P16、P53、Ki-67及CyclinD1在不同類型宮頸腺癌中的表達及其與HPV感染的關系

萬 霞 陳 萍 廖悅華

廣東省江門市中心醫院病理科，廣東江門 529000

[關鍵字] 宮頸腺癌；人乳頭瘤病毒感染；P16；P53；Ki-67；CycilinD1

在所有醫護人員和學者的共同努力下，宮頸癌防治取得了明顯進步，特別是宮頸鱗癌[1]。但宮頸腺上皮病變的防治仍存在困難。宮頸腺上皮病變和前階段病變，往往發生在宮頸腺體或宮頸管內隱窩位置，所以陰道鏡檢查和宮頸脫細胞學檢查[2]均無法更好地獲得病變組織。與宮頸鱗癌進行比較，臨床在診斷宮頸腺上皮病變方面的標準較為薄弱，判定其組織形態學，仍為目前所面臨的重點問題。目前已公認為人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染為誘發宮頸癌的主要因素[3]，且已證實HPV感染與宮頸鱗癌病變有密切關系，但HPV感染是否與宮頸腺癌發生有密切關系，目前暫未達到統一定論，且宮頸腺癌形態分類具有一定復雜性。所以，急切需對宮頸腺癌分子生物學和病因做出探討，以更好地防治宮頸腺癌，為臨床診治宮腺癌提供方向和指導意義。本研究旨在分析P53、Ki-67、CyclinD1、P16與宮頸腺癌發生之間的關系，現報道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選取江門市中心醫院2012年1月至2020年12月確診80例宮頸原位腺癌及浸潤性腺癌患者作為觀察組，并選取80名檢查健康者為對照組。觀察組：年齡30～78歲，平均（56.26±4.21）歲；HPV陽性71例，陰性9例；HPV相關性腺癌41例，非HPV相關性腺癌39例。對照組：年齡31～79歲，平均（56.38±4.25）歲；HPV陽性16例，陰性64例。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞ 0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準后實施，研究對象均簽署知情同意書。

納入標準：①觀察組各患者均得到病理檢查、影像學方式等綜合確診；②均可提供完整、詳細的就診記錄。排除標準：①病灶已出現轉移者；②合并其他癌性病變者，如乳腺癌、肺癌、肝癌等；③精神、智力等因素影響研究方案無法配合者。

1.2 方法

宮頸腺癌組織學標本用免疫組化標記法檢測。將標本做脫蠟、水化處理，高壓加熱，加入抗原修復液，將內源性過氧化物酶進行阻斷，加入抗體（鼠抗人P53單克隆抗體、鼠抗人P16單克隆抗體、鼠抗人Ki-67單克隆抗體、濃縮型兔抗人CyclinD1單克隆抗體）后，再進行顯色、復染、脫水、透明、封片等處理。

子宮頸脫落細胞標本采用廣東凱普生物科技股份有限公司生產的21種HPV亞型檢測試劑盒（PCR+膜雜交法）進行檢測，并用組化方式檢測P16指標。

1.3 觀察指標及評價標準

細胞核、細胞膜或細胞質中出現棕黃色顆粒則判定為陽性信號[4]。P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性判定標準，P16[5]：細胞核中出現陽性信號，或細胞核合并胞質，未出現陽性著色則判定為陰性（-），棕褐色則為陽性（+++）、棕黃色則為陽性（++）、黃色則為陽性（+）。CyclinD1[6]：棕黃色顆粒處于細胞核中。Ki-67[7]：細胞核中出現陽性信號，細胞增殖指數通過陽性細胞百分比數進行判定，＞30%則為腫瘤性病變，≤30%為良性病變。P53[8]：陽性：≥60%彌漫；陰性：＜5%。比較HPV感染陽性和陰性組P53、Ki-67、CyclinD1陽性率和宮頸腺癌發生率。

標本檢驗均由醫院3名工作時間≥5年的專業醫生負責，若發生分歧則根據判定標準進行討論。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較

觀察組 P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率高于對照組，差異有統計學意義（P＜ 0.05），見表1。

表1 P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較[n（%）]

2.2 HPV感染陽性和陰性組P16、P53、Ki-67、CyclinD1陽性率和宮頸腺癌發生率比較

HPV 感染陽性組 CyclinD1、Ki-67、P53、P16陽性率及宮頸腺癌發生率高于HPV感染陰性組，差異有統計學意義（P＜ 0.05），見表2。

表2 HPV感染陽性和陰性組P53、Ki-67、CyclinD1、P16陽性率和宮頸腺癌發生率比較（x ± s）

2.3 不同類型宮頸腺癌患者P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較

HPV相關性腺癌患者P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率高于非HPV相關性腺癌患者，差異有統計學意義（P＜ 0.05），見表3。

