乳鴿副傷寒沙門氏菌病的診治

王夢(mèng)鴿 江 斌 程龍飛 林 琳 張世忠 黃 瑜 傅光華

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/福建省禽病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 福州 350013；2.福建農(nóng)林大學(xué) 福州 350002）

鴿沙門氏菌病是由沙門氏菌引起鴿的一種急性或亞急性細(xì)菌性疾病，發(fā)病鴿群的主要臨床特征為腹瀉、機(jī)體消瘦，精神沉郁、食欲減退、羽毛凌亂、關(guān)節(jié)異常腫大、單腿站立[1-2]。根據(jù)患鴿的臨床癥狀及剖檢病變，該病可分為神經(jīng)型、腸型、關(guān)節(jié)炎型及內(nèi)臟型等4種不同病癥[1]。1月齡雛鴿對(duì)該病更易感，嚴(yán)重者可引起患鴿死亡，且一年四季均可發(fā)生，氣候多變時(shí)易發(fā)[1-2]。在我國(guó)，肉鴿集約化和規(guī)模化養(yǎng)殖呈現(xiàn)不斷擴(kuò)大趨勢(shì)，然而，由于肉鴿發(fā)病時(shí)抗菌藥物使用過多甚至濫用，導(dǎo)致該菌的耐藥性不斷增強(qiáng)，養(yǎng)殖場(chǎng)一旦發(fā)病難以根治，危害極大[3-4]。沙門氏菌為兼性胞內(nèi)寄生菌，可在宿主細(xì)胞內(nèi)生存繁殖，從而逃避宿主的防御機(jī)能，感染沙門氏菌的患鴿治愈后還會(huì)長(zhǎng)期帶菌，并通過唾液或糞便等持續(xù)排出[5]。沙門氏菌不僅可以通過消化道、呼吸道、皮膚及眼結(jié)膜等不同途徑水平傳播，感染包括人在內(nèi)的多種宿主，也可通過帶菌的種鴿垂直傳播給乳鴿，成為人類感染沙門氏菌的潛在傳染源，開展鴿沙門氏菌病監(jiān)測(cè)具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義[1]。2022年3月，福建省閩侯縣某鴿場(chǎng)飼養(yǎng)的4 000羽24日齡乳鴿陸續(xù)出現(xiàn)腹瀉，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室病原分離鑒定及序列比對(duì)分析，最終確診為乳鴿副傷寒沙門氏菌病，現(xiàn)將診斷情況報(bào)道如下，為預(yù)防和控制該病的流行提供參考依據(jù)。

1 發(fā)病情況與臨床癥狀

福建省閩侯縣某鴿場(chǎng)飼養(yǎng)的4 000羽乳鴿24日齡時(shí)陸續(xù)出現(xiàn)不同程度腹瀉，發(fā)病率55%左右，病死率5.7%。就診時(shí)患病乳鴿主要表現(xiàn)為精神沉郁，食欲減退，體況明顯消瘦，行動(dòng)遲緩，呼吸困難，腹瀉，排黏稠深綠或褐色、有惡臭氣味糞便，部分糞便包裹漿狀的未消化飼料。

2 剖檢病變

剖檢患鴿可見肝臟呈古銅色或暗紅色，部分肝臟表面有壞死；心肌與心包黏連；腎臟腫大出血；肺臟出血；小腸脹氣、腸壁變薄，內(nèi)含綠色或黃綠色或白色帶泡沫的糊狀物。

3 實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)

3.1 細(xì)菌分離鑒定 無菌采集病死鴿的腦、肝臟、小腸內(nèi)容物等組織病料，用滅菌接種環(huán)挑取適量組織劃線接種于麥康凱平板，置37℃恒溫箱培養(yǎng)。24 h后在麥康凱平板上長(zhǎng)出圓形半透明的灰白色菌落。挑取單個(gè)菌落劃線接種于新的麥康凱平板，37℃溫箱培養(yǎng)24 h，獲得純化菌。取少量菌落涂片、革蘭氏染色，鏡檢可見革蘭氏陰性短桿菌。

3.2 藥敏試驗(yàn) 從純化菌中挑取3～4個(gè)菌落接種于LB液體培養(yǎng)基，37℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)18 h，按照藥敏試劑盒說明書進(jìn)行分離菌的藥敏試驗(yàn)。取增殖培養(yǎng)的菌液均勻涂布于麥康凱平板上，將19種藥敏紙片按一定間距擺放在平皿上，室溫靜置15～30 min后，將平板倒置于37℃溫箱靜置培養(yǎng)24 h。取出平板，用游標(biāo)卡尺測(cè)量每個(gè)藥敏紙片抑菌圈直徑，參照中國(guó)藥檢所制定的標(biāo)準(zhǔn)判定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。結(jié)果詳見表1。

