TTF-1在子宮內膜癌中的表達與臨床意義

徐春紅，戴保秀，潘 云

（1.大理護理職業學院，云南大理 671006；2.玉溪市人民醫院，云南玉溪 653100；3.大理大學第一附屬醫院，云南大理 671000）

子宮內膜癌（endometrial carcinoma，EC）為女性生殖系統常見的惡性腫瘤，在全球范圍內發病率有逐年上升的趨勢。據報道在每10 000例國外女性中，約有10～19例子宮內膜癌患者〔1〕。研究〔2〕表明我國子宮內膜癌的發病率在女性生殖系統惡性腫瘤中排列第二，近年來其病死率也呈現上升趨勢。國際婦產科聯盟（FIGO）分期的Ⅰ期及Ⅱ期子宮內膜癌患者5年存活率一般在90%以上，Ⅲ期患者5年存活率為57%~66%，而Ⅳ期患者5年存活率僅為20%~26%〔3〕，目前子宮內膜癌的預后并不理想。因此，闡明子宮內膜癌的病因、發病機制，對改善子宮內膜癌的預后尤為關鍵。甲狀腺轉錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）是肺癌、甲狀腺癌病理診斷中常用的免疫組化指標。TTF-1的基因定位于人類染色體14q13，具有器官特異性〔4〕。在相關器官組織的形態發生發育、分化過程中，TTF-1都扮演著關鍵的角色。此外，部分基因的表達調節與TTF-1有關，保持維護器官組織的功能也與TTF-1有關。研究報道在泌尿系統部分小細胞癌、乳腺癌等病變中，均出現不同程度的TTF-1表達〔5〕，說明TTF-1的表達譜比較寬泛。因此，臨床工作中，有必要重新認識TTF-1在子宮內膜癌中的診斷意義。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 實驗標本 標本采集自2010年1月至2015年6月在大理大學第一附屬醫院就診的患者，其中，子宮內膜正常者11例（以下稱“正常組”）、子宮內膜增生者17例（以下稱“增生組”）、子宮內膜癌者45例（以下稱“內膜癌組”），共計73例。依據世界衛生組織的分級標準，將內膜癌組又分為：高分化組（25例）和中、低分化組（20例）。臨床中一般將子宮內膜癌分為Ⅰ型子宮內膜樣腺癌和Ⅱ型子宮內膜癌。按此標準對研究標本進行分期，Ⅰ型33例，Ⅱ型12例。納入實驗的標本，手術前沒有實施相關的診療方案，如放療、診斷性手術等。

1.1.2 主要試劑TTF-1一抗，即用型鼠抗人TTF-1單克隆抗體（Dako公司，型號：8G7G3/1）；TTF-1二抗（羊抗，Dako公司）；DAB顯色劑（Dako公司），按說明書以DAB原液與DAB稀釋液1∶50的比例混合，避光保存；磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）；檸檬酸鹽緩沖液（0.01 mol/L，pH 6.0）。

1.2方法

1.2.1 免疫組化SP法檢測TTF-1表達 選取蠟塊切片，厚度4 μm。切片脫蠟及水化，0.5% H2O2封閉內源性過氧化物酶，檸檬酸鹽緩沖液高溫修復組織抗原（220 s），冷卻后用PBS沖洗。5%羊血清室溫孵育30 min；加入TTF-1一抗，4℃冰箱過夜。第2天取出復溫1 h，PBS沖洗，加入TTF-1二抗，室溫孵育60 min。DAB試劑顯色，蘇木素復染細胞核、脫水、透明，中性樹膠封片。PBS代替一抗，作陰性對照；已知TTF-1陽性的肺腺癌，作陽性對照。

1.2.2 判斷標準TTF-1陽性結果定位在目標細胞核。表現為相應細胞的細胞核中有棕黃色顆粒呈現，陽性率＞5%判斷為陽性。

1.2.3 統計分析 實驗數據使用SPSS 17.0軟件進行統計分析，運用χ2檢驗進行計數分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3種不同內膜組織標本中TTF-1的表達 免疫組化染色結果顯示，TTF-1表達于子宮內膜腺體腺上皮細胞核，細胞核中出現棕褐色的顆粒。在正常增生期，可見部分增生子宮內膜腺體腺上皮細胞核TTF-1陽性表達；在正常分泌期，可見較多分泌期子宮內膜腺體腺上皮細胞核TTF-1陽性表達；在復雜性增生子宮內膜中，可見部分子宮內膜腺體腺上皮細胞核TTF-1陽性表達。中、高分化子宮內膜癌中，可見部分癌細胞核TTF-1陽性表達；低分化子宮內膜癌中，可見大部分癌細胞核TTF-1陽性表達。見圖1~2。

圖1 TTF-1在正常子宮內膜及子宮內膜增生組織中的表達（20×）

圖2 TTF-1在不同分化程度子宮內膜癌中的表達（40×）

2.2 TTF-1在不同子宮內膜組織中的表達情況TTF-1在正常組、增生組、內膜癌組中的陽性率分別為45%、35%、16%。與正常組比較，內膜癌組中TTF-1陽性率較低（P=0.030），表明僅部分內膜癌表達TTF-1。見表1。33例Ⅰ型子宮內膜癌及12例Ⅱ型子宮內膜癌中，TTF-1的陽性率分別為18%、8%，兩種類型子宮內膜癌中TTF-1的陽性率差異無統計學意義。見表2。

