達烏里胡枝子根際解磷細菌的篩選、鑒定及特性研究

黃 臣， 楊凱元， 高 鵬， 梁銀萍， 韓玲娟， 趙 祥

(山西農業大學草業學院, 山西 太谷 030801)

達烏里胡枝子(Lespedezadaurica)為豆科(Leguminosae)胡枝子屬(Lespedeza)的多年生草本狀半灌木，又稱興安胡枝子、牤牛茶、牛枝子，廣泛分布于東亞的日本、韓國以及我國的東北、華北、西北、華中、西南等地區，在干旱、寒冷、貧瘠的生境下生長。達烏里胡枝子莖葉鮮嫩、蛋白質含量高、適口性佳，可作為優良的青飼料；其主根粗壯，側根發達，并具根瘤，能夠進行生物固氮，是半干旱地區退化草地改良的先鋒植物，具有較高的經濟和生態價值[1]。

晉北黃土高原地區是我國北方重要的生態屏障[2]，但該地區土壤養分貧瘠，草地生產力低下[3]，尤其磷素嚴重虧缺，導致天然草地存在不同程度的退化風險，選擇鄉土草進行退化草地改良是晉北黃土高原生態修復的主要途徑。磷參與植物組織內物質構成、能量合成及細胞分裂等過程，是植物生長代謝的必需營養元素之一[4]。土壤缺磷限制了豆科植物根瘤菌的形成，降低其固氮效率和對礦物質元素的吸收，進而對作物產量與品質造成不利影響[5-7]。達烏里胡枝子是黃土高原的鄉土植物，但該地區土壤磷含量嚴重虧缺，0～20 cm土壤全磷含量平均為0.63 g·kg-1[8]，達烏里胡枝子生長長期受到當地磷養分限制，磷匱乏是限制當地退化草地改良和礦區生態修復中達烏里胡枝子生長的重要因子[9]，極大制約其生態價值與經濟價值的增長。當前，施加磷肥是緩解土壤缺磷的主要手段，但存在成本高、利用效率低，且易造成環境面源污染和土壤酸化板結等問題[10-11]，而微生物在土壤物質和能量循環中發揮著至關重要的作用，其中解磷菌(Phosphate-solubilizing microorganisms，PSM)可將土壤中難溶性磷轉化為被植物吸收的有效磷[12]。植物通過根系招募解磷菌等方式加速土壤磷轉化，保證其生長過程中對磷的需求。近年來，隨著國家生態環境保護和綠色農業等政策的實施，挖掘新的促生菌劑、開發微生物肥料受到重視，解磷菌具有廣闊的應用前景[13]。

迄今為止，國內外已從豆科等植物根際分離、篩選到的解磷菌有二十多個屬，主要包括假單胞菌屬(Pseudomonas)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、伯克霍爾德菌屬(Burkholderia)、根瘤菌屬(Rhizobium)、沙雷氏菌屬(Serratia)、不動桿菌屬(Acinetobacter)和腸桿菌屬(Enterobacter)等。此外一些真菌，如根霉屬(Rhizopus)也被發現具有解磷功能[14-15]。目前，針對胡枝子屬植物根際微生物的研究較多，內容主要包括促生菌的分離、鑒定和功能驗證，以及在礦區和退化草地生態修復中的應用。例如，胡枝子屬植物根瘤內生菌與水稻(Oryzasativa)葉片內生菌共同接種，可顯著促進大豆結瘤，提高根瘤固氮效率[16]。截葉鐵掃帚(Lespedezacuneata)根瘤中分離出1株對銅、鎘、鉛和鋅等重金屬具有高抗性的菌株CCNWRS33-2，并表現出較好的重金屬富集能力[17]；二色胡枝子(Lespedezabicolor)根際分離出1株阮桿菌屬Nguyenibacter菌株，可通過分泌葡萄糖酸，減輕鋁對植物的毒害[18]。關于達烏里胡枝子根際促生菌的研究相對較少，僅有胡志偉[19]報道了從其根際分離出1株具有解磷功能的促生菌，相關系統研究尚未開展。

因此，本研究通過對達烏里胡枝子根際土壤微生物進行分離，篩選出高效、抗逆性強，且具有促生作用的解磷菌，并初步探討其解磷機制，以期為后續研發適合于晉北黃土高原地區建植胡枝子使用的解磷菌劑提供菌種資源。