表1 分離菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3.3 細(xì)菌的PCR鑒定 根據(jù)沙門氏菌侵襲蛋白A基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)沙門氏菌特異性擴(kuò)增引物，上游引物：SSTF：5'-CAGGTATGACTCGTAAGC-3'；下游引物：SSTR：5'-ATAGTCATTCGCGTGTGG-3'，預(yù)期擴(kuò)增片段為910 bp；禽多殺性巴氏桿菌和大腸桿菌參照施少華等[6-7]建立的方法進(jìn)行檢測(cè)，所有引物由尚亞生物技術(shù)有限公司合成。按照細(xì)菌核酸提取試劑盒的說明提取分離菌的核酸，用所設(shè)計(jì)的特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增體系為：2×PCRMasterMix 25 μL，上下游引物（10 μmol）各1 μL，模板1 μL，補(bǔ)充滅菌去離子水至總體積50 μL。PCR反應(yīng)程序：94℃5 min；94℃40 s，53～55℃30 s，72℃60 s，30個(gè)循環(huán)；72℃10 min，10℃保存。取PCR產(chǎn)物3 μL進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠（含GoldView）電泳，凝膠成像系統(tǒng)觀察并拍照。結(jié)果見圖1，分離菌擴(kuò)增出單一的PCR片段，大小約為910 bp。

圖1 分離菌PCR產(chǎn)物電泳圖

3.4 序列測(cè)定與分析 將PCR陽性擴(kuò)增產(chǎn)物送鉑尚生物技術(shù)（上海）有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果使用NCBI blast進(jìn)行在線比對(duì)。序列比對(duì)結(jié)果顯示，分離菌株與GenBank中登錄的沙門氏菌MDUST305毒株侵襲蛋白A基因同源性高達(dá)98.3%，表明分離菌為傷寒沙門氏菌。

4 診 斷

根據(jù)該病的臨床癥狀、剖檢病變及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，診斷為鴿副傷寒沙門氏菌病。

5 防 治

5.1 治療 藥物治療雖然可減少發(fā)病死亡，但治療后鴿子仍將長(zhǎng)期帶菌和排菌。治療該病的藥物有很多，如鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氟苯尼考、硫酸新霉素、磺胺二甲基嘧啶、硫酸慶大霉素、丁胺卡那霉素、硫酸黏菌素等[1,3]，但沙門氏菌容易產(chǎn)生耐藥性，臨床上需對(duì)分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)后選擇敏感藥物進(jìn)行治療[8-9]。此次藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，分離菌株對(duì)氧氟沙星和壯觀霉素敏感，對(duì)阿米卡星、諾氟沙星、卡那霉素中敏，選取藥敏試驗(yàn)篩選到的敏感藥物對(duì)鴿群進(jìn)行針對(duì)性治療，取得了良好效果。

5.2 預(yù)防 鴿沙門氏菌病的預(yù)防主要還是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，搞好舍內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生，保持鴿舍良好的采光和通風(fēng)，保證鴿群飲水清潔和飼料的營(yíng)養(yǎng)均衡，適當(dāng)補(bǔ)充益生菌和微量元素等，提高機(jī)體抵抗力[1-2]。平時(shí)制定嚴(yán)格人員、物流、飼養(yǎng)舍和環(huán)境的消毒計(jì)劃，做好鴿場(chǎng)的檢疫和凈化工作，定期對(duì)鴿舍不同區(qū)域內(nèi)的環(huán)境進(jìn)行消毒，阻斷疫病傳播途徑，同時(shí)，要利用多種檢測(cè)手段定期對(duì)鴿群進(jìn)行感染篩查，及時(shí)淘汰陽性帶菌鴿。

6 討 論

1）沙門氏菌是鴿的一種常見病原體，肉鴿養(yǎng)殖的規(guī)模不斷擴(kuò)大，鴿沙門氏菌感染仍十分嚴(yán)重[4,9]。沙門氏菌還是一種危害較大的人獸共患病原，對(duì)人、家畜、家禽及其他動(dòng)物均有致病性，且各種年齡的動(dòng)物均可感染，尤其是被污染的動(dòng)物及其制品，通過食物鏈傳播給人及其他動(dòng)物[1-2]。因此，應(yīng)該在肉鴿養(yǎng)殖生產(chǎn)中密切關(guān)注鴿沙門氏菌病的流行情況，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早隔離、早治療，盡最大程度減少損失。

2）抗生素的應(yīng)用對(duì)鴿沙門氏菌病的防控具有重要作用，但由于過量或不規(guī)范的使用抗菌藥物，導(dǎo)致沙門氏菌普遍存在耐藥性[3-4]，使該病的防治日益復(fù)雜嚴(yán)峻。在養(yǎng)殖生產(chǎn)中可采取輪換、交替、聯(lián)合等科學(xué)的用藥方式，從而避免或減少耐藥菌株產(chǎn)生。抗生素替代品如益生菌、益生元、抗菌肽、植物提取物以及復(fù)合添加劑等[8]，其在替代抗生素防控鴿沙門氏菌病上也具有重要意義。