子宮頸癌患者組織中CK10、Ki-67表達及臨床意義*

陸天炎 黃瑩瑩 張佳娜

根治性手術是目前國內外公認的治療早期子宮頸癌最有效的手段，但部分患者病情進展迅速，可能難以獲得理想的預后轉歸效果[1-2]。迄今為止，關于子宮頸癌的診斷往往依靠組織活檢、陰道鏡檢查以及HPV 檢測等，然而上述相關診斷方式存在一定的局限性。隨著相關研究的日益深入，不少學者發現分子標志物可能在子宮頸癌早期診斷中具有極其重要的作用，但可用以判斷子宮頸癌進展情況以及預后評估的分子標志物較少[3]。細胞角蛋白（CK）是細胞骨架中間絲蛋白之一，往往存在于上皮組織細胞質內，且有相關研究報道證實，CK10 在惡性腫瘤組織中存在異常表達，可能和子宮頸癌的發生、發展以及預后轉歸密切相關[4]。Ki-67 屬于DNA 結合蛋白之一，廣泛存在于增殖細胞內，介導了驅動細胞周期的調控過程，被廣泛用作鑒別正常生長細胞和腫瘤細胞的增殖狀況，可能和子宮頸癌發展有關[5]。鑒于此，本文通過研究子宮頸癌患者組織中CK10、Ki-67 表達及臨床意義，旨在為臨床治療提供數據支持，現做以下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017 年10 月-2020 年10 月于九江市婦幼保健院完成子宮頸癌切除術的60 例子宮頸癌患者臨床資料。入組標準：（1）所有受試者均經手術病理檢查確診為子宮頸癌；（2）均為成年女性；（3）臨床病歷資料完整。排除標準：（1）入組前接受過放化療等抗腫瘤治療；（2）合并嚴重內科和/或外科疾病；（3）正處于妊娠期或哺乳期；（4）神志異常或伴有精神疾病；（5）研究期間因故退出或失訪。患者年齡44～78 歲，平均（60.11±10.35）歲；體重指數（BMI）19～32 kg/m2，平均（23.16±2.35）kg/m2；受教育年限6～16 年，平均（10.35±1.36）年；病灶直徑2.3～7.7 cm，平均（4.56±1.20）cm；臨床國際婦產科聯盟（FIGO）分期：Ⅰ期56 例，Ⅱ期2 例，Ⅲ期2 例；淋巴結轉移6 例，無淋巴結轉移54 例。該研究經過醫院倫理委員會審批。

1.2 方法 分別采集所有患者的子宮頸癌組織以及癌旁正常組織，采用甲醛固定，并予以石蠟包埋。借助Leica RM 2235 全自動輪轉式切片機完成連續切片，切片厚度以4 μm 為宜。取平切片完成DAB染色處理，之后遵循試劑盒說明書實施固定、血清封閉、洗滌以及DAB 染色處理。隨后采用免疫組織化學法檢測CK10、Ki-67 表達情況，取磷酸鹽緩沖液替代一抗為陰性對照。其中CK10 及Ki-67 鼠單克隆抗體試劑盒、DAB 染色液均選用上海杰浩生物技術有限公司產品。

1.3 觀察指標及判定標準 比較不同子宮頸組織CK10、Ki-67 表達情況，分析上述兩項蛋白表達情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結轉移的關系。結果判定，CK10、Ki-67 相關染色結果均由醫院病理科2 名經驗豐富的醫師以雙盲法完成評估：隨機選擇5 個高倍鏡視野，每個視野細胞數為200 個，觀察陽性細胞占比情況。陽性細胞占比評分：其中陽性細胞占比≤5%為0 分，6%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分。細胞染色評分如下：無染色即0 分，淡黃色即1 分，棕黃色即2 分，棕褐色即3 分。以上述兩種評分乘積作為最終結果，0～3 分記為陰性，4～12 分記為陽性[6]。

1.4 統計學處理 以SPSS 22.0 軟件實現對本研究數據的分析，計量數據通過（）表示，分析前予以正態性與方差齊性檢驗，呈正態分布，即開展t 檢驗。計數資料的表示以率（%）實現，進行χ2檢驗。以受試者工作特征（ROC）曲線分析明確CK10、Ki-67 評估子宮頸癌患者臨床分期以及淋巴結轉移的效能。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同子宮頸組織CK10、Ki-67 表達對比 子宮頸癌組織CK10 陽性率為18.33%，低于癌旁正常組織的80.00%，而Ki-67 陽性率為88.33%，高于癌旁正常組織的11.67%，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同子宮頸組織CK10、Ki-67表達對比[例（%）]

