東莞地區(qū)女性群體HPV感染現(xiàn)狀及其與陰道微生態(tài)的關(guān)系*

黃金印，劉 巍，李秋萍，鐘嘉玲，劉正嫻，溫慶輝，趙偉華，羅襯銀△

1.廣東省東莞市謝崗醫(yī)院檢驗科，廣東東莞 523590；2.廣東省東莞市謝崗醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東東莞 523590；3.廣東省東莞市人民醫(yī)院檢驗科，廣東東莞 523059

宮頸癌是目前發(fā)現(xiàn)的所有癌癥中唯一病因明確的癌癥,其發(fā)病與人乳頭瘤病毒(HPV)感染的持續(xù)性發(fā)展有關(guān)[1]。HPV流行狀況、感染高峰年齡和病毒亞型在不同地區(qū)、不同地理環(huán)境和種族之間存在差異[2-4]。高危型HPV感染導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)病變 (CIN)，從癌前病變發(fā)展到癌是一個漫長的過程，在這漫長過程中，不僅僅由病毒的毒力所決定，陰道微生態(tài)的平衡狀態(tài)也至關(guān)重要[5]。關(guān)于陰道微生態(tài)狀況與HPV感染的關(guān)系目前研究較多，但尚無統(tǒng)一結(jié)論，眾多研究表明細菌性陰道病(BV)與 HPV 感染呈正相關(guān)，關(guān)于需氧菌性陰道炎(AV)、滴蟲性陰道炎(TV)及外陰陰道假絲酵母菌病(VVC)和 HPV 感染是否相關(guān)存在爭議[6-14]。為了解東莞地區(qū)女性HPV感染現(xiàn)狀及其與陰道微生態(tài)狀況的相關(guān)性，本研究以11 790例臨床標本為研究對象，分析HPV在不同年齡段、不同基因型、單一感染和多重感染的分布特點，同時探討HPV感染與陰道微生態(tài)狀況的相關(guān)性，為本地區(qū)建立HPV流行病學(xué)資料提供依據(jù)，以期能對本地區(qū)HPV感染人群、子宮頸癌及其癌前病變的診斷和防治提供一定的客觀依據(jù)及理論參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選自2019年1-12月于東莞市人民醫(yī)院及東莞市謝崗醫(yī)院婦科門診就診或者查體且自愿接受檢測的11 790例女性,年齡15～79歲。受檢者的納入條件：已婚或有性生活史、近期未妊娠、近期未來月經(jīng)并且7 d內(nèi)無性生活、既往無子宮切除術(shù)、48 h內(nèi)未使用過陰道治療藥物和沒有其他與HPV感染相關(guān)聯(lián)的臨床癥狀。

1.2儀器與試劑 上海透景生命科技有限公司提供的HPV分型檢測試劑盒及配套的luminex多功能流式熒光點陣檢測儀；珠海麗拓生物科技有限公司提供的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒(化學(xué)反應(yīng)法)及TV-800檢測儀器。

1.3方法

1.3.1標本采集 HPV檢測標本：婦科醫(yī)生收集宮頸口的脫落細胞后把毛刷放入裝有細胞保存液的洗脫管中送檢。陰道微生態(tài)檢驗標本：用2根無菌棉拭子留取陰道側(cè)壁上1/3分泌物，其中一支用于陰道炎六聯(lián)檢，另一支加生理鹽水1 mL用于顯微鏡檢查。

1.3.2檢測方法與觀察指標 所有檢測均嚴格按所用儀器和試劑說明書進行操作，設(shè)置空白對照、陰性對照、陽性對照進行檢測。HPV分型檢測：采用通用引物進行多重PCR擴增，擴增產(chǎn)物通過多功能流式熒光雜交分型檢測儀進行檢測，同時檢測27種型別，包括高危型17種(16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82)、低危型10種(6、11、40、42、43、44、55、61、81、83)亞型。陰道微生態(tài)檢測：采用陰道炎六聯(lián)檢試劑盒評估陰道微生態(tài)狀況，包括形態(tài)學(xué)檢測(菌群密集度、菌群多樣性、優(yōu)勢菌等)和功能學(xué)檢測(陰道pH值、過氧化氫酶、唾液酸苷酶及白細胞酯酶等)。

1.3.3結(jié)果判斷 檢測結(jié)果嚴格按照說明書規(guī)定的判讀標準進行判斷。HPV感染：任何一種HPV亞型陽性即為HPV陽性，提示HPV感染，2種及以上亞型同時陽性，即為多重感染，同時感染低危型和高危型HPV為高低危混合型感染。

