阿比特龍對老年前列腺癌病人PI3K/AKT信號通路及腫瘤標志物水平的影響

王建衛 王強 李鼎

前列腺癌是威脅中老年男性健康的常見惡性腫瘤，具有高發病率及致死率，嚴重影響病人生活質量，但其發病機制目前尚不完全明確[1]。近年來，越來越多的研究顯示，磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信號通路參與調節機體細胞生長、增殖、凋亡、炎癥反應等多種生理過程，并在前列腺癌的發生發展中發揮重要作用[2]。前列腺癌治療手段多樣，然而對于晚期前列腺癌，大部分病人在治療1年后應答水平逐漸降低，腫瘤進展，進入去勢抵抗性前列腺癌階段[3-4]。阿比特龍是一種新型內分泌治療藥物。有研究顯示，阿比特龍聯合潑尼松治療未經化療去勢抵抗性前列腺癌病人，可延長病人影像學無進展生存期[5]。本研究采用阿比特龍治療老年去勢抵抗性前列腺癌病人，觀察其對病人PI3K/AKT信號通路及腫瘤標志物水平的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2018年6月至2020年6月我院收治的88例老年前列腺癌病人為研究對象，年齡60～78歲，平均(69.57±5.59)歲，按照隨機數表法分為觀察組和對照組，每組各44例。本研究獲得我院醫學倫理委員會批準，2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 納入標準 (1)病人均符合前列腺癌臨床診斷標準[6]，且經病理組織學檢查確診；(2)病人均符合去勢抵抗性前列腺癌標準：血清睪酮濃度<1.7 nmol/L，達到去勢水平；每隔2周，連續3次前列腺特異性抗原(PSA)水平升高，且2次PSA均較最低值升高50%，絕對值>2 ng/mL；抗雄激素撤退治療無效或連續給予內分泌治療仍然出現PSA進展[7]；(3)入院前1個月內未使用酮康唑、抗雄性激素等其他藥物治療；(4)TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期；(5)年齡≥60歲；(6)獲有效隨訪，臨床資料完整；(7)病人或其家屬知情同意，簽署知情同意書。

1.3 排除標準 (1)存在病毒性肝炎史、慢性肝臟疾病史或轉氨酶水平異常者；(2)對試驗藥物過敏者；(3)垂體或腎上腺皮質功能減退者；(4)既往接受細胞毒化療或生物療法治療者；(5)治療依從性差，未完成治療方案者；(6)中途退出或隨訪脫落者。

1.4 方法 對照組予以潑尼松(浙江仙琚制藥股份有限公司，國藥準字H33021207)口服，5 mg/次，2次/d。觀察組予以醋酸阿比特龍(正大天晴藥業集團股份有限公司，國藥準字H20193207)口服，1000 mg/次，1次/d；聯合潑尼松口服，5 mg/次，2次/d。2組均以4周為1個治療周期，治療2個周期后觀察相關指標。為保障病人順利完成治療及相關隨訪，治療期間加強與病人及家屬溝通，緩解病人不良情緒，加強出院及用藥指導，叮囑病人及時進行復查。

1.5 觀察指標 (1)觀察2組治療后2個月PI3K和AKT的表達情況。經穿刺手術取前列腺癌組織3 mg，于-80 ℃冰箱保存待檢，取組織剪碎，于勻漿器中加入400μL單去污劑裂解液，4 ℃下2400 r/min離心5 min，去上清分裝于Ep管中-20 ℃保存。BCA 工作液測定其中蛋白濃度。配12%分離膠和5%濃縮膠，泳道邊緣加1× Loading Buffer，接好電極80 V電壓濃縮膠，至分離膠時調整電壓至120 V，待染料達到分離膠底部時即可停止。電泳完畢后，根據目的蛋白分子量進行切膠，使聚偏二氟乙烯膜、濾紙與膠匹配，進行130 mA穩流轉膜2 h；將轉好的聚偏二氟乙烯膜放入5%脫脂奶粉封閉液的小盒中，4 ℃搖床上封閉2 h；將雜交膜放入雜交袋中，加入稀釋好的一抗工作液37 ℃孵育2 h或者過夜，用洗滌緩沖液(TBST)洗膜3次，每次分別洗15、10、10 min。按1∶5000稀釋二抗，加入1 h后TBST洗膜3次，均5 min；顯影，定影，采用Quantity One軟件分析PI3K和AKT的相對表達量。(2)比較2組治療前1 d及治療后2個月腫瘤標志物水平。采集病人空腹外周靜脈血5 mL，經3000 r/min離心10 min，血清分離后置于-20 ℃冰箱保存備測。采用羅氏Cobase 601型全自動電化學發光分析儀及配套試劑盒檢測血清癌胚抗原(CEA)、腫瘤細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)及PSA水平。(3)比較2組治療前1 d及治療后2個月T淋巴細胞亞群分布及炎癥因子水平。采用美國貝克曼庫爾特公司生產的Beckman型流式細胞儀進行細胞收獲，并采用Simulset軟件進行結果分析，檢測T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+分布情況，試劑盒均由上海康朗生物科技有限公司提供；采用酶聯免疫吸附法檢測IL-8、TNF-α水平，試劑盒來自鄭州安塞生物科技有限公司。(4)所有病人均隨訪1年，前6個周期每8周行骨掃描、CT、MRI檢查，6個周期后每12周行骨掃描、CT、MRI檢查，通過主動復診及電話方式對病人進行隨訪，調查病人1年生存情況。

