三白草酮固體分散體的制備、體外溶出度及表征*

徐文杰

（廣東省第二中醫院（廣東省中醫藥工程技術研究院、廣州中醫藥大學第五臨床醫學院），廣東省中醫藥研究開發重點實驗室，廣東廣州 510095）

三白草酮為從三白草中分離得到的一種結構獨特的木脂素[1]。三白草酮（Sauchinone）分子式為C20H20O6，現代研究表明三白草酮具有眾多的藥理活性，包括保肝[2]、抗炎[3]、抗氧化[4]、降血糖[5]、神經保護[6]、抗腫瘤[7]等藥理作用。但目前為止，尚沒有一個三白草酮有效成分的新藥得以成功開發，究其根本原因乃三白草酮理化性質所限，如脂溶性高、溶液穩定性低、吸收差、代謝迅速等特性，導致口服吸收率低、血藥濃度低、生物利用度差，直接影響其藥理活性和臨床用量，嚴重限制其臨床推廣使用。為此，在前期研究工作的基礎上，我們擬通過現代制劑技術-固體分散體技術進一步對三白草酮制劑工藝進行優化，以大幅度增加其水溶性，增加其穩定性，促進吸收，以提供較平穩的血藥濃度，發揮三白草酮最大藥理作用，維持持久藥效。

1 儀器與材料

1.1 儀器HaakeMiniCTW 微量混合擠出機（美國賽默飛世爾公司）；Nicolet6700 型傅立葉變換紅外光譜儀（美國賽默飛世爾公司）；Quanta400 熱場發射掃描電鏡（荷蘭飛利浦FEI公司）；SPX-150C 恒溫恒濕箱（上海博迅實業有限公司）；JJ500 型電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）；XS-205DU 電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；3K30型離心機（美國Sigma 公司）；TG209 型熱重分析儀（NETZSCH）；Agilent1200 型高效液相色譜儀（G1312A 型二元泵，G1329A 型自動進樣器，G1316A 型柱溫箱，G1314B型VWD 檢測器，美國安捷倫科技有限公司）；RC806 型智能溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）；KQ5200DE 型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；銳影（Empyrean）X-射線衍射儀（荷蘭帕納科公司）。

1.2 材料 三白草酮對照品（批號111863-201001）購于中國食品藥品檢定研究院，三白草酮（自制，純度≥98%），聚乙二醇6000 購于ISP 公司。甲醇（色譜純，默克公司），磷酸（色譜純，科密歐公司），水為超純水，磷酸、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁均為分析純。

2 方法與結果

2.1 樣品的制備

2.1.1 物理混合物的制備 選擇聚乙二醇6000（PEG6000）為載體材料，分別按藥物與載體材料的質量比為1:1，1:4 的比例準確稱量三白草酮與PEG6000，置于乳缽中研細，混勻，過80 目篩，置干燥器內保存，備用。

2.1.2 固體分散體的制備 將熱熔擠出機溫度設定為150℃；螺桿轉速設定為100r·min-1。待溫度達到設定值后，分別取上述質量比為1:1，1:4 的三白草酮-PEG6000物理混合物，分別投入擠出機的加料斗中，待物料從模孔擠出后，用不銹鋼盤收集，冷卻，于-20℃下放置24h，置干燥器中干燥，粉碎，過80 目篩，備用。

2.2 體外溶出度試驗

2.2.1 HPLC測三白草酮

2.2.1.1 色譜條件Agilent Eclipse XDB-C18 色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相：乙腈-水（60:40），柱溫30℃，流速1mL·min-1，檢測波長240nm。

2.2.1.2 對照品溶液的制備 取三白草酮對照品適量置10mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得三白草酮含量為296.8μg·mL-1的對照品溶液。

2.2.1.3 供試品溶液的制備 取三白草酮與PEG6000的固體分散體，精密稱定，置10mL 量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，濾過，即得。

2.2.1.4 陰性對照溶液的制備 稱取PEG6000 適量，精密稱定，置10mL 量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，濾過，即得。

邊坡穩定性、土石方量、擾動面積變化情況及運行初期水土保持效果、施工過程中水土流失狀況及對周邊造成的影響。

2.2.1.5 專屬性試驗 精密量取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，按照“2.2.1.1”項的色譜條件進行測定，結果顯示對照品溶液和供試品溶液在三白草酮相應位置有對應色譜峰出現，且與相鄰色譜峰的分離度達到1.5 以上，表明該方法專屬性良好，輔料對三白草酮含量測定無干擾，見圖1。

圖1 三白草酮HPLC

2.2.1.6 線性關系考察 精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置于2mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10μL，按“2.2.1.1”項條件下進樣，測得峰面積。分別以三白草酮濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）繪制標準曲線，得三白草酮的標準曲線為Y=23.76X-9.9512（r=0.99998），結果表明三白草酮在14.84～148.4μg·mL-1范圍內呈良好線性關系。