1 材料與方法

1.1 土壤樣品采集

2021年8月，研究地為山西省晉中市太谷區‘晉農一號’達烏里胡枝子種植田(112°60′E，37°44′ N)。在對角線上設置5個1 m×1 m的樣方，每個樣方內，用75% 酒精表面消毒的鐵鏟挖取長×寬×高為40 cm×20 cm×20 cm的達烏里胡枝子根系土坯，放置于無菌自封袋中，于4℃便攜式冷藏箱中保存并帶回實驗室，進行土壤根際土的分離。

1.2 供試培養基

使用Pikovaskaia’s(PKO)無機磷培養基、蒙金娜有機磷培養基進行解磷菌的分離[20]，使用LB培養基進行解磷菌的常規培養[20]，淀粉瓊脂培養基用于測定淀粉水解試驗[21]，明膠培養基用于明膠液化測試[21]，葡萄糖蛋白胨水培養基用于甲基紅測試[21]，CAS培養基用于解磷菌鐵載體分泌能力測定[22]，葡萄糖蛋白胨培養基用于解磷菌有機酸分泌能力測定[23]。

1.3 達烏里胡枝子根際有效解磷菌的初篩

1.3.1土壤或植物稀釋液的制備 將根際分為4個區域，即非根際(Soil away from roots，NRS)、根際(Soil adhering to roots，RS)、根系表面(Rhizoplan of roots，RP)和根內(Histoplan of roots，HP)。將田間采集的達烏里胡枝子根系土坯輕輕壓裂并抖落獲得非根際土壤，然后用滅菌毛刷輕輕刷落根際表面土壤獲得根際土，將非根際土、根際土和植物根系置于無菌自封袋中，置于4℃條件下保存[20]。取5 g非根際土置于盛有45 mL 0.85%滅菌生理鹽水的離心管中，振蕩器(HY-2型、力辰科技有限公司)上200 r·min-1振蕩30 min，靜置收集上清液，即為濃度10-1的NRS稀釋液；取0.5 g根際土放入盛有4.5 mL 0.85%滅菌生理鹽水的離心管中，高速離心機800 r·min-1離心2 min，靜置收集上清液即為濃度10-1的RS稀釋液；取植物根系1 g，無菌水沖洗，放入盛有9 mL 0.85%滅菌生理鹽水的離心管中，加入滅菌小鋼珠，在高速離心機1 000 r·min-1離心10 min，靜置收集上清液即為濃度10-1的RP稀釋液；將離心過的根系用75%酒精浸泡30 s，放入2%的次氯酸鈉(NaClO)溶液中處理5 min，無菌水沖洗3次，無菌濾紙吸干根系表面水分，置于研缽中研磨，用9 mL 0.85%滅菌生理鹽水分3次沖洗研缽，將研缽中的生理鹽水連同根系一同轉入離心管中，高速離心機1 500 r·min-1離心5 min，上清液即為濃度10-1的HP稀釋液。通過梯度稀釋方法依次制備10-2,10-3,10-4和10-5的達烏里胡枝子根際4個區域的稀釋液[20]。

1.3.2解磷菌的分離 分別吸取上述4個區域濃度為10-3,10-4和10-5的稀釋液50 μL，用滅菌玻璃涂布棒涂布于蒙金娜固體培養基，倒置放入溫度為28℃的培養箱中黑暗培養。待單個菌落出現后，挑取培養基上形成明顯透明圈的菌落置于LB固體培養基上進行分區劃線，重復多次，直至獲得純菌株。將具有解有機磷能力的菌株接種在PKO固體培養上，觀察是否可形成明顯透明圈，即是否具有解無機磷的能力。

1.3.3有效解磷菌的初篩 將兼具解有機磷和無機磷的菌株接種于LB培養基上活化，培養48 h后刮取菌落制備菌懸液，吸取5 μL懸浮液(OD600=2)接種于PKO無機磷固體培養基和蒙金娜有機磷固體培養基上。為避免培養基性狀對菌株生長造成影響，使用培養基分裝器(P17型、重慶江雪科技有限公司)向每個培養皿定量分裝20 mL培養基。每個菌株5個重復，在第7 d分別用十字交叉法測定各菌株形成的透明溶磷圈直徑(D)和菌落直徑(d)，根據D/d值(可溶性指數值)的大小對有效解磷菌進行初篩。

