便準(zhǔn)確的檢測方法意義重大。

檢測擬除蟲菊酯類農(nóng)藥主要方法有氣相色譜法[2]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[3]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[4]等，本方法采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀法和QuEChERS方法相結(jié)合，針對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥極性弱和含氯元素等化學(xué)性質(zhì)，采用乙腈提取，使用C18色譜柱分離，建立了快速方便、回收率高和試劑消耗量少的殘留分析方法[5]。實現(xiàn)了多種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的快速檢測方法，可為樣品分析提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：Waters Xevo TQ超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜儀（沃特世科技公司）、色譜柱：Eclipse C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，粒徑1.7μm），高速離心機LGR10-4.2（上海普瑞塞斯儀器公司）、均質(zhì)機配T18刀頭（德國艾卡公司）、TTL-800振蕩混勻器（北京同泰聯(lián)公司）和50 mL離心管（賽默飛世爾公司）。

試劑：甲醇、甲酸、乙腈、NaCl和乙酸銨，以上試劑均為色譜純，純水（符合GB/T 6682一級水要求）。

標(biāo)準(zhǔn)品：聯(lián)苯菊酯、氯菊酯和溴氰菊酯（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所，含量：1 000μg/mL）。

1.2 樣品前處理方法

蔬菜樣品經(jīng)勻漿機粉碎后，準(zhǔn)確稱量試樣5 g，加入50 mL離心管中，加10 mL乙腈，振蕩10 min。加入2 g NaCl后再振蕩5 min，10 000 r/min高速離心5 min。吸取上層乙腈1 mL，過0.2μm濾膜后上機檢測。

1.3 色譜條件設(shè)置

色譜柱：Eclipse C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，粒徑1.7 μm）；流動相A為甲醇；流動相B為0.1%甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸銨）；進(jìn)樣量：2μL；流速300μ/min；柱溫40.0℃。液相梯度洗脫程序為：0～2.5 min時，A相20%～70%，B相80%～30%；2.5～5.5 min時，A相70%～97%，B相30%～3%；5.5～6.5 min時，A相97%，B相3%；6.51～7.5 min時，A相20%，B相80%。梯度洗脫程序設(shè)置見表1。

表1 梯度洗脫程序設(shè)置表Tab.1 The gradient elution program setting table

1.4 質(zhì)譜條件設(shè)置

電離模式：ESI+；掃描方式：MRM全掃描；源溫：150℃；脫溶劑流量（Desolvation）：1 000 L/h；脫溶劑溫度（Desolvation Temp）：400℃；毛細(xì)管電壓（Capillary）：3.2 kV。質(zhì)譜方法設(shè)置見表2。

表2 多反應(yīng)監(jiān)測參數(shù)設(shè)置表Tab.2 The multiple reaction monitoring parameter setting table

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

為提高目標(biāo)化合物的分離檢測效果，對色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化：一是對進(jìn)樣量進(jìn)行了選擇，經(jīng)測試確定進(jìn)樣量為2μL，此時可同時兼顧降低基質(zhì)效應(yīng)和目標(biāo)化合物靈敏度2個方面；二是流動相選擇甲醇體系，此時目標(biāo)化合物的靈敏度比使用乙腈體系時更高，可以避免在同時測定多個化合物檢測時出峰時間過于集中和影響分離效果。聯(lián)苯菊酯、氯菊酯和溴氰菊酯分別見圖1、圖2和圖3。

圖1 聯(lián)苯菊酯（黃瓜基質(zhì)，0.02 mg/kg添加量）質(zhì)譜圖Fig.1 The mass spectrum of bifenthrin

圖2 氯菊酯（黃瓜基質(zhì)，0.02 mg/kg添加量）質(zhì)譜圖Fig.2 The mass spectrum of permethrin

圖3 溴氰菊酯（黃瓜基質(zhì)，0.02 mg/kg添加量）質(zhì)譜圖Fig.3 The mass spectrum of deltamethrin

2.2 前處理方法和儀器條件的優(yōu)化

在前處理步驟中，增加乙腈提取液的用量，延長振蕩時間，從而提高目標(biāo)化合物的提取效率，提取過程中也同時進(jìn)行了樣品的稀釋，既能保證靈敏度，又能夠有效降低基質(zhì)效應(yīng)干擾。

在質(zhì)譜方法中，進(jìn)行目標(biāo)化合物調(diào)諧時，經(jīng)試驗，用乙腈將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至1μg/mL濃度進(jìn)行，選取加NH4+峰母離子時響應(yīng)較好，脫溶劑溫度（Desolvation Temp）在400℃時，目標(biāo)化合物響應(yīng)程度最高。氯菊酯選用了同位素峰作為定性離子對。

2.3 定量限和線性范圍

分別配制濃度為2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和50μg/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，上機檢測，目標(biāo)化合物的保留時間RT、線性方程、相關(guān)系數(shù)和定量限見表3，其中氯菊酯有同分異構(gòu)體，離子色譜圖為雙峰，有兩個保留時間。

表3 空白加標(biāo)試驗中的目標(biāo)化合物檢測結(jié)果情況表Tab.3 The test results of target compounds in blank spike test

2.4 加標(biāo)回收率試驗

稱取韭菜、黃瓜和香菇3種空白基質(zhì)樣品，分別加標(biāo)0.04 mg/kg，采用上述前處理方法和儀器設(shè)置方法進(jìn)行加標(biāo)回收檢測，每個樣品做6個平行樣，分別計算每種基質(zhì)中每個目標(biāo)化合物的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD和平均回收率。結(jié)果見表4。

3 結(jié)論

試驗利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和QuEChERS方法相結(jié)合，建立了擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的快速檢測方法，該方法通過增加振蕩時間，加大乙腈用量、優(yōu)化色譜和質(zhì)譜檢測條件，提高了分離效果，降低了基質(zhì)效應(yīng)。能夠?qū)崿F(xiàn)低成本、簡便和快速的進(jìn)行擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測。

試驗結(jié)果表明：使用該方法時，目標(biāo)化合物的回收率、重復(fù)性和定量限均能滿足檢測要求，方法操作簡單，適合進(jìn)行大批量蔬菜的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥快速篩查。按此方法，對某地蔬菜進(jìn)行了風(fēng)險篩查，2 d內(nèi)共檢測蔬菜樣品102批次，檢出聯(lián)苯菊酯2批次。