QuEChERS-UPLC-MS-MS快速檢測大米中氟啶胺

氟啶胺（Fluazinam）是1988年由日本石原株式會社中央研究所開發的吡啶胺衍生物，二硝基苯胺類有機物廣譜殺菌劑（結構式見圖1），是一種線粒體氧化磷酰化解偶聯劑，能夠抑制孢子萌發、菌絲生長和孢子形成[1]，對交鏈孢屬、疫霉屬、單軸霉屬、核盤菌屬和黑星菌屬非常有效，不僅可用于防治草莓灰霉病[2]、花生土傳真菌病害[3]、茉莉白絹病[4]及辣椒[5]、人參[6]及蔥[7]等作物上的病害，同時還可防治柑橘紅蜘蛛[7]等蟲害。在大米的種植過程中，也會使用氟啶胺預防病蟲害。

圖1 氟啶胺化學結構式圖

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB4500Q液質聯用儀，配有電噴霧離子源和大氣壓化學源（美國AB公司）；CP225D電子天平（賽多利斯）；LD4-2C離心機（北京京立離心機有限公司）。

甲醇中氟啶胺標準儲備液（含量100 μg·mL-1，北京壇墨質檢科技有限公司）；氯化鈉、無水硫酸鎂（分析純，成都科隆）；乙腈（色譜純，山東大禹）。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準系列溶液的配制

精密吸取氟啶胺標準物質1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到10 μg·mL-1的標準貯備液。精密吸取1.0 mL氟啶胺標準貯備液于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成100 ng·mL-1的標準工作液。分別精密吸取標準工作液20 μL、50 μL、100 μL、200 μL、400 μL和800 μL于進樣瓶中，空白基質定容至1.0 mL，得到濃度為2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、40 ng·mL-1和80 ng·mL-1的標準系列溶液。

1.2.2 樣品溶液制備

取大米樣品充分粉碎混勻，精密稱取5.0 g，置于50 mL離心管中，加入5 mL超純水，充分混勻，浸泡30 min后加入20 mL乙腈，充分振蕩混勻，超聲提取30 min，加入2.0 g無水硫酸鎂，0.5 g氯化鈉，渦旋1 min，4 000 r·min-1離心5 min。取上清液2 mL于裝有50 mg PSA、100 mg無水硫酸鎂的5 mL離心管中，渦旋1 min，5 000 r·min-1離心5 min，取上清液過濾膜上機。

1.2.3 液相色譜條件

色譜柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；進樣體積：5 μL；流速：1.0 mL·min-1；流動相：0.1%甲酸/水（A）和乙腈（B）；梯度洗脫程序：0～5.0 min，95%→5%A，5.1～10.0 min，5%A；10.1～15.0 min，95%A。

1.2.4 質譜檢測條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）；采集模式：多反應離子監測（MRM），負離子模式采集；離子源溫度：600 ℃；電噴霧電壓：5 500 V；氣簾氣壓力：35 psi；噴霧氣壓力：60 psi；輔助氣壓力：70 psi；其余質譜條件如表1所示。

表1 待測組分質譜條件表

2 結果與分析

2.1 基質效應

化學分析中，基質指的是樣品中被分析物以外的組分。基質常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響分析結果的準確性。本實驗中，大米樣品提取液中非待測物的離子強度對分析物活度系數有影響，這些影響和干擾被稱為基質效應。目前最常用的去除基質效應的方法是使標準曲線的基質和待測組分基質盡可能保持一致。本實驗采用未含待測組分的空白大米提取液作為標準工作液的稀釋劑，能有效去除基質干擾。

2.2 標準曲線、相關系數

本實驗以待測組分的濃度（X）和色譜峰面積（Y）繪制標準曲線，獲得線性回歸方程。標準曲線線性范圍為2～80 ng·mL-1，相關系數R為0.999 7。標準曲線見圖2。

圖2 氟啶胺標準曲線圖

2.3 檢出限、定量限

信噪比為3（S/N=3）時為方法檢出限，信噪比為10（S/N=10）時為方法定量限。空白基質配標最低點st1濃度為2 ng·mL-1（譜圖見圖3、圖4），信噪比為S/N=127.6。根據公式（1）得到方法檢出限為0.009 μg·kg-1，定量限為0.03 μg·kg-1，能滿足檢驗要求。

圖3 標準品st1定量離子圖譜

圖4 標準品st1定性離子圖譜

式中：X為方法檢出限，μg·kg-1；S/N為信噪比；C(st1)為st1濃度，ng·mL-1；n為稀釋倍數；V為定容體積，mL；m為樣品質量，g。

2.4 回收率、RSD

選用陰性大米樣品，分別在8 μg·kg-1、40 μg·kg-1、160 μg·kg-1低、中、高3個加標水平，按照1.2.2樣品溶液的制備方法進行前處理，高、中、低3個濃度各6個平行樣，按照1.2.3、1.2.4檢測方法進行上機檢測，結果見表2。160 μg·kg-1加標回收氟啶胺離子圖譜見圖5、圖6。

圖5 160 μg·kg-1加標回收定量離子圖譜

圖6 160 μg·kg-1加標回收定性離子圖譜

表2 氟啶胺加標回收率和RSD表

3個加標水平的回收率為85.6%～96.4%，RSD為5.9%～7.5%，滿足檢測需求。在市售大米中，隨機抽檢10份大米樣品，檢驗結果均為陰性。

3 結論

本實驗通過液質聯用法檢測大米中的氟啶胺，在儀器的響應值即方法的回收率上都能滿足檢測需要。在后續的工作中應在此基礎之上進行更深入的農藥多殘留組分檢測驗證。在樣品前處理上力求以更環保更高效率更準確的提取方法開展檢測研究。