一種中藥抑菌洗液體外抑菌實驗觀察

鄭春嬋 唐三梅 蔣小麗 鄒銳濤 蔡桂月 何仁亮 譚帥 鄒艷君

1南方醫科大學皮膚病醫院皮膚科，廣州 510091；2簡陽市人民醫院皮膚科，成都 641403；3南方醫科大學深圳醫院皮膚科，深圳 518000；4深圳君康仁泰生物科技有限公司，深圳 518000

近年來，中藥抑菌洗劑由于抑菌效果顯著，耐藥性低，安全性高，無明顯毒副作用而得到臨床推廣［1-3］。澤爾復皮膚抑菌洗劑是一種復方中藥制劑，具有清潔、殺菌、止癢等功效，可用于皮膚及黏膜相關細菌感染的治療，臨床上廣泛應用于皮膚科及婦科瘙癢性、炎癥性疾病的輔助治療。澤爾復皮膚抑菌洗液對皮膚刺激性小，臨床應用效果較好，但目前對于該洗劑抑菌效果的研究數據較為缺乏，本文以人體皮膚常見致病菌：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌和白色念珠菌為實驗菌，初探此復方中藥皮膚抑菌洗劑的抑菌效果，為臨床應用提供依據。

材料與方法

1、材料

1.1、儀器 生物安全柜（品牌：BLOBASE，型號：BSC-1500ⅡA2-X）；比 濁 儀（品 牌：梅 里 埃，型 號：DensiCHEK）；血平板（江門：江門市凱林貿易有限公司，批號：190820）；營養瓊脂培養基（批號：190710）；沙氏瓊脂培養基（批號：190817）。

1.2、試藥 澤爾復皮膚抑菌洗劑（深圳君康仁泰生物科技有限公司，批號：2020101601），其主要成分：黃柏、胡黃連、地膚子、蒼術、地榆、苦參、馬齒莧等提取物的中成藥液體制劑。

1.3、菌株 大腸桿菌（菌號：ATCC25922）；金黃色葡萄球菌（菌號：ATCC25923）；銅綠假單胞菌（菌號：ATCC27853）；白色念珠菌（菌號：ATCC64550）。以上菌株均由南方醫科大學皮膚病醫院檢驗科提供。

2、方法

2021年9月至11月于南方醫科大學皮膚病醫院采用平皿稀釋法進行實驗。

2.1、復蘇標準菌株 將4種標準菌株從液氮罐中取出復融，加樣器吸出20 μl接種于血平板，培養24 h后，再轉種1次，培養24 h進行實驗。

2.2、調菌懸液 將4種實驗菌株24 h斜面培養物用無菌PBS（1×，pH 7.1～7.2）洗下，制成菌懸液，吸取0.1 ml菌懸液，加入0.9 ml PBS液，同樣的方法反復稀釋3次，濃度由2.0 MIC稀 釋 至6×105cfu/ml（細 菌）或2×104cfu/ml（酵母菌）。

2.3、配制測試樣液 測試樣液由筆者自制，選用澤爾復皮膚抑菌洗液、滅菌生理鹽水、無菌PBS液，配制為1～4號測試樣液（梯度濃度：100.0%、50.0%、25.0%和12.5%），每種測試樣液配4管（每管5 ml），同時設對照樣液4管（5 ml滅菌生理鹽水）。

2.4、體外抑菌實驗 取上述菌懸液分別在每個測試樣液內滴加0.1 ml，均勻混合。作用2 min、5 min、10 min、20 min，用無菌塑料吸管分別吸取0.5 ml測試樣液加入含2 ml PBS的試管內，充分混勻，倍比稀釋1次（0.5 ml+0.5 ml），然后取其中2個稀釋度，分別吸取50 μl置于血平板，各接種2個點，用涼至40～45℃的營養瓊脂培養基、沙氏瓊脂培養基15 ml作傾注，轉動血平板，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，（35±2）℃營養瓊脂培養基培養大腸桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌48 h，沙氏瓊脂培養基培養白色念珠菌72 h，作活菌菌落計數。同時以滅菌生理鹽水作為空白對照組。實驗重復3次。

2.5、抑菌率計算及評價標準［4］抑菌率計算公式：抑菌率=（對照樣液平均菌落數-被試樣液平均菌落數）/對照樣液平均菌落數×100%。評價標準：抑菌率50%～＜90%，產品有抑菌作用；抑菌率≥90%，產品有較強抑菌作用。

3、統計學方法

該實驗結果與數據分析采用SPSS 25.0軟件，組內結果均以均數±標準差（±s）表述，多組間實驗數據采用方差分析與相關分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

結果

澤爾復皮膚抑菌洗劑原液（100.0%）、50.0%、25.0%和12.5%稀釋液作用2 min、5 min、10 min和20 min對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌率均超90%以上，見表1。不同濃度澤爾復皮膚抑菌洗劑抑菌率效果比對，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表2。相關分析顯示抑菌率與抑菌洗劑濃度呈正相關，作用2 min、5 min、10 min、20 min皮爾遜（Pearson）相關系數分別為0.769、0.789、0.950、0.806（均P＜0.05）。在相同濃度下，抑菌率與菌株種類、作用時間差異均無統計學意義（均P＞0.05）。表明澤爾復皮膚抑菌洗劑對上述4種菌株均有較強的抑菌效果，其抑菌效果與藥液的濃度呈正相關。

