老年患者梅毒螺旋體特異性抗體生物學(xué)假陽性的原因及臨床意義

陳 娟 繆小花 吳春梅 王信國

福建醫(yī)科大學(xué)附屬閩東醫(yī)院輸血科，福建福安 355000

梅毒是一種具有高度傳染性的性傳播疾病[1-2]，會對機體多個臟器和系統(tǒng)造成損害，導(dǎo)致臨床癥狀體征復(fù)雜多樣，具有較大的危害性[3]。梅毒會導(dǎo)致艾滋病病程加快，妊娠期婦女感染梅毒會導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局[4]，會嚴重危害人類的生命健康，因此需要加強對梅毒的防控工作。及時、準確的檢測結(jié)果可起到輔助診斷、指導(dǎo)治療等作用，對于防控梅毒意義重大[5]。近年來在臨床檢測工作中發(fā)現(xiàn)，部分老年患者無任何梅毒感染的臨床癥狀體征、不潔性生活史、接觸史，但梅毒螺旋體特異性抗體檢測結(jié)果為陽性。老年患者假陽性的出現(xiàn)會對臨床診斷造成不良影響，且可能引起患者及其家屬的不滿，因此需要了解老年患者出現(xiàn)假陽性的原因，以便消除相關(guān)影響因素并向患者及其家屬解釋。故本研究就老年梅毒患者抗體檢測結(jié)果呈假陽性的原因進行分析總結(jié)，旨在為臨床降低假陽性率提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2021年1—6月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬閩東醫(yī)院輸血科就診的7306例老年患者的臨床資料。其中男4026例，女3280例；年齡60～98歲，平均（78.56±3.81）歲。本研究臨床資料及血液收集得到醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會認可。

1.2 方法

先應(yīng)用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（chemiluminescence microparticle immunoassay，CMIA）和梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗（tolulized red unheated serum test，TRUST）進行初篩，二者均陽性且CMIA的S/CO值≥10者，TPPA陽性率也是100%[6-9]，剩余的CMIA初篩單獨陽性者再經(jīng)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗復(fù)篩。

CMIA、TRUST檢測：①CMIA：對所有患者的清晨空腹狀態(tài)下的外周靜脈血4 ml進行離心處理，離心速率為3500 r/min，時間為5 min。獲得上層血清后，應(yīng)用雅培i2000SR化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀以及雅培原裝配套試劑、校準物和質(zhì)控物對血清梅毒螺旋體特異性抗體進行測定。嚴格按照說明書進行操作。梅毒螺旋體抗體S/CO值（S代表標本sample的OD值，CO即cut off，S/CO值表示檢測的OD值和臨界值cut off的比值）≥1則判為陽性。②TRUST：將50 μl血清放置在卡片圓圈中，在圈內(nèi)均勻分布。加TRUST抗原輕輕搖勻后，應(yīng)用9號針頭將入一滴TRUST抗原。卡片在水平旋轉(zhuǎn)儀上以（100±2）r/min的速度旋轉(zhuǎn)8 min，后立即在亮光下進行觀察。凝集反應(yīng)強度分級為，3+～4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的紅色絮狀物，液體清亮；2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到中的紅色絮狀物，液體較清亮；1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的黑色絮狀物，液體渾濁；-：圓圈內(nèi)僅見甲苯胺紅顆粒集中于中央一點或均勻分散。其中出現(xiàn)1+～4+強度的凝集反應(yīng)則判定為陽性。

梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗：針對初篩陽性者，先將患者的血清應(yīng)用樣品稀釋液進行不同倍數(shù)（5、10、20、40）的稀釋，在 20、40 倍孔中分別加入未致敏及致敏明膠顆粒，均為25 μl。反應(yīng)板放置在濕盒中2 h，對反應(yīng)結(jié)果進行觀察。陽性標準：致敏離子出現(xiàn)不規(guī)則、雜亂的聚集。

1.3 觀察指標及評價標準

觀察各組患者的梅毒螺旋體特異性抗體檢測結(jié)果。計算CMIA的檢測效能。敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%；準確性=（真陽性+真陰性）/（真陽性+假陰性+假陽性+真陰性）×100%；誤診率（假陽性率）=假陽性/（假陽性+真陰性）×100%；漏診率=假陰性/（真陽性+假陰性）×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

運用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

7306例老年患者中，684例（9.36%）經(jīng)CMIA單獨檢測，結(jié)果顯示血清梅毒螺旋體特異性抗體呈陽性，其中265例（3.63%）患者經(jīng)CMIA、TRUST檢測結(jié)果顯示血清梅毒螺旋體特異性抗體為陽性且CMIA 的S/CO值≥10。其余的419例患者經(jīng)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗復(fù)篩陽性例數(shù)為373例，陰性例數(shù)為46例，其陽性率為89.02%，假陽性率為10.98%（46/419）。

2.2 不同年齡段老年患者的檢測結(jié)果

60～69歲患者的CMIA單獨檢測陽性率、單獨檢測陽性進行梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗復(fù)篩比例均比70～79歲、≥80歲患者高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）；不同年齡段的CMIA+TRUST檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）；≥80歲患者的復(fù)篩陽性率較60～69歲、70～79歲患者更低，而假陽性率較其他兩個年齡段更高，但不同年齡段之間的數(shù)據(jù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）。見表1。

