自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥Salofalk 體外溶出一致性評價研究

李付鸞 董文弟 劉云 賈妥 孟玉 張曉寧 趙曉芳

炎癥性腸病(IBD)指非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結腸炎(UC)和克羅恩病(CD)。UC 是一種原因不明的慢性結腸炎,主要是侵及結腸黏膜的慢性非特異性炎性疾病,常始自左半結腸,可向結腸近端乃至全結腸以連續方式逐漸進展［1］。UC 在西方國家非常常見,發病率為(10～200)/10 萬［2］。我國目前尚缺乏大規模的以人口為基礎的流行病學調查數據,粗略估計我國UC 患病率為11.6/10 萬［3］。根據中華醫學會2018 年9 月通過的“炎癥性腸病診斷與治療的共識意見”,美沙拉嗪為炎性腸炎治療藥物A 級推薦。國外上市的美沙拉秦緩控釋制劑較多［4］,除Salofalk 外,還有緩慢釋放型美沙拉秦(Asacol)、時間依賴型美沙拉秦(Pentasa)、pH 依賴性緩釋型美沙拉秦(Apriso)和高濃度美沙拉秦緩釋膠囊(Lialda)［5］。國內目前無美沙拉嗪產品通過一致性評價。國家食品藥品監督管理總局自制藥質量和療效一致性評價專家委員會審核確定的第十批參比制劑目錄確定原研藥Salofalk 為自制藥美沙拉嗪腸溶片的參比制劑。本研究按照《國務院辦公廳關于開展自制藥質量和療效一致性評價的意見》(國辦發［2016］8 號)和國家藥品監督管理局《關于發布普通口服固體制劑參比制劑選擇和確定等3 個技術指導原則的通告》(2016 年第61 號)的有關要求,開展了自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥(參比制劑Salofalk)的體外釋放曲線一致性評價研究。由于美沙拉秦生物藥劑學分類系統(BCS)分類為4 類,酸性介質中的溶解度很小,自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥 (參比制劑Salofalk)在pH 1.0 鹽酸、pH 4.5 醋酸鹽、水介質中2 h 內藥物釋放均<20%,推斷在這3 種介質中的釋放不具備區分能力。故本研究著重測定了自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥(參比制劑Salofalk)在pH 6.8 和pH 7.4 磷酸鹽介質中的釋放曲線。本研究采用美國食品藥品監督管理局(FDA)和日本醫療器械審評審批機構(PMDA)推薦采用相似因子比較法評價自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥(參比制劑Salofalk)釋放曲線一致性［6］,指導自制藥美沙拉嗪腸溶片的質量和療效一致性評價研究,以提高自制藥與原研藥生物等效性(BE)試驗的成功率。

1 材料與方法

1.1儀器 Agilent 708-Ds 自動溶出儀(美國Agilent公 司)；UV2600 紫外。可見分光光度計(日本島津公司)；pH 計FE-28(梅特勒)；電子天平AUW120D(日本島津公司)；FAVD-25(上海富科思)。

1.2試藥 自制藥美沙拉嗪腸溶片(石家莊蒎格醫藥科技有限公司,規格：250 mg,批號：200171、200172、200173)；生產規模：24 萬片/ 批。原研藥Salofalk(德國Dr Falk Pharma GmbH,規格：250 mg,批號：16B04458L、17I21478L、18A11484L)；美沙拉嗪腸溶片對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號：100565-201802,含量：99.4%)；二水合磷酸二氫鈉(AR,科密歐)；氫氧化鈉(AR,天津永大化學)、磷酸二氫鉀(AR,科密歐)、冰醋酸(AR,天津天大化學)；結晶醋酸鈉(AR,天津天大化學)；鹽酸(AR,科密歐)；實驗用水為純化水(華北制藥有限公司)。

