垂盆草總黃酮含量測定及分析

何 冰 ， 馬生健 ，何旭東

（1. 嶺南師范學院基礎教育學院，廣東 湛江 524048；2. 湛江幼兒師范專科學校，廣東 湛江 524084；3. 嶺南師范學院，廣東 湛江 524048）

垂盆草（Sedum sarmentosum Bunge），又稱爬景天、鼠牙半支蓮、養雞草、狗牙齒等[1]，系景天科多年生草本多肉植物，在我國大部分地區均有分布。該草可全株入藥，性涼、味甘、淡，用來泡水喝或煎湯有清熱解毒、利尿消腫、排膿生肌之效，常用于治療濕熱黃疸、小便不利、癰腫瘡瘍、慢性肝炎等癥；其莖葉脆嫩多汁、微酸，亦可作蔬菜食用，是一種可藥、可食、可觀賞的植物[2]。

研究發現，垂盆草中含有垂盆草苷、黃酮類、甾醇類和三萜類等化合物[3-4]，其中垂盆草苷對四氯化碳性肝細胞損傷有明顯保護作用，可控制乙肝和丙肝病情發展，對降低血清谷丙轉氨酶有顯著療效，也可減輕甚至消除肝炎患者的口苦、胃口不好、小便黃等癥狀。潘金火等人[5-6]對垂盆草的保肝降酶活性成分進行了一系列的研究，證明其具有保肝降酶作用的活性成分主要為苷類和黃酮類物質，可見黃酮是垂盆草保肝降酶、修復損傷肝細胞、抗腫瘤、抗炎抑菌的主要活性成分之一，對于心血管疾病、腫瘤以及癌癥等疾病都具有預防和治療價值，甚至可以作為弱雌性激素治療更年期綜合癥[7]。

近年來，對垂盆草的研究大多集中在肝病治療中的藥理作用及臨床應用研究進展[8-12]，也有垂盆草HPLC 指紋圖譜[13-14]、救治蛇傷[15]、生長[16-19]等部分相關報道。通過采用紫外分光光度法對新鮮采摘的垂盆草總黃酮含量進行測量和分析，以提高其利用率，為進一步提升垂盆草藥用價值及食用價值提供一定的科學依據和數據支撐。

1 材料和方法

1.1 材料

所用材料，均采摘于嶺南師范學院植物園內自種藥材垂盆草。挑選生長狀態相似的垂盆草，進行分類、洗凈、瀝水，用吸水紙吸干表面水分，備用。

蘆丁標準品（供繪制測定黃酮浸出率標準曲線用），編號為100080-200707，中國食品藥品檢定研究院提供；4%NaOH 溶液、10%Al（NO3）3溶液、5%NaNO2溶液、50%乙醇等所用試劑，均為分析純（AR 級）。

1.2 試驗方法

1.2.1 待測樣品的制備

取3 個不同植株的垂盆草材料，精密稱取垂盆草藥材樣品3.000 g，置于旋轉蒸發器中，加入12BV的50%乙醇溶液，100 ℃下回流提取1 h 至無色，待冷卻到室溫后取出樣品溶液。置于高速冷凍離心機以轉速5 000 r/min 條件下離心10 min，倒出上清液，再將沉淀加入12 BV 的50%乙醇溶液轉入旋轉蒸發器，100 ℃進行二次提取1 h，冷卻，以轉速5 000 r/min 離心10 min，得上清液。將2 次提取的上清液混合，加入50%乙醇定容至1 000 mL，即可得到樣品待測液。

1.2.2 顯色反應

取待測樣品溶液各1 mL 于試管中，分別加入質量分數為5%的NaNO2溶液0.5 mL，搖晃均勻，放置6 min，再加入質量分數為10%的A（lNO）33溶液0.5 mL，混合均勻，放置6 min，然后加入質量分數為4%的NaOH 溶液10 mL，最后加蒸餾水定容至12.5 mL，放置10 min 后即可得到3 個樣品標準液。

1.2.3 垂盆草黃酮含量的計算

根據待測樣品所測的吸光度（A），采用蘆丁標準曲線回歸方程ρ=0.086 5A+0.001 2（相關系數R2=0.999 8） 計算樣品溶液中黃酮的質量濃度（ρ）。

式中：V——樣品溶液體積（1 000 mL）。

2 結果與分析

測得樣品溶液的吸光度，計算樣品中所提取總黃酮質量和黃酮含量。

垂盆草不同樣品的黃酮含量見表1。

表1 垂盆草不同樣品的黃酮含量

根據3 組樣品測得數據的計算結果，其平均值為4.024，即垂盆草黃酮含量為4.024。結果表明，垂盆草黃酮含量較高，有較高的潛在開發利用價值。

3 結論

采用紫外分光光度法從垂盆草中提取出總黃酮并測定了其含量，結果表明利用紫外分光光度法對垂盆草中總黃酮含量進行測定，試驗條件容易控制，操作簡單，重現性好，可作為測定黃酮類化合物的常用方法。

采用硝酸鋁作為黃酮類物質比色測定的顯色劑，主要是因為黃酮母核中含有堿性氧原子，一般又多帶酚羥基，能與鋁離子產生黃色絡合物。加入亞硝酸鈉和氫氧化鈉，可使之在堿性溶液中顯紅色，顯色反應要及時測定，放置過久易褪色。

在垂盆草回流提取總黃酮的過程中，溶劑可能會影響黃酮的純度，因為當溶劑濃度過高是會溶出更多溶于該溶劑的物質，最終導致與真實數據產生較大偏差，在考慮成本的前提下，參考了張瑞霞等人[20]獲得總黃酮最佳提取率的最優工藝條件為乙醇體積濃度50%，溶媒量為12BV，提取的數量次數為2 次，每次1 h。試驗參照此項工藝條件進行，所得結果穩定、重現性好。

試驗測得垂盆草的總黃酮含量較高，高于其他報道中的數據[21]，除試驗系統誤差外，推測原因可能為黃酮提取方法、條件及工藝不同導致。此外，垂盆草種植地的地理條件與氣候條件等因素也可能導致測定結果不同，如有試驗表明夏枯草、金釵石斛、仙鶴草等藥料在種植過程中人為添加生長調節劑會導致總黃酮升高[22-24]，Adriana Elia?ová 等人[25]證明了黃酮含量受銨鹽影響。垂盆草的黃酮含量受生態環境因子的具體影響情況有待進一步研究。

我國垂盆草資源豐富，且大都處于野生狀態，未進行大規模的開采利用。垂盆草中黃酮類化合物含量較高，在醫藥、食用、觀賞和環保等方面具有潛在的開發利用價值。此結果可為垂盆草代茶飲、垂盆草菜品、垂盆草餡料等功能保健系列產品的研究開發和推廣應用提供科學依據和數據支撐。