1.4 菌種鑒定

1.4.1菌落及菌體形態觀察 將篩選出的菌株接種于LB培養基上培養48 h，觀察菌落形狀、顏色等特征，并進行革蘭氏染色，使用光學顯微鏡(BX51型、日本Olympus公司)觀察菌體形態。

1.4.2菌株生理生化反應 對已篩選出的菌株進行明膠液化[24]、淀粉水解[24]、甲基紅試驗[24]、過氧化氫酶反應[21]測定。

1.4.3解磷菌株生長曲線的測定 將解磷菌株分別接種到LB液體培養基，37℃，180 r·min-1培養12 h，使用分光光度計調整菌液濃度至OD600=0.1用于接種。在100 mL LB液體培養基中接種5 mL OD600=0.1的菌液，30℃，180 r·min-1恒溫震蕩培養26 h，每隔2 h監測一次OD600值并記錄，觀測菌株的生長狀況并繪制生長曲線。

1.4.416S rDNA序列測定與系統發育分析 篩選出有效解磷菌株的鑒定采用 16S rDNA基因序列比對。使用20 μL移液槍頭沾取少量菌液，置于盛有20 μL無菌水的PCR八連排管中進行PCR擴增，通用引物采用27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)，PCR反應體系(50 μL)為2×Taq Master Mix 25 μL，上、下游引物(10 μmol·L-1)各2 μL，DNA模板2 μL，ddH2O19 μL。PCR反應程序為94℃預變性3 min；94℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，循環30 次；最后72℃延伸5 min。擴增產物送生工生物工程上海股份有限公司測序。將測得的 16S rDNA序列在NCBI數據庫中注冊，獲得登錄號。

1.5 達烏里胡枝子根際解磷菌解磷能力及其磷酸酶活性的測定

1.5.1解有機磷(卵磷脂)能力的定量測定 將解磷菌株接種于LB培養基上活化，吸取1 mL懸浮液(OD600=0.8)接種于60 mL的蒙金娜液體培養基中，重復3次，接種無菌水為對照，置于28℃,180 r·min-1的振蕩培養箱(ZQLY-180E型、上海知楚儀器有限公司)中黑暗培養5 d，在渦旋儀(MX-S型、大龍興創實驗儀器有限公司)上混勻5 min，取10 mL培養液，10 000 r·min-1高速離心15 min，取出上清液采用“鉬銻抗比色法”測定有效磷(Available phosphorus,AP)含量，確定菌株解有機磷的能力，使用pH計對上清液的pH值進行測定[12]。

1.5.2磷酸酶活性的測定 采用堿性及酸性磷酸酶試劑盒(購自北京索萊寶科技有限公司)對1.5.1中獲得的上清液的磷酸酶活性進行測定。主要步驟如下，37℃，遮光條件下與上清液作用15 min后，每毫升上清液每分鐘催化產生1 μmol的酚定義為1個酶活力單位。

1.5.3解無機磷(磷酸鈣)能力的測定 以磷酸鈣為磷源，對有效解磷菌解無機磷的能力進行定量測定，方法同1.5.1。

1.6 達烏里胡枝子根際解磷菌抗逆特征

1.6.1高低溫耐受性 將活化的解磷菌接種于LB培養基中，置于4℃，20℃，28℃，37℃，60℃培養箱中培養72 h，觀察、記錄菌株的溫度適應性，并采用“十字交叉法”測定菌株直徑，重復3次。

1.6.2耐鹽性 分別調整LB培養基的NaCl濃度值0%，1%，2%，5%，7%，10%，培養、觀察、記錄菌株耐鹽性，并采用“十字交叉法”測定菌株直徑，每個處理3次重復。

1.6.3耐酸堿性 通過0.1 mol·L-1NaOH，0.1 mol·L-1HCl溶液調整LB培養基pH值，分別為pH5，pH6，pH7，pH8，pH9，pH10，pH11，pH12，重復3次，培養、觀察、記錄菌株耐酸堿性。

1.7 達烏里胡枝子根際解磷菌促生特性

對篩選菌株進行分泌鐵載體能力[22]、產有機酸能力[23]和吲哚反應測定[21]。

1.8 數據分析

利用Microsoft excel 2019整理數據，使用SPSS 20.0進行數據分析，對不同菌株的可溶性指數、液體培養基中有效磷含量、磷酸酶活性以及促生特性進行單因素方差分析和LSD法多重比較(P<0.05)。采用Origin 2021 統計軟件繪制解磷菌解磷能力的柱狀圖，使用MEGA X軟件將序列與NCBI數據庫中的相近序列進行系統發育分析，采用鄰接法(Neighbor-Joining method)構建系統發育樹，自展值(bootstrap)為1 000次。