正常陰道微生態(tài)評價：(1)菌群密集度為Ⅱ～Ⅲ級；(2)菌群多樣性為Ⅱ～Ⅲ級；(3)乳酸桿菌為優(yōu)勢菌；(4)pH≤4.5；(5)乳酸桿菌功能無異常；(6)過氧化氫酶、唾液酸苷酶以及白細胞脂酶陰性。上述任意一項異常記作陰道微生態(tài)失衡(異常)。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以例數(shù)、百分率表示，比較采用χ2檢驗；利用Logistic回歸分析計算OR值及95%CI，描述HPV感染發(fā)生的危險因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HPV總的感染及分布情況 11 790例女性標本中，有2 536例感染HPV，總感染率為21.51%(2 536/11 790)。在所有HPV感染者中，單一亞型感染占71.85%(1 822/2 536)，多重感染占28.15%(714/2 536)，其中雙重感染占21.69%(550/2 536)，三重及以上感染占6.47% (164/2 536)。在所有單一亞型感染病例中，高危型感染占75.03%(1 367/1 822)，低危型感染占24.97%(455/1 822)。HPV感染以單一型別及高危型感染為主，見表1。

表1 HPV感染及分布情況

2.2不同HPV亞型的感染及分布情況 本研究檢測的病例中所有HPV亞型(27種)均有檢出，考慮到多重感染的情況，按單一型別HPV累計感染的頻次，計算各亞型感染構(gòu)成比，HPV亞型的感染頻次為3 471次，其中高危型感染以HPV52、HPV16、HPV58、HPV53及HPV18感染最常見，構(gòu)成比分別為15.82%(549/3 471)、9.85%(342/3 471)、8.21%(285/3 471)、6.74%(234/3 471)、4.15%(144/3 471)。低危型感染以HPV61、HPV81、HPV6感染比例較大，構(gòu)成比分別為5.10%(177/3 471)、4.67%(162/3 471)、4.58%(159/3 471)。不同型別HPV感染率如圖1所示。

圖1 不同HPV亞型的感染及分布情況

2.3不同年齡組 HPV 感染分布情況 在11 790例標本中按年齡不同分為10個年齡組，各年齡組 HPV 感染率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=52.173，P<0.001)，其中<25歲和≥55歲的年齡組HPV感染率較高。各年齡組間HPV高、低危型占比和單一、雙重、三重及以上HPV感染分布差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，各年齡組HPV感染率與HPV總的感染趨勢大致相同，均呈現(xiàn)先降低后升高的現(xiàn)象，見表2。在這10個年齡組中感染的HPV高危型前5位亞型是HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和 HPV18，感染的HPV低危型前3位亞型是HPV61、HPV81和HPV6，但每組各型排名有變化。

表2 不同年齡組 HPV 感染分布情況[n(%)]

2.4HPV陽性組、陰性組的陰道微生態(tài)狀況 1 011例同時進行HPV分型檢測和陰道微生態(tài)指標檢測的研究對象中，HPV 陽性組共209例(20.67%),HPV陰性組共802例(79.33%)。兩組間清潔度異常、乳酸桿菌含量異常、過氧化氫酶陽性、BV陽性率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。兩組間 pH>4.5、白細胞酯酶陽性及AV、TV、VVC陽性率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 HPV陽性組、陰性組的陰道微生態(tài)狀況[n(%)]

2.5陰道微生態(tài)改變與HPV感染的多因素分析 以HPV分型結(jié)果(陽性=1，陰性=0)為因變量，將單因素分析中差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的變量納入回歸模型方程，構(gòu)建二元Logistic回歸方程，以O(shè)R值作為風(fēng)險評估參數(shù)。通過Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，清潔度異常、乳酸桿菌含量異常、BV陽性是HPV感染的危險因素(OR=1.658、1.823、2.283，P<0.05)，見表4。

續(xù)表3 HPV陽性組、陰性組的陰道微生態(tài)狀況[n(%)]