表1 不同年齡段老年患者的檢測結(jié)果

2.3 CMIA的檢測效能

對CMIA檢測呈陽性的684例患者應(yīng)用梅毒螺旋體明膠顆凝集粒試驗效能檢測，對血清梅毒螺旋體特異性抗體的檢測敏感度為100.00%（638/638），特異度為99.31%（6622/6668），準確性為99.37%（7260/7306），誤診率為 0.69%（46/6668），漏診率為0（0/683）。見表2。

表2 CMIA的檢測效能

3 討論

近年來由于人們?nèi)狈γ范镜刃詡鞑ゼ膊∠嚓P(guān)知識的了解以及防護程度不足，梅毒感染已不僅僅是在高危人群中發(fā)生，逐漸轉(zhuǎn)向普通人群，大量隱性感染者的增加導(dǎo)致梅毒防控工作面臨著較大的挑戰(zhàn)[10-11]。臨床發(fā)現(xiàn)在老年患者的標本檢測過程中會出現(xiàn)梅毒螺旋體特異性抗體假陽性情況[12]，增加了醫(yī)生對患者及其家屬的解釋工作。掌握出現(xiàn)假陽性的原因，可為患者及其家屬給出合理解釋，同時有助于今后減少假陽性檢測結(jié)果的出現(xiàn)[13]。

本研究數(shù)據(jù)顯示，有265例患者應(yīng)用CMIA+TRUST檢測梅毒螺旋體特異性抗體陽性，即二者均陽性且CMIA的S/CO值≥10，TPPA陽性率也是100%。60～69歲患者CMIA單獨檢測陽性率最高，與該年齡段免疫力、抵抗力開始下降，首次患病率增高有關(guān)[6-9]，可能有不少梅毒感染者在不自覺的情況下臨床治愈，但是由于梅毒血清抵抗的緣故，其血清抗體終身陽性；或可能是隱性感染，因其他疾病住院檢查而被發(fā)現(xiàn)[14-15]；也可能因為部分老年男性喪偶，加之其文化水平較低以及經(jīng)濟狀況的局限，導(dǎo)致其進行非法性交易且未進行安全性保護措施，造成梅毒感染的概率增高。經(jīng)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗復(fù)篩后，老年患者的血清梅毒螺旋體特異性抗體假陽性率為10.98%，低于殷麗麗等[5]的研究報道。隨著年齡的增長，老年患者的假陽性率呈升高趨勢[13]，提示年齡與梅毒抗體假陽性率存在密切關(guān)系。同時還可以發(fā)現(xiàn)，CMIA對梅毒螺旋體特異性抗體具有較高的敏感度，但受到某些因素的影響，特異度、準確性有所下降，出現(xiàn)假陽性情況。結(jié)合檢測結(jié)果和臨床經(jīng)驗進行分析，梅毒抗體假陽性的原因主要有以下幾點：①年齡因素。隨著年齡的不斷增長，老年人的機體功能也在逐漸減退，易出現(xiàn)免疫功能異常情況，產(chǎn)生一些異常蛋白質(zhì)，會對檢測結(jié)果造成干擾[16-17]，故檢測結(jié)果呈假陽性；②技術(shù)性因素。標本不合格或保存不當、離心不當造成標本血清中存在纖維蛋白原等絮狀物、試劑污染或過期、檢測儀器偏差、工作人員操作不規(guī)范等多種因素均可導(dǎo)致檢測結(jié)果假陽性，但能夠通過重復(fù)試驗排除技術(shù)性假陽性結(jié)果[18-19]；③其他原因。部分患者體內(nèi)可能存在腸道螺旋體等其他螺旋體共生現(xiàn)象[20]，會導(dǎo)致交叉反應(yīng)抗體產(chǎn)生，對檢測結(jié)果造成干擾。針對上述影響因素，相關(guān)工作人員應(yīng)嚴格按照有關(guān)規(guī)章制度進行操作，確保標本、試劑質(zhì)量合格，定期對檢測儀器進行檢查，在檢驗期間加強質(zhì)控，針對初篩陽性者需要進行復(fù)篩，以減少假陽性結(jié)果，并結(jié)合患者的臨床癥狀、病史等情況綜合診斷。本研究結(jié)果顯示，CMIA的敏感度為100.00%，特異度為99.31%，準確性為99.37%，誤診率為0.69%，漏診率為0，提示CMIA的敏感度和準確度較高且全自動化，適合大規(guī)模篩查，但確證建議采用WHO及國內(nèi)公認的梅毒抗體血清試驗的“金標準”—梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗，據(jù)報道，梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗在窗口期檢測時會呈假陰性，因此若患者經(jīng)濟和基礎(chǔ)條件允許的話，也可選用聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）檢測方法或鍍銀染色法進行確證[21]。因本研究樣本量較大，未能進一步分析患者病理、抗生素濫用等因素與老年患者梅毒螺旋體特異性抗體假陽性率的相關(guān)性，且未能與青壯年的檢測結(jié)果進行比較，需在今后加強此方面的研究。

綜上所述，老年患者的梅毒螺旋體特異性抗體假陽性率會隨著年齡增高而升高，且技術(shù)性因素等也可能引起假陽性，因此臨床在做好針對性預(yù)防措施的同時應(yīng)謹慎做好對梅毒的診斷和解釋工作。