2.2 CK10、Ki-67 表達情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結轉移的關系 臨床FIGO 分期Ⅱ、Ⅲ期患者CK10 陽性率均為0，均低于臨床FIGO 分期Ⅰ期患者，有淋巴結轉移患者CK10 陽性率為0，低于無淋巴結轉移患者的20.37%，但差異均無統計學意義（P＞0.05）；臨床FIGO 分期Ⅱ、Ⅲ期患者Ki-67 陽性率均為100%，均高于臨床FIGO 分期Ⅰ期患者，有淋巴結轉移患者Ki-67 陽性率為100%，高于無淋巴結轉移患者，但差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2、3。

表2 CK10表達情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結轉移的關系[例（%）]

2.3 CK10、Ki-67 表達評估子宮頸癌患者臨床分期Ⅱ、Ⅲ期效能的ROC 曲線分析 經ROC 曲線分析可得，CK10 與Ki-67 聯合檢測評估子宮頸癌患者臨床分期的曲線下面積、敏感度及特異度均高于上述兩項指標單獨檢測，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表4、圖1。

圖1 CK10、Ki-67表達評估子宮頸癌患者臨床分期效能的ROC曲線

表3 Ki-67表達情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結轉移的關系[例（%）]

表4 CK10、Ki-67表達評估子宮頸癌患者臨床分期Ⅱ、Ⅲ期效能的ROC曲線分析

2.4 CK10、Ki-67 表達評估子宮頸癌患者淋巴結轉移效能的ROC 曲線分析 經ROC 曲線分析可得，CK10 與Ki-67 聯合檢測評估子宮頸癌患者淋巴結轉移的曲線下面積、敏感度以及特異度均高于上述兩項指標單獨檢測，差異均有統計學意義（P＜0.05），見圖2、表5。

圖2 CK10、Ki-67表達評估子宮頸癌患者淋巴結轉移效能的ROC曲線

表5 CK10、Ki-67表達評估子宮頸癌患者淋巴結轉移效能的ROC曲線分析

3 討論

伴隨子宮頸細胞學篩查的應用，子宮頸癌早期檢出率以及遠期生存率均有所提高，然而可用以評估早期子宮頸癌病變惡化的分子標志物并不多見[7-9]。因此，尋求一種可早期評估子宮頸癌進展的分子標志物顯得尤為重要。CK 可通過細胞間的相關信號轉導通路影響腫瘤發生、進展，且CK 于差異性器官以及組織中的表達存在明顯差異，其表達情況可能和腫瘤細胞侵襲力有關，繼而為疾病的鑒別診斷提供參考依據[10]。Ki-67 則是DNA 結合蛋白之一，屬于增殖細胞有關核抗原[11]，目前已被證實在乳腺癌、食道癌及卵巢癌等多種惡性腫瘤細胞中均存在異常表達，且和腫瘤惡性程度有關。

本文結果發現，子宮頸癌組織CK10 陽性率低于癌旁正常組織，而Ki-67 陽性率高于癌旁正常組織。這提示了子宮頸癌患者組織中CK10 呈異常低表達，而Ki-67 呈異常高表達。原因在于正常子宮頸組織中，CK10 主要覆蓋于基底細胞上層，于基底層之上的顆粒細胞層與棘層間隙表達，伴隨著宮頸病變的加劇，其陽性表達逐漸下降，因此，該蛋白表達的缺失可能標志著表皮細胞朝惡性方向轉化。另有研究報道證實，隨著宮頸鱗癌組織分化程度的增加，其CK10 陽性率越高，CK10 的表達水平與細胞角化、組織分化有關[12-14]。此外，Ki-67廣泛表達于細胞核，主要位于宮頸上皮內瘤變基底層以及副基底層，在維持細胞增殖活性過程中扮演者至關重要的角色，其往往在細胞G1 期、S 期及M 期時高表達，而在GO 期時表達缺失。這在文獻[15-17]的研究報道中得以佐證，子宮頸癌組織中Ki-67 陽性率遠遠高于癌旁正常組織。然而，上述研究并未對CK10 和子宮頸癌的關系進行分析，這亦是本文的創新之處，可為臨床相關研究提供更為全面的依據。另外，不同FIGO 分期以及淋巴結轉移與否的子宮頸癌組織CK10、Ki-67 表達陽性率對比均不明顯，反映了上述兩項蛋白表達在評估子宮頸癌病情嚴重高程度及淋巴結轉移方面可能無顯著價值。究其原因，可能和本研究納入對象嚴重不足有關，從而導致研究結果發生偏頗[18-20]。因此，在今后的相關研究中理應增大樣本量，從而獲取更為真實、可靠的數據。本文結果還顯示了經ROC曲線分析可得：CK10 與Ki-67 聯合檢測評估子宮頸癌患者FIGO 分期以及淋巴結轉移的效能優于上述兩項指標單獨檢測。分析原因，聯合檢測時可為臨床醫生評估病情提供更為充足、全面的依據[21-22]。

綜上所述，子宮頸癌患者組織中CK10 表達缺失，而Ki-67 表達升高，兩者聯合檢測可能有助于病情評估以及淋巴結轉移預測。