表4 陰道微生態(tài)改變與HPV感染的多因素分析

3 討 論

本研究分析了東莞地區(qū)11 790例女性宮頸標本HPV分型檢測情況，結(jié)果顯示東莞地區(qū)女性群體HPV感染以單一型別及高危型感染為主，高危型以HPV52、HPV16、HPV58、HPV53及HPV18為主，低危型以HPV61、HPV81、HPV6為主，多重感染以二重感染為主。各年齡組HPV高、低危型占比和單一、雙重、三重及以上HPV感染分布中，HPV感染率情況均與HPV總的感染趨勢大致相同，均呈現(xiàn)先降低到大致平穩(wěn)后再升高的趨勢，在全年齡段兩端的<25歲的低年齡組和≥55歲的高年齡組感染率較高。同時，本研究進一步分析了1 011例同時進行HPV分型檢測和陰道微生態(tài)指標檢測的病例，結(jié)果顯示，HPV感染與陰道微生態(tài)異常密切相關(guān)。本研究在臨床常見陰道微生態(tài)評價各項指標中，HPV 陽性者與陰性者在清潔度異常、乳酸桿菌含量異常、過氧化氫酶陽性、 BV陽性率方面比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在多因素分析中，本研究結(jié)果顯示，清潔度異常、乳酸桿菌含量異常、BV陽性是HPV感染的危險因素，提示這3種影響因素增加了人群感染HPV的風(fēng)險。

有研究發(fā)現(xiàn)，陰道清潔度是HPV感染的危險因素，陰道清潔度越差，HPV感染率越高[7]，與本研究結(jié)果一致。因此，良好的陰道環(huán)境不僅有利于機體免疫細胞識別其他致病菌從而將其清除，也能避免這些細菌聚集和繁殖對HPV的保護作用。

有研究指出，陰道乳酸桿菌含量是維持女性陰道正常微生態(tài)環(huán)境的重要因素，同時還會影響其自身的正常功能[8]，一旦乳酸桿菌無法成為陰道微菌群中的優(yōu)勢菌，HPV 感染的概率便會大大提升，與本研究結(jié)果一致。乳酸桿菌既對陰道pH值及清潔度有重要影響，又能拮抗病原體增殖，對維持陰道自凈能力有重要意義。一旦乳酸桿菌不再是陰道菌群中的優(yōu)勢菌，陰道微生態(tài)平衡被打破，就會導(dǎo)致HPV感染機會大大增加[6]。

目前眾多研究表明，BV是HPV感染的危險因素[8-9]，關(guān)于VVC、TV與HPV 感染是否相關(guān)存在爭議。本研究顯示BV陽性是HPV感染的危險因素，而AV、VVC和TV則不是。張雪芳等[9]一項Meta 研究分析結(jié)果顯示，宮頸高危型HPV 感染與陰道微生態(tài)存在密切關(guān)聯(lián)，尤其是BV、VVC和乳酸桿菌含量異常是宮頸高危型HPV 感染的高危因素，而TV與高危型HPV 感染的關(guān)系尚不明確，有待進一步研究。SILVA等[10]的研究認為，因念珠菌感染的患者陰道pH通常小于4.5，增加了陰道抵抗病原微生物的能力，不易引起HPV持續(xù)感染，VVC可能是宮頸高危型HPV感染及CIN的一種保護性因素。湯艷艷[12]認為，感染高危型HPV的人群合并TV的風(fēng)險更高，且發(fā)生CIN及宮頸癌的風(fēng)險也增高，但更多研究認為TV與HPV感染無相關(guān)性[13-14]。針對以上相關(guān)研究，不同的研究者通過不同的實驗設(shè)計及研究方法得出的結(jié)論不盡相同，本研究中VVC和TV不是HPV感染的危險因素。本研究結(jié)果也不排除地區(qū)差異、研究樣本量及實驗方法等因素影響，仍需進一步研究。

綜上所述，東莞地區(qū)女性HPV感染率較高，且以單一、高危亞型感染為主，高危型以HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV18為主，低危型以HPV61、HPV81、HPV6為主，多重感染以二重感染為主，以<25歲、≥55歲年齡段感染率最高，HPV感染與陰道微生態(tài)狀況密切相關(guān)，清潔度異常、乳酸桿菌含量異常、BV陽性是HPV感染的危險因素。HPV的防治應(yīng)綜合考慮不同人群感染型別的分布特征及重視陰道微生態(tài)指標。本文明確了HPV在東莞地區(qū)女性群體中的感染率、基因型分布特征，以及與陰道微生態(tài)相關(guān)的影響因素，為本地區(qū)HPV感染提供流行病學(xué)資料，為HPV疫苗研制應(yīng)用和建立HPV感染人群的診斷及防治策略提供了客觀依據(jù)。