表3 不同類型宮頸腺癌患者P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較[n（%）]

3 討論

宮頸癌為我國目前女性第二大惡性腫瘤，每年新發病例大約有52萬[9]。此為臨床婦科惡性腫瘤中較為常見的一種，主要類型包含腺細胞癌、鱗狀細胞癌；其中，宮頸鱗癌占比達80%～85%，腺癌達10%～15%[10]。早期研討如何篩查宮頸癌均致力于分析HPV檢測和細胞形態學評估。此方式用于早期檢出宮頸癌中，其檢出率非常高，所以宮頸鱗狀細胞癌發生率得到了明顯控制。但將其用于篩查宮頸腺癌病變中，其作用非常有限，隨著近年宮頸腺癌發病率逐年增高，多在年輕女性和宮頸上皮內瘤變中發生[11]。現臨床缺乏篩查宮頸腺癌的有效方式，且隨著人們性觀念變化和社會發展，宮頸癌發病日益年輕化，宮頸腺癌發病則更加年輕化，對女性身體健康造成嚴重威脅。同時，臨床治療宮頸腺癌的方式也與宮頸鱗癌有所不同，所以，迫切需分析宮頸腺癌分子生物學和病因學，進而預防病變發生，為臨床診治疾病和明確診斷、疾病發生機制提供新思路[12]。P16屬于細胞基因，參與調控細胞周期，對細胞分裂和增殖有負調節作用[13]。測定P16基因是否出現變化對判定患者病灶易感性和評估病灶預后存在較大意義。P16蛋白為P16基因編碼產物，在細胞核中，此對細胞分裂周期關鍵酶CDK4抑制因子。并CDK4活性有抑制效果，進而抑制細胞轉至S期，若確實P16基因，則會出現功能缺失，CDK4無法得到抑制，進而造成細胞出現惡性增殖，促進病灶發生。CyclinD1與CDK6、CDK4形成復合物，并為此類物質的調節亞基[14]，G1轉變至S期不可缺少的則為以上兩種周期蛋白依賴性激酶。目前已公認CyclinD1屬于原癌基因，過度表達可造成細胞增殖紊亂，進而發生惡性病變。P53屬抑癌基因，在發生腫瘤細胞和病變發展中均發揮了重要作用。P53基因定位在機體染色體17p13.1，包含突變型、野生型，正常狀況主要體現為野生型[15]。P53蛋白主要由氨基酸組成，現已認定P53異常表達與腫瘤病變和疾病預后不理想存在明顯關系[16]。Ki-67為核蛋白，屬于細胞增殖標記物，此在細胞增殖G2、G1、M、S期均有表達，但在靜止期G0階段無表達。此指標高低與宮頸腺癌轉移、疾病預浸潤程度、分化程度有密切關系。

觀察組P16陽性檢出率為93.75%、CyclinD1陽性檢出率為90.00%、Ki-67陽性檢出率為92.50%、P53陽性檢出率為91.25%，高于對照組的 15.00%、26.25%、23.75%、20.00%；HPV 感 染陽性組CyclinD1陽性率為82.76%、Ki-67陽性率為95.40%、P53陽性率為70.11%、P16陽性率為80.46%，宮頸腺癌發生率為86.21%，高于HPV感染陰性組的 10.96%、39.73%、20.55%、13.70%、6.85%，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。證實了宮頸腺癌中P16、P53、Ki-67及CyclinD1均呈高表達，同時宮頸腺癌發病與HPV感染存在密切關系。HPV屬于DNA病毒，通過黏膜進入到人體靶細胞，并整合DNA到染色體之上，對宿主細胞產生破壞，進而讓組織發生癌變反應。此外，本研究結果還顯示，HPV相關性腺癌患者P16陽性率為85.37%、CyclinD1陽性率為78.05%、Ki-67陽性率為73.17%、P53陽性率為82.93%，高于非HPV相關性腺癌患者的 66.67%、53.85%、46.15%、58.97%，差異有統計學意義（P＜ 0.05），提示HPV感染的宮頸腺癌患者機體P16、P53、Ki-67、CyclinD1陽性率偏高，因此，在此后防控宮頸腺癌中，應重視預防HPV感染。但有關不同類型宮頸腺癌患者體內P16、P53等指標的具體影響機制，此后還需進一步深入研討。

綜上所述，P16、P53、Ki-67及CyclinD1在宮頸腺癌中呈高表達，宮頸腺癌發病與HPV感染存在密切關系，并與P16、P53、Ki-67、CyclinD1表達有關，臨床可將此四項指標作為篩查宮頸腺癌的指標。