表1 不同子宮內膜組織中TTF-1的表達

表2 子宮內膜癌Ⅰ型及Ⅱ型中TTF-1的表達

2.3 TTF-1表達與臨床特征的關系 在內膜癌組中，與高分化子宮內膜癌比較，TTF-1在中、低分化子宮內膜癌中的表達明顯上調（P=0.017），提示TTF-1在不同分化程度的子宮內膜癌中表達有差異，且隨腫瘤的分化程度降低而逐漸升高。TTF-1在子宮內膜癌中的表達，與患者年齡（P=0.465）、民族（P=0.826）、手術病理分期（P=0.180）、腫瘤浸潤肌層深度（P=0.660）、有無轉移（P=0.290）均無相關性。見表3。

3 討論

Niu等〔6〕研究表明，TTF-1在28例正常子宮內膜組織中的陽性率為54%。Sullivan等〔7〕報道TTF-1在216例正常子宮內膜組織中的陽性率為55%，45例單一增生內膜組織中TTF-1的陽性率為53%，25例異型增生內膜標本中TTF-1的陽性率為52%。何惠嫦等〔8〕報道了23例子宮內膜增生未惡變組中TTF-1的陽性率為60.8%，比內膜增生發生惡變組中TTF-1的陽性率高，且差異有統計學意義。陳蘇瓊等〔9〕研究表明在32例正常子宮內膜組織中，TTF-1的陽性率為68.75%。張越等〔10〕研究也表明，30例正常子宮內膜組織中TTF-1的陽性率為70.00%，30例非典型增生子宮內膜組織中TTF-1的陽性率為53.33%，其結果提示正常子宮內膜組織中TTF-1顯著表達，而增生內膜中TTF-1的表達呈下降趨勢。本研究中正常組11例，增生組17例，其TTF-1的陽性率分別為45%、35%，正常子宮內膜及子宮內膜增生病變中TTF-1的表達差異無統計學意義。本研究及上述研究均提示正常子宮內膜及子宮內膜增生癥中，均出現不同程度的TTF-1表達。TTF-1可能參與了正常子宮內膜或子宮內膜增生癥發生惡變的過程，但其機制不清。與上述研究相比，本研究正常子宮內膜及子宮內膜增生中TTF-1的陽性率偏低，可能與研究病例少、不同研究者采用的TTF-1陽性標準不同等因素有關。

錢萍等〔11〕檢測了TTF-1在35例子宮內膜樣癌、11例子宮內膜透明細胞癌中的表達，陽性率分別為5.7%、9.1%。Fujiwara等〔12〕研究了55例子宮內膜樣腺癌，其TTF-1的陽性率為10%。Sullivan、何惠嫦、陳蘇瓊及張越等〔7-10〕分別研究了106、28、30、80例子宮內膜癌，TTF-1的陽性率分別為64%、44.4%、36.67%、33.75%。本研究TTF-1在45例子宮內膜癌中的陽性率為16%，其中I型子宮內膜癌TTF-1陽性率18%、Ⅱ型子宮內膜癌TTF-1陽性率8%，研究結果比錢萍等〔11〕、Fujiwara等〔12〕報道的陽性率稍高；比Sullivan、何惠嫦、陳蘇瓊及張越等〔7-10〕報道的陽性率偏低。但本研究中TTF-1在子宮內膜癌組中的陽性率明顯低于正常子宮內膜組（P=0.030）。相關研究顯示TTF-1在子宮內膜癌中的表達，不同試驗的結果有差異；此結論與檢測過程中采用的TTF-1抗體及實驗標本不同、TTF-1反應體系不同等因素有關。

本研究中TTF-1在子宮內膜癌中的表達與患者民族、年齡、手術病理分期、腫瘤浸潤肌層深度及有無轉移等均無相關性。子宮內膜癌組織中表達TTF-1，不影響患者的手術分期，結果與Sullivan等〔7〕的報道相近。本研究中子宮內膜癌的分期、腫瘤的浸潤轉移，與其是否表達TTF-1均無相關性，該結論與何惠嫦等〔8〕的研究結果有差異。原因可能是：病例在3組不同內膜組織標本中分布不均勻；不同研究過程運用的TTF-1抗體克隆號不一致；其他一些生物學因素的影響。Sullivan等〔7〕初次報道子宮內膜組織標本中出現TTF-1陽性，提示TTF-1發揮腫瘤抑制因子的功能，但機制不清。有研究〔13〕也顯示TTF-1在鼠肺腺癌模型中的表達，影響腫瘤細胞的浸潤、轉移；同時TTF-1表達下調，影響腫瘤的去分化及轉移潛能的增加。研究〔10〕發現在子宮內膜癌惡性變過程中，TTF-1也發揮了腫瘤抑制因子的功能，此外，在腫瘤進展過程中，TTF-1的作用喪失及表達減少，可能影響腫瘤細胞的增殖。魯曉東等〔14〕研究提示TTF-1及PTEN基因表達降低，會影響腫瘤的肌層浸潤、FIGO分期及盆腔淋巴結的轉移。低級別子宮內膜癌中TTF-1的表達較少，患者的預后不好〔15〕。本研究的子宮內膜癌組中，與高分化子宮內膜癌比較，TTF-1在中、低分化子宮內膜癌中的表達明顯上調（P=0.017），提示TTF-1在不同分化程度的子宮內膜癌中表達有差異，且隨腫瘤的分化程度降低而逐漸升高，與Ervine等〔15〕的研究結果相近。但本研究未進行患者的隨訪，無生存曲線分析結果，未能闡明不同分化程度的子宮內膜癌中TTF-1的表達是否會影響患者預后。

綜上所述，在子宮內膜癌發展過程中，TTF-1可能參與了腫瘤的進展。鑒于部分子宮內膜癌表達TTF-1，當女性患者其他臟器或組織出現來源部位不明轉移瘤且TTF-1陽性時，要考慮有子宮內膜癌發生的可能。病理工作中需要進一步分析，不同類型的子宮內膜組織標本表達TTF-1的特點，并揭示其生物學機制，為子宮內膜癌治療提供病因學的依據。