超高效液相色譜法測定枸杞中枸杞酸的含量

枸杞是我國傳統的名貴中藥材，其果實為枸杞子，屬于茄科枸杞屬。枸杞子作為藥食同源的可食用品種，具有很高的綜合價值

。《中國藥典》中記載，枸杞子功能主治為滋補肝腎、益精明目

。近年來，隨著國內外大量科學的研究，枸杞子的多種功效也被進一步挖掘，例如，服用枸杞子多糖的糖尿病患者，紅細胞異形率與溶血脆性均基本恢復正常，同時還能有效保護四氧嘧啶損傷的胰島細胞，并且能抑制由四氧嘧啶造成的MDA生成量上升

；枸杞子能增強機體呼吸系統的免疫功能，從而提高呼吸系統的免疫能力

；枸杞提取物通過誘導SKN-1介導的抗氧化系統來抑制過量活性氧的產生，從而抑制Aβ的產生并抑制線粒體損傷，提示其具有神經保護作用，可用于阿爾茨海默病的預防和治療

。動物實驗顯示，枸杞子提取液還能增強小鼠皮膚內SOD活性，增加皮膚中膠原蛋白量，并減少脂質過氧化物丙二醛的含量

。枸杞子提取物還可以通過激活PKA-CREB信號通路，增加IIa型氧化肌纖維和有氧呼吸的比例來提高小鼠的平均跑步距離，增強小鼠肌肉耐力

。在臨床上，枸杞子的用法非常多，可單味煮服，也可以制作成藥酒應用，或者與其他藥物配伍同服。枸杞子還可以做成丸子、藥膏、藥散服用，而且枸杞子具有豐富的營養成分，保健價值受到人們的高度關注，其作為膳食補充劑可以通過調節腸道微生物組的組成變化預防炎癥性腸病

。

根據《社會救助暫行辦法》，有些應該納入扶貧兜底的對象不符合現行農村低保評定標準，應與中央《打贏脫貧攻堅戰的決定》保障兜底要求有效銜接，扶貧與低保“兩線合一”有待明確，另外在脫貧時間上省市縣區不一致，有些市區縣甚至提出提前兩三年建成小康社會，這意味著脫貧攻堅任務也要提前，兜底工作如果嚴格按照中央脫貧時間節點實現“兩線合一”，極易引發新的社會矛盾。

以寧夏枸杞來說，平均每100 g枸杞中含有粗蛋白4.5 g、粗脂肪2.3 g、碳水化合物9.1 g、類胡蘿卜素0.096 g等，同時還含有多種氨基酸，微生物，鈣、鉀等微量元素

。枸杞酸也是唯一一種從天然資源提取的穩定維生素C前體

。2004年，日本學者Toyoda-Ono等從寧夏枸杞和北方枸杞的干果中分離純化得到枸杞酸，即2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸。枸杞酸是枸杞特有的天然成分，是從天然資源中發現的一種新型、穩定、純天然L-抗壞血酸(維生素C)前體物質。研究表明，枸杞中的枸杞酸含量可以和新鮮檸檬中的維生素C含量相媲美，且抗氧化能力相比抗壞血酸更持久，能夠長時間存在于體內發揮抗氧化活性，具有更高效的清除自由基能力，有效抑制黑色素的生成

。枸杞酸在抗衰老、抗腫瘤和改善結腸炎等方面也發揮了藥理作用

，其顯著增強了秀麗隱桿線蟲中SOD和CAT等抗氧化酶的活性，同時顯著降低了脂褐質水平并減輕了蛋白質毒性

。目前，枸杞中枸杞酸測定方法研究較少，對枸杞酸在枸杞子中含量分布也研究不多。因此，本研究通過分析枸杞子中枸杞酸的檢測方法，并檢測不同批次中枸杞酸的含量，為枸杞子的質量評價提供了科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

枸杞，均為市售品；枸杞酸對照品(含量按99.7%計)，上海詩丹德標準技術服務有限公司；乙腈(色譜純)，上海安譜實驗科技有限公司；乙酸銨(分析純)，國藥試劑；水為本實驗室自制超純水。

1.2 儀器與設備

Agilent1290高效液相色譜(帶Chemstation色譜工作站)，美國安捷倫科技有限公司；島津十萬分之一電子天平，日本島津公司；ELGA純水機，英國埃