2.2.1.7 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液重復進樣6 次，按“2.2.1.1”項下進行測定，記錄峰面積并計算RSD。結果表明，三白草酮峰面積的RSD 值為0.85%，小于2%，表示儀器精密度較好。

2.2.1.8 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于第0、1、2、4、8、12、24h進樣10μL 測定，按“2.2.1.1”項下的色譜條件測定，記錄三白草酮峰面積并計算RSD。結果表明，三白草酮峰面積的RSD為1.40%，小于2%，樣品溶液在24h內穩定。

2.2.1.9 重復性試驗 取同一批樣品，按“2.2.1.3”項下的方法平行制備6份供試品溶液，分別進樣測定，按“2.2.1.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積并計算RSD。結果表明，三白草酮峰面積的RSD 為1.18%，小于2%，該方法重復性良好。

2.2.1.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知三白草酮含量的樣品，平行9份，分別精密加入相對于供試品含量的80%、100%、120%的三白草酮對照品溶液，按“2.2.1.3”項下的供試品溶液制備方法制備，進樣測定，按“2.2.1.1”項下條件測定，記錄峰面積并計算三白草酮含量及回收率。結果表明，三白草酮加樣回收率平均值為99.83%，RSD為0.78%，小于2%，表明該方法穩定可行。見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n=9）

2.2.1.11 測定方法 分別精密吸取對照品溶液與各供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，計算三白草酮含量，即得。

圖2 三白草酮-PEG6000固體分散體和物理混合物溶出度曲線

2.3 固體分散體的物相表征

2.3.1 紅外光譜分析 采用Nicolet6700 傅立葉紅外光譜儀，用KBr 分別對三白草酮、PEG6000 及其物理混合物和固體分散體進行壓片處理，在400～4000cm-1范圍掃描，進行紅外光譜分析，根據FT-IR圖譜中藥物和載體的吸收峰判斷藥物與載體之間的相互作用，結果見圖3。從結果可知，三白草酮中3384.85cm-1吸收峰為-OH 的伸縮振動峰；PEG6000中1280.68cm-1、1242.15cm-1吸收峰為C-O 的伸縮振動峰；在物理混合物中存在3425.54cm-1（ν-OH）、1280.68cm-1和1241.80cm-1（νC-O）吸收峰，而在固體分散體中，-OH 的伸縮振動峰向低波數（3417.75cm-1）移動，而C-O 的伸縮振動峰沒有發生遷移，但是峰強度減弱，認為可能是三白草酮與PEG6000 在固體分散體中通過-OH和C-O以氫鍵作用結合。

圖3 三白草酮-PEG6000固體分散體和物理混合物lR圖

2.3.2 X-射線粉末衍射分析 工作條件：銅靶Kα1射線，高壓強度40kV，電流40mA，發射狹縫1/32°，防散射狹縫1/16°，防散射狹縫7.5mm，2θ 范圍：3°-～50°，步長0.02°，每分鐘停留40s。分別對三白草酮、PEG6000 及其物理混合物和固體分散體進行X-射線粉末衍射分析。結果見圖4。由圖可知，PEG6000 在19.19°，23.44°，26.21°，26.93°出現衍射峰，而三白草酮沒有明顯的衍射峰，三白草酮與PEG6000 各比例的固體分散體和物理混合物中都有衍射峰出現，且都隨著載體含量的增加衍射強度增大，但固體分散體的衍射峰強度與相應比例的物理混合物的衍射峰相比強度減弱，提示沒有新的物相形成。

圖4 三白草酮-PEG6000固體分散體和物理混合物X-射線衍射圖

2.3.3 掃描電鏡（SEM）為了較好的研究制備前后三白草酮形態的變化以及所制備固體分散體的表面形態，分別對三白草酮、PEG6000 以及三白草酮:PEG6000（1:4）物理混合物和固體分散體進行熱場掃描電鏡的觀察。將上述四個樣品分別粘于鋁臺表面，表面噴金后，采用20Kv 的加速電壓掃描其表面，并拍照。由圖5可見，固體分散體中沒有形成新的物相，這與X-射線衍射的結果一致。

圖5 三白草酮-PEG6000物理混合物（PM）和固體分散體（SD）SEM圖

3 討論

采用熱熔擠出技術制備三白草酮固體分散體，以PEG6000 為載體制備固體分散體，考察藥物與載體比例為1:1、1:4 時，三白草酮的體外溶出度，并采用紅外光譜、X-射線衍射、掃描電鏡對其進行表征。體外溶出度試驗結果顯示，PEG6000 為載體制備的固體分散體中三白草酮的90min累積體外溶出度搭98%以上。IR 結果顯示，布渣葉總黃酮與各載體均以氫鍵的形式結合。X-射線衍射和掃描電鏡結果顯示，布渣葉總黃酮與各載體在固體分散體中均未形成新的物相。