2 結果與分析

2.1 達烏里胡枝子根際解磷菌的初篩

如表1所示，利用蒙金娜和PKO培養基從達烏里胡枝子根際土壤中非根際土、根際土、根表、根內分別篩選、純化出3株、8株、15 株、1株具有解有機磷能力的菌株，其中可溶性指數≥1.50的菌株有9株，分別為DP7，DP12，DP15，DP20，DP22，DP25，DP26，DP27，DP28，DP29。如圖1b，圖1c所示，DP24，DP25，DP27和DP28菌株兼具解無機磷的能力，解有機磷可溶性指數在1.50～2.06，初步確定為有效解磷菌。

表1 解磷菌解磷可溶性指數Table 1 Solubility index of PSM

圖1 解磷菌形態特征及解磷能力Fig.1 Morphological characteristics and phosphate-solubilizing ability of PSM注：a為解磷菌形態學特征；b為解無機磷能力；c為解有機磷能力Note:a is morphological characteristics of PSM;b is inorganic phosphorus-solubilizing ability;c is organic phosphorus-solubilizing ability

2.2 達烏里胡枝子根際解磷菌的鑒定

2.2.1形態學特征 4株有效解磷菌菌落形態特征如圖1(a)所示，DP24，DP25和DP27在LB固體培養基上生長48 h后菌落直徑分別約為6.69 mm，5.48 mm，4.94 mm，2.71 mm；菌落均呈凸起狀，邊緣整齊；菌落顏色分別為黃色、乳黃色和乳白色。4株有效解磷菌的細胞形態如圖2所示，DP24的細胞呈長桿狀，大小為(1.25～2.38) μm×(0.25～0.34) μm；DP25和DP27均為球桿狀，大小分別為(0.85～1.38) μm×(0.67～0.79) μm、(0.71～1.00) μm×(0.52～0.73) μm。DP28在LB固體培養基上生長48 h后，菌落形態也呈凸起狀，表面濕潤，但邊緣不整齊，呈齒狀；顏色為乳白色，細胞呈球狀，大小為(0.55～0.70) μm×(0.51～0.66) μm。

圖2 4株解磷菌革蘭氏染色結果Fig.2 Gram staining of four PSM注：a為DP24革蘭氏染色下解磷菌的菌體形態；b為DP25革蘭氏染色下解磷菌的菌體形態；c為DP27革蘭氏染色下解磷菌的菌體形態；d為DP28革蘭氏染色下解磷菌的菌體形態Note:a is morphological of PSM by the strain DP24;b is morphological of PSM by the strain DP25;c is morphological of PSM by the strain DP27;d is morphological of PSM by the strain DP28

2.2.2生理生化特性 如圖2所示，DP24,DP25和DP27的革蘭氏染色均為陰性，DP28為陽性。4株解磷菌在明膠培養基中培養后均無液化現象，即為陰性反應，表明無水解明膠的能力；在4株解磷菌培養基上滴加碘液，菌落周圍均呈藍色，表明無水解淀粉的能力；在接種解磷菌的葡萄糖蛋白胨液體培養基中滴加甲基紅指示劑，菌株DP24,DP25和DP27顏色無明顯變化，為陰性反應，菌株DP28呈紅色陽性反應；4株解磷菌的過氧化氫酶反應均產生氣泡，為陽性反應，表明具有產生過氧化氫酶的能力，其中DP24和DP28過氧化氫酶反應最為強烈(表2)。

表2 解磷菌生理生化特性Table 2 Physiological and biochemical characteristic of PSM

2.2.3解磷菌的生長曲線 各菌株生長曲線均可分為三個時期，即指數生長期、平穩增長期和緩慢衰落期，菌株DP25,DP27在培養前18 h以指數倍數快速增長，8～24 h以平穩速度緩慢增長。菌株DP24,DP28在0～8 h和18～24 h內平穩速度緩慢增長，在培養8～20 h，以指數倍數快速增長(圖3)。