2 結果

2.1 2組治療后PI3K/AKT信號通路表達水平比較 觀察組治療后AKT、PI3K表達水平均顯著低于對照組(P<0.05或P<0.01)，見表2。

表2 2組治療后PI3K/AKT信號通路表達水平比較

2.2 2組治療前后腫瘤標志物水平比較 2組治療后血清PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE水平均顯著低于治療前(P<0.05)；且觀察組低于對照組(P<0.01)，見表3。

表3 2組治療前后腫瘤標志物水平比較

2.3 2組治療前后T淋巴細胞亞群分布及炎癥因子水平比較 2組治療后CD4+、CD4+/CD8+水平顯著高于治療前(P<0.05)，IL-8、TNF-α水平顯著低于治療前(P<0.05)；觀察組治療后CD4+、CD4+/CD8+水平顯著高于對照組(P<0.05)，IL-8、TNF-α水平顯著低于對照組(P<0.05或P<0.01)，見表4。

表4 2組治療前后T淋巴細胞亞群分布及炎癥因子水平比較

2.4 2組病人1年生存情況比較 1年隨訪期內，觀察組死亡2例，死亡率為4.55%；對照組死亡9例，死亡率為20.45%，觀察組1年總生存率顯著高于對照組(P<0.05)。

3 討論

前列腺癌在老年男性群體中多發，晚期前列腺癌病人的手術、傳統內分泌治療等手段可在一定程度上降低血清雄激素水平，延緩腫瘤進展，延長病人生存期，但多數病人在治療后期會出現應答水平降低，PSA與血清睪酮水平逐漸升高，腫瘤進展，進入去勢抵抗性前列腺癌階段[8-10]。目前對于去勢抵抗性前列腺癌階段病人，常用的治療藥物有細胞毒類化療藥物和內分泌治療藥物[11]。阿比特龍是細胞色素P450 17A1酶抑制劑，作為臨床新型的內分泌治療藥物，其對老年前列腺癌病人的作用效果尚不明確，故本文對此展開相關分析，觀察阿比特龍對老年前列腺癌病人PI3K/AKT信號通路及腫瘤標志物水平的影響。

本研究結果顯示，觀察組治療后PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE、IL-8、TNF-α水平均顯著低于治療前及對照組，CD4+、CD4+/CD8+水平顯著高于治療前及對照組，提示在潑尼松基礎上應用阿比特龍可明顯改善病人的炎癥反應，調節免疫功能，降低腫瘤標志物水平。血清腫瘤標志物是鑒別診斷腫瘤的有效指標，也與病人機體炎癥反應和免疫功能密切相關[12]。研究顯示，前列腺癌病人血清PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE均為異常升高狀態，且其水平與腫瘤惡性程度呈正相關[13]。CD4+與免疫活性細胞呈正相關，抑制性T細胞CD8+在抗腫瘤效應中發揮負調節作用，前列腺癌病人細胞免疫處于抑制狀態，免疫功能低下則會促進腫瘤的發生、發展[14]。雄激素持續刺激前列腺癌細胞內的雄激素受體是前列腺癌進展的主要原因，P450 17A1酶在體內雄激素合成的途徑上起到關鍵作用，可促進雄激素分泌，加重炎癥水平[15]。阿比特龍主要通過抑制P450 17A1酶而發揮作用，P450 17A1酶活性抑制后可明顯減少來源于腎上腺及前列腺癌細胞的雄激素合成，從而降低病人雄激素水平，遏制腫瘤發展，降低炎癥及腫瘤標志物水平。

本研究結果顯示，觀察組治療后AKT、PI3K表達水平均顯著低于對照組，提示阿比特龍對老年去勢抵抗性前列腺癌階段病人的積極療效可能與其對PI3K/AKT信號通路的調節有關。P13Ks是一種異源二聚體，由催化亞單位P110與調節亞單位P85組成，是肌醇和磷脂酰肌醇的重要激酶，具有脂類激酶活性和蛋白激酶活性[16]。AKT為P13K/AKT信號通路中的一個核心激酶，活化后可通過多種方式影響其下游的相關分子，是關鍵的抗凋亡調控分子[17]。雄激素和雄激素受體間的相互作用在前列腺癌的發生發展中發揮重要作用，雄激素通過與前列腺細胞內雄激素受體結合調節細胞的生長、分化、凋亡[18]。通過阻斷P13K/AKT信號通路可導致激活雄激素受體的通路失活，從而降低雄激素水平，阻礙前列腺癌進展。阿比特龍聯合潑尼松治療可下調AKT、PI3K表達，調控P13K/AKT信號通路，控制前列腺癌的發展。此外，本研究顯示，觀察組1年總生存率顯著高于對照組，表明阿比特龍對延長前列腺癌病人生存時間具有價值，李俊等[19]的研究也顯示，阿比特龍聯合潑尼松治療去勢抵抗性前列腺癌病人較單純潑尼松治療可顯著延長病人影像學無進展生存期及總體生存期。

綜上，阿比特龍治療老年前列腺癌病人可顯著降低腫瘤標志物水平，改善炎癥及免疫功能，并調控PI3K/AKT信號通路，對延長病人生存期具有價值。