1.3釋放曲線測定方法 釋放曲線測定采用照紫外-可見分光光度法(中國藥典2015 年版四部通則0401),精密量取各取樣點的供試品或對照品溶液5 ml,用相應的緩沖溶液稀釋到50 ml,在330 nm 的波長處測定吸光度。供試品溶液：取自制藥美沙拉嗪腸溶片或原研藥(參比制劑Salofalk)按照《中華人民共和國藥典》2015 年版四部通則溶出度與釋放度測定法第一法,轉速 50 r/min,分別以pH 1.0 鹽酸、pH 4.5 醋酸、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水或pH 7.4 磷酸鹽緩沖液為釋放介質,體積 900 ml,在不同取樣點取樣5 ml 即得。每次取樣后回補釋放介質5 ml。對照品溶液：精密稱取美沙拉嗪腸溶片對照品3 mg,分別加入pH 1.0 鹽酸、pH 4.5醋酸、pH 6.8 磷酸鹽緩沖液、水或pH 7.4 磷酸鹽緩沖液溶解定容至100 ml。即得每1 ml 中約含美沙拉嗪30 μg 的溶液,作為對照品溶液。

2 結果

2.116B04458L、17I21478L、18A11484L 批參比制劑在不同介質中的溶出結果 三批參比制劑在4 種介質中的溶出均較慢,具有明顯的pH值依賴。在介質pH 6.8和7.4 磷酸鹽緩沖液中具有平滑的曲線形態,溶出時間在2 h 可達到80%以上,而其他介質中溶出較慢,且在溶出過程中片間差異較大。結合所得數據并參考美沙拉嗪片質量標準,選擇介質pH 6.8 或7.4 磷酸鹽緩沖液作為自制樣品的溶出介質。見表1～3 及圖1～3 溶出數據和溶出曲線圖。

圖1 16B04458L 參比制劑Salofalk 在不同介質中的溶出曲線

表1 16B04458L 批參比制劑在不同介質中的溶出結果(%)

2.2自制樣品在不同介質中的溶出結果 200171、200172、200173 自制樣品溶出趨勢與參比制劑一致,相似因子均達到50%以上,并且2 h 溶出達到85%以上,溶出曲線平滑,溶出行為相似。見表4,表5 及圖4,圖5。

圖2 17I21478L 參比制劑在不同介質中的溶出曲線

圖3 18A11484L 參比制劑在不同介質中的溶出曲線

圖4 自制樣品在pH 6.8 磷酸鹽緩沖液介質中的溶出曲線

圖5 自制樣品在pH 7.4 磷酸鹽緩沖液介質中的溶出曲線

表2 17I21478L 批參比制劑在不同介質溶出數據結果(%)

表3 18A11484L 批參比制劑在不同介質中的溶出結果(%)

表4 自制樣品在pH 6.8 磷酸鹽緩沖液介質中的溶出度結果(%)

表5 自制樣品在pH 7.4 磷酸鹽緩沖液介質中的溶出度結果(%)

3 討論

美沙拉嗪屬于BCS4 類,為低溶低滲藥物,相較于BCS1 類等藥物仿制難度較大,對于緩控釋制劑,仿制難度又有所增加。美沙拉嗪腸溶片屬于多層包衣腸溶片,參比制劑Salofalk 批間差異較大,所以美沙拉嗪腸溶片仿制難度極大［7,8］。這應該是目前為止國內尚沒有美沙拉嗪腸溶片通過一致性評價的主要原因。固體口服制劑的體外溶出度檢測是體外評價藥物質量的重要指標,對藥物的臨床實驗起著重要的指導作用［9］。尤其是自制藥,其體外溶出行為與參比制劑是否具有相似性,是決定后續是否開展生物等效性實驗的重要參考,也是自制藥品是否與參比制劑質量一致性的重要參考指標。

通過對參比制劑Salofalk 與自制藥美沙拉嗪腸溶片在pH 6.8、pH 7.4 磷酸鹽緩沖液中的溶出行為與溶出數據進行對比,相似因子>50%,溶出曲線平滑、趨勢一致。在對比研究參比制劑Salofalk 與自制藥在pH 1.0 鹽酸溶液、pH 4.5 醋酸溶液、水介質溶出行為時發現2 h 內溶出行為相似,但溶出均<20%。綜合考慮藥物在不同介質中的溶出行為,選定pH 6.8、pH 7.4 磷酸鹽緩沖液為溶出的主要研究介質。

綜上所述,經過多批次自制藥美沙拉嗪腸溶片與參比制劑Salofalk 在不同溶出介質中的溶出行為研究,兩者溶出行為一致,為其體內的評價實驗奠定了基礎。