表1 澤爾復皮膚抑菌洗劑的抑菌效果實驗結果

表2 不同濃度澤爾復抑菌洗劑的抑菌率效果對比（±s）

表2 不同濃度澤爾復抑菌洗劑的抑菌率效果對比（±s）

時間2 min 5 min 10 min 20 min不同濃度12.5%0.92±0.010.93±0.010.93±0.010.95±0.0225.0%0.93±0.010.94±0.010.95±0.010.97±0.0150.0%0.95±0.020.96±0.020.97±0.010.98±0.01100.0%0.97±0.020.99±0.031.00±0.001.00±0.00 F值5.9477.03052.9938.912 P值0.0100.006＜0.0010.002

討論

皮膚科的許多瘙癢性及炎癥性疾病（如濕疹、特應性皮炎、脂溢性皮炎、癢疹等）常伴有皮膚表面細菌感染，臨床多采用口服抗組胺藥、外用糖皮質激素制劑及保濕劑治療，而這些藥物不能從根本上殺滅皮膚表面細菌，且長期口服抗生素容易引起耐藥性。因此，瘙癢性皮膚病容易反復發作，患者常搔抓患處，易引發細菌定植而加重其瘙癢的臨床癥狀，形成惡性循環。隨著對中藥的深入研究，大量研究發現中藥洗劑特別是復方中藥洗劑具有良好的清潔、殺菌、止癢能力，可減少皮膚表面致病菌的定植，打破瘙癢反復發作的惡性循環［1，3-5］，可用于慢性皮膚瘙癢性疾病的輔助治療，且長期外用不容易引起耐藥。

本研究數據顯示澤爾復抑菌洗劑原液（100.0%）、50.0%、25.0%和12.5%對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌均有較強的抑菌能力，作用2 min抑菌率即可達到90%以上，具有較強的抑菌效果。且隨著濃度的增加，抑菌效果也增強，抑菌效果與菌株種類、作用時間沒有顯著相關性，說明澤爾復抑菌洗劑具有實際體外抗菌應用價值，適用于皮膚及黏膜一般細菌感染性疾病的治療。現代藥理學研究表明，我國的傳統藥物中藥富含多種活性成分，副作用少，安全性高，部分中藥還具有抑菌、抗炎、抗角化等作用［6］。本實驗所用的澤爾復皮膚抑菌洗劑為復方中藥洗劑，其主要成分為黃柏提取物4.5%，胡黃連提取物4.5%，地膚子提取物4.5%，蒼術提取物3.5%，地榆提取物3.5%及苦參提取物2.5%等中藥。方中的黃柏可以抑制金黃色葡萄球菌、表皮癬菌感染甚至其他因素引起的炎性反應［5，7］。研究發現黃柏復合洗劑有利于提高血清生長因子濃度和促進毛細血管生成，具有促進潰瘍愈合的作用［8］。胡黃連提取物的主要化學成份為環烯醚萜苷、苯乙醇苷、酚苷、葫蘆烷型三萜、黃酮、芳香酸，有一定的抗菌活性，其抑菌作用良好［9-10］。地膚子提物對一些皮膚真菌有一定抑制作用，實驗表明地膚子甲醇萃取液可降低病菌體內的酶活性［11］。蒼術具有抗病原微生物、抗炎、抗肺損傷等藥理作用，能祛濕、殺菌，可用于濕疹、風疹、皮膚瘙癢等癥，臨床療效較好［12-13］。地榆具有抑制多種致病微生物、修復皮膚的作用，可治療燒灼傷、濕疹、結核性膿瘍等疾病。實驗證實地榆鞣質可增加多種革蘭陽性菌如金黃色葡萄球菌的細胞壁和細胞膜的滲透性，同時改變細胞形態，而地榆鞣質的其他抗菌機制（如抑制某種酶的活性或蛋白質合成等）還需要進一步研究，因此地榆可以作為一種潛在的抑菌劑［14］。苦參的抑菌活性已有多項實驗證實，其生物堿為其主要抑菌作用活性物質，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等革蘭陽性菌和革蘭陰性菌及皮膚癬菌均有較強的抑制作用［12，15-16］。有研究表明苦參提取物通過多組分、多靶點發揮抗炎作用，是一種主要用于治療由感染引起的各種炎癥性疾病的中藥［17］。因此，苦參及其制劑，如苦參洗劑、苦參注射液，在臨床廣用作于治療炎癥相關疾病的輔助治療［18］。程洪杰等［19］研究發現苦參堿可以有效抑制白色念珠菌細胞膜成分麥角固醇的合成，黃柏中小檗堿可引起白色念珠菌分裂周期異常而出現遺傳物質丟失，兩者對白色念珠菌均具有較強的抑制作用。澤爾復抑菌洗劑由上述中藥通過現代工藝加工而成，臨床應用發現其組方的藥物所含活性成份可有效去除皮膚表層的細菌，減少感染的機會，起到清潔皮膚，減輕患處瘙癢和不適癥狀的作用，值得進一步進行綜合性應用研究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明鄭春嬋：撰寫論文；唐三梅：研究設計；蔣小麗：參與實驗；鄒銳濤：收集數據；蔡桂月：分析數據；何仁亮：指導實驗及論文修改；譚帥：論文格式排版；鄒艷君：提供實驗試劑抑菌洗液