圖3 4株解磷菌的生長曲線Fig.3 Growth curve of four PSM

2.2.4分子生物學特性 解磷菌DP24(GenBank登錄號:ON077029)、DP25(GenBank登錄號:ON077030)、DP27(GenBank登錄號:ON077031)、DP28(GenBank登錄號:ON077032)的16S rDNA序列長度分別為1 439 bp，1 444 bp，1 440 bp，1 459 bp。通過NCBI數據庫比對和系統發育樹分析(圖4)，DP24與假單胞菌屬(Pseudomonassp.)(MW578922.1)的序列同源性最高，達到99.79%；DP25與DP27聚為一類，與不動桿菌屬(Acinetobactersp.)(MZ430421.1)的序列同源性均達到99.79%；菌株DP28與表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)(MN511770.1)的序列同源性達到99.79%。結合形態學特征和生理生化特性，確定DP24為韓國假單胞菌(Pseudomonaskoreensis)；DP25和DP27為醋酸鈣不動桿菌(Acinetobactercalcoaceticus)；DP28為表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)。

圖4 菌株DP24，DP25，DP27和DP28基于16S rRNA基因序列同源性構建的系統發育樹Fig.4 Molecular phylogenetic anylysis of strains DP24，DP25，DP27 and DP28 from 16S rRNA region

2.3 達烏里胡枝子根際解磷菌解有機磷磷能力及其磷酸酶活性

如圖5 a所示，DP24，DP25，DP27和DP28在蒙金娜液體培養基中培養5 d后，DP25，DP27和DP28培養液的有效磷含量均顯著高于對照(P<0.05)，分別較對照增加9.14 倍、8.92 倍、17.3 倍。DP24,DP27和DP28培養液的pH均顯著高于對照(P<0.05)，分別較對照增加了3.37%，4.25%和7.32%(圖5 b)。

培養5 d后，DP24，DP25，DP27和DP28培養液中的酸性磷酸酶活性分別較對照增加了2.34 U·L-1，9.77 U·L-1，16.61 U·L-1，12.14 U·L-1(P<0.05)；DP27和DP28分別較對照增加了29.93 U·L-1，25.95 U·L-1(P<0.05)。

圖5 解磷菌對有機磷的解磷能力、pH及磷酸酶活性Fig.5 Phosphate-solubilizing ability,pH and phosphatase activity of PSM to organic phosphorus 注：不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同Note:Different lowercase letters indicates significant difference at the 0.05 level. The same as below

2.4 達烏里胡枝子根際解磷菌解無機磷能力

如圖6所示，DP24，DP25，DP27和DP28在PKO無機磷液體培養基中培養5 d后，DP25，DP27，DP28有效磷含量與對照差異顯著，分別較對照增加了901.79 倍、931.13 倍和637.32 倍。DP25，DP27和DP28培養液的pH值均顯著低于對照(P<0.05)，呈弱酸性，分別較對照降低了38.37%，32.70%和32.09%。

圖6 解磷菌對無機磷的解磷能力及pH特征Fig.6 Inorganic phosphorus decomposition ability of PSM

2.5 達烏里胡枝子根際解磷菌的抗逆特性

如表3所示，DP25與DP27在4℃條件下均可生長，具有一定的耐低溫能力，但均不具備在60℃條件下生長能力，不耐高溫。耐鹽性方面，DP28可在1%～10%含鹽量條件下生長，耐鹽性能最佳；DP24，DP25，DP27次之，最大耐鹽量均為5%。耐酸堿方面，DP25，DP28在pH值為4～12條件下可以生長，耐酸堿性能最佳；DP24，DP27次之，菌株可耐受pH值區間分別為4～9和5～10。

表3 解磷菌對溫度、鹽分和酸堿度等逆境的抗逆特征Table 3 Temperature、salinity and pH of the PSM

2.6 達烏里胡枝子根際解磷菌的促生特性

如表4所示，D24，DP25，DP27均具有分泌鐵載體能力，DP25，DP27分泌能力較強，DP28不具有分泌鐵載體能力。4株有效解磷菌均具有分泌有機酸的能力，DP28分泌有機酸能力最強，其次為DP25，DP27。4株有效解磷菌在培養界面均無紅色環出現，即不具有產生吲哚的能力。

