短柄五加喂養大鼠安全性觀察

魏琳琳，劉俊娓，胡 萍

甘肅省疾病預防控制中心毒理科，甘肅 蘭州730000

短柄五加（Acanthopanax brachypusHarms）為五加科五加屬落葉灌木［1］，始載于《神農本草經》，生長于海拔1000～2100 m 的山谷灌木叢中，在我國的分布范圍極其狹窄，主要分布于西北黃土高原，是我國特有的瀕危灌木［2-6］。在甘肅主要分布于慶陽、平涼、隴南、天水、臨夏、甘南等地［7-8］，《甘肅省中藥材標準》將其收載為地方標準［9］，命名為“甘肅刺五加”，其根、根莖和莖是生產“五加片”的原料［10-11］，制劑功效與刺五加相近［12-13］。短柄五加含黃酮［14-17］、揮發油［18-20］、木質素［21-22］、飽和脂肪酸［23］、氨基酸及多種微量元素［7］，有改善家兔血流狀態、延長小鼠及家蠶壽命的藥理作用［9，23］。目前關于短柄五加的化學成分有較多深入研究，但對其喂養90 天的試驗鮮有報道，本研究對短柄五加進行90 天喂養試驗，旨在了解較長時間服用短柄五加的安全性，為保護及合理開發利用短柄五加提供評價依據。

1 材料與方法

1.1 短柄五加由隴東學院/甘肅省高校隴東生物資源保護與利用省級重點實驗室提供。加工成固體淺棕色粉末。人體日推薦量為2 g/60 kg（體質量）。

1.2 主要試劑與儀器BC-5000 VET 型全自動動物血液細胞分析儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）；BS-400 型全自動血液生化分析儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）；TP1020型全自動組織處理器、ST5010 型自動染色機（徠卡公司）等。

1.3 動物SPF 級SD 大鼠購于蘭州大學實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK（甘）2018-0001。實驗動物飼料（北京科奧協力飼料有限公司，質量合格證號：196335）。大鼠飼養環境為SPF 級，室溫（22±2）℃，相對濕度40%～55%，實驗動物使用許可證號：SYXK（甘）2018-0004。實驗動物在試驗前均適應性喂養3天。

1.4 方法

1.4.1 受試物配置 恒溫水浴鍋調節至80～90 ℃，整個提取過程水溫保持不變。稱取受試物340 g，加入80～90 ℃蒸餾水3400 mL，放入水浴鍋中提取30 min。然后將提取液全部傾出，再加入已預熱的蒸餾水3400 mL，再提取1 次。將2 次提取液混合，濃縮至340 mL，此時受試物提取液濃度為1.00 g/mL，冰箱保存，每周配制1次。

1.4.2 動物分組及給藥 體質量65～80 g 大鼠80 只，隨機分為4 組，每組20 只，雌雄各半，單籠喂養。設低、中、高3個劑量組（4.3、8.5、17.0 g/kg（體質量）和一個陰性對照組，低、中、高劑量組分別相當于人群推薦日攝入短柄五加量的129、258、516 倍，陰性對照組予等容量蒸餾水。各劑量組大鼠均按1.0 mL/100 g（體質量）灌胃。

1.5 統計學方法采用SPSS 16 軟件分析數據，計量資料以表示，方差齊時采用方差分析；方差不齊，變量轉換后仍方差不齊，采用秩和檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠一般表現試驗過程中大鼠毛發正常，無異常行為表現，無死亡。

2.2 大鼠體質量、總進食量及總食物利用率各劑量組大鼠體質量、總進食量、總食物利用率與陰性對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠體質量增加及總食物利用率比較（）

2.3 血液學檢查

2.3.1 血常規 試驗中期低劑量組雌性大鼠的紅細胞(red blood cell，RBC)、單核細胞(monocyte，M)計數均高于陰性對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），中劑量組雌性動物紅細胞(red blood cell，RBC)、白細胞(white blood cell，WBC)、淋巴細胞(lymphocyte，LC)、嗜中性粒細胞（neutrophil，PMN)和M計數均高于陰性對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；末期低、中劑量組雌性動物WBC、LC、PMN、嗜酸性粒細胞（eosinophil，EOS)高于陰性對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），中劑量組雌性動物M 高于陰性對照組，差異有統計學意義（P＜0.01），但均在正常值范圍內，故無生物學意義。其余各項指標與陰性對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。試驗中、末期雄性大鼠各劑量組各指標與陰性對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2—3。

表2 各組大鼠試驗中期血常規（）

表2 各組大鼠試驗中期血常規（）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均無生物學意義

表3 各組大鼠試驗末期血常規（）

表3 各組大鼠試驗末期血常規（）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均無生物學意義

2.3.2 血液生化指標 雌性大鼠高劑量組谷草轉氨酶(glutamic-oxalacetic transaminease，AST)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、甘油三酯(triglyceride，TG)水平低于陰性對照組，差異有統計學意義（P＜0.01），雄性大鼠低劑量組BUN、肌酐（creatinine，Cr）、中劑量組TG、總蛋白（total protein，TP）、高劑量組TP 值低于陰性對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），但均在正常值范圍內，故無生物學意義。其余各項指標與陰性對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

表4 各組大鼠血液生化指標（）

表4 各組大鼠血液生化指標（）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，但均無生物學意義

2.4 臟器系數及病理組織檢查經口連續給予不同劑量受試物90 天后經大體解剖，各劑量組大鼠肝、脾、腎、睪丸的質量和臟/體比值與陰性對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05），且均在正常值范圍內。經肉眼觀察與顯微鏡下觀察，各劑量組與陰性對照組大鼠主要臟器的外觀形態、表面色澤、輪廓體積、位置、臟器結構與細胞內容物等均未見異常病理改變。

3 討論

按4.3、8.5、17.0 g/kg（體質量）連續灌胃大鼠短柄五加90 天，大鼠一般狀況未見明顯異常；體質量、總攝食及總食物利用率比較差異均無統計學意義；血液學某些指標高于或低于陰性對照組，但均在實驗室正常值參考范圍內，并且無劑量反應關系；動物解剖后臟/體比值各組間比較差異無統計學意義，病理組織學未見病變。

綜上所述，短柄五加喂養大鼠90 天，觀察到的無害作用劑量最大為17.0 g/kg（體質量），本研究可為短柄五加長期服用及推廣應用提供實驗依據。