親子鑒定中vWA基因座等位基因丟失1例

陳 煒，李冠武

（1．廣東精正司法鑒定中心，廣東 汕頭 515041；2．汕頭大學司法鑒定中心，廣東 汕頭 515041；3．汕頭大學醫學院，廣東 汕頭 515041）

1 案例資料

被檢父和孩子母親為給女兒和兒子辦理戶籍事宜，前來進行親子鑒定。分別用FTA卡采集4人的指尖血備檢。

分別采用HuaxiaTMPlatinum PCR擴增試劑盒（美國ABI公司）和HEALTH Gene STRtyper-21G Plus擴增熒光檢測試劑盒（海爾施基因科技公司），采用10 μL擴增體系對4人的FTA血卡直接進行短串聯重復序列復合PCR擴增，產物用3130XL基因分析儀（美國ABI公司）進行電泳檢測及GeneMapper軟件判讀基因分型。

檢驗結果分析，被檢父和孩子母親與女兒在每一個常染色體STR基因座的基因分型都遵循孟德爾遺傳規律。通過計算得到其累積親權指數大于10 000，結果支持被檢父和孩子母親為女兒的生物學父母親。

在HuaxiaTMPlatinum PCR擴增試劑盒中，被檢父和孩子母親與兒子之間的22個非性別基因座中，只有vWA基因座不符合孟德爾遺傳規律。在vWA基因座，被檢父分型為“14，18”，母親分型為“17”，兒子分型為“14”（如圖1）。在該基因座上，母子基因分型均為純合子且不符合遺傳規律。結合已與被檢父、孩子母親確定親子關系的女兒在vWA基因座的分型“17，18”，判斷母子存在多步突變的可能性極小，懷疑為等位基因丟失。經STRtyper-21G Plus試劑盒重復檢驗后，發現孩子母親與兒子在vWA基因座均丟失等位基因“18”。在vWA基因座，母親分型為“17，18”，兒子分型為“14，18”（如圖1）。

2 討論

等位基因丟失，也叫雜合性丟失。通常是與DNA多態性、堿基的插入/缺失有關的[1]。STR基因座結合區存在突變可能會導致同源染色體上其中一個等位基因的部分或全部基因序列丟失，出現等位基因無效擴增，僅表現為純合子性狀。由突變形成的2個等位基因均丟失的現象較罕見。有關等位基因丟失的報道較多[2-3]，但在vWA基因座發生等位基因丟失的情況則尚未見報道。

雜合性丟失樣本會在相應的基因座上將雜合子峰檢成純合子峰，只檢測出1個等位基因，但該純合子峰的面積和高度接近其他雜合子峰[4]。本例中，雖然在HuaxiaTMPlatinum PCR擴增試劑盒檢測時未表現出上述特征，但孩子母親和兒子在vWA基因座中18基因位置上均有一個小峰（圖1），因此在增加了模板量重新擴增電泳后，結果仍均為純合子。

圖1 vWA基因座的基因分型

親子鑒定中常出現的個別STR基因座基因分型結果不符合遺傳規律現象，通常被認為是滑動錯配機制產生的突變。一步突變在日常工作中較為常見，存在多步突變的則較為少見，需要特別注意。本案例使用HuaxiaTMPlatinum PCR擴增試劑盒檢測時發現孩子母親和兒子在vWA基因座上均表現為純合子，且母子不符合，存在多步突變，可能性極小。結合該案例中女兒在vWA基因座分型為“17，18”，推測孩子母親由于vWA基因座結合區存在突變，導致等位基因18無效擴增，且該突變遺傳給了兒子導致其等位基因18也出現無效擴增。相反被檢父由于vWA基因座結合區不存在突變，未出現無效擴增。該推測經STRtyper-21G Plus試劑盒重復檢驗后，證實為等位基因丟失。

目前商品化STR試劑盒已經被廣泛應用，親代與子代之間出現個別STR基因座不符合孟德爾遺傳規律的現象常有發生。在親代一方和子代的分型結果均為純合子，并存在多步突變時，需要特別留意是否可能存在等位基因丟失。如果在日常工作中懷疑等位基因丟失時，可以根據等位基因峰的面積和峰的高度來進行初步判斷[5]。在分析單一檢測體系下的樣本數據時較難判定是否屬于雜合性丟失樣本，但通過采用兩種不同引物設計的檢測體系進行檢測即可發現。親子鑒定中，若兩個樣本之間出現某個STR基因座基因型不符合孟德爾遺傳規律，尤其是存在均為純合子且多步突變的情況時，應該采用引物設計不完全相同的兩種或兩種以上檢測試劑盒進行復檢。在采用多種檢測試劑盒仍無法驗證的情況下，則需采用測序技術進行證實[6]，避免誤判，增加結論的準確性和可靠性。