表4 解磷菌的促生特性Table 4 Growth promoting characteristics of PSM

3 討論

目前已報道胡枝子屬植物的根際解磷菌主要包括伯克霍爾德菌屬(Burkholderia)、根瘤菌屬(Rhizobium)、慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、微桿菌屬(Microbacterium)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、腸桿菌屬(Enterobacter)、泛菌屬(Pantoea)等[25-26]。在胡枝子屬植物根際解磷菌研究中尚未見不動桿菌屬(Acinetobacter)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)相關報道，本研究從達烏里胡枝子根際篩選出上述兩種菌株，發現具有較好的解磷能力，豐富了胡枝子屬植物解磷菌資源庫。目前，假單胞菌屬(Pseudomonas)、醋酸鈣不動桿菌(Acinetobactercalcoaceticus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)作為黃土高原植物的根際促生菌研究較多[27-29]，說明根際土壤微生物群落結構和組成受地域等因素的影響。此外，研究發現上述菌株在不同種類植物根際均有定殖現象，表明部分根際解磷菌具有較強的普遍適用性，可作為優質解磷菌資源用于后續微生物肥料的研發。

解磷能力是篩選解磷菌資源的基本標準，Zhang等[30]從紅花根際篩選出的葡萄球菌屬菌株RC03、不動桿菌屬菌株RC04解無機磷量為112.5 mg·L-1,168.5 mg·L-1；Khanghahi等[32]從小麥根際篩選出的不動桿菌屬菌株NT28解無機磷量為115.5 mg·L-1。本研究篩選的DP25,DP27,DP28解無機磷量可達478.48 mg·L-1，494.03 mg·L-1,338.30 mg·L-1，均比上述解磷菌株高，這可能是由于黃土高原地區土壤養分貧瘠，磷素含量低，使得植物根際釋放信號招募解磷能力強的微生物[31]。

在本研究中發現菌株DP25,DP27在4℃低溫和37℃高溫條件下均可生長，這是其長期適應當地環境形成的特殊耐高低溫能力[38]，在我國甘肅、四川等地均有發現[39-40]，預示其具有廣泛的環境適應能力，可在除黃土高原地區以外的我國南、北方地區進行廣泛應用。此外，研究表明醋酸鈣不動桿菌可在含鹽量0%～5%或pH值為8.5～10條件下生長[41]，葡萄球菌屬微生物可在含鹽量10%和pH值為10的條件下生長[42]。DP25,DP27和DP28亦具有較強耐鹽和耐酸堿能力，其中DP28耐鹽量可達10%，DP25，DP28在pH值為4～12條件下均可生長，而土壤鹽漬化是山西省主要退化草地類型，鹽漬化面積占全省總面積的9.7%[43]，因此上述菌株在山西鹽漬化草地生態修復方面具有良好的應用潛力。本研究發現DP24,DP25,DP27還具有機酸和鐵載體分泌能力。研究表明，大部分根際促生菌均能夠分泌有機酸和對鐵有親和力的鐵螯合物(即鐵載體)[44]。細菌分泌的有機酸可協助植物溶解土壤中難溶性磷和鉀，進而促進其生長[45]。鐵載體是一種對Fe3+具有極強親和力的低分子化合物，可與土壤中不可利用的Fe3+結合，是植物吸收利用鐵素的主要途徑[46]；同時通過這種方式消耗鐵元素來與病原細菌競爭鐵，從而降低一些土傳細菌病害的發生[47]；此外，鐵載體在調控土壤微生物磷代謝機制中也發揮重要作用[48]。綜上所述，本試驗初步認定DP25，DP27可作為潛在的根際促生菌資源，下一步的研究將進行盆栽與田間試驗，驗證菌株DP25，DP27對植物的促生效果。

4 結論

本研究從山西省黃土高原地區達烏里胡枝子根際土壤及根系表面分離、篩選到4株解磷菌株，其中3株為高效解磷菌株。初步鑒定菌株DP25，DP27均屬醋酸鈣不動桿菌(Acinetobactercalcoaceticus)，DP28屬于表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)。不動桿菌屬作為土壤中的常見優勢菌群，在土壤中具有較強的定殖能力，有利于對菌種的后期開發利用。篩選出的表皮葡萄球菌具有較好的解磷、耐鹽和耐酸堿能力，可作為微生物肥料研發菌種。下一步將通過盆栽試驗，驗證上述解磷菌對達烏里胡枝子植株根際的解磷性能及增產效果，為后續研發高效穩定的微生物磷肥提供科學依據，并在山西省黃土高原地區鹽堿地、礦區等退化土地上進行推廣應用，充分發揮達烏里胡枝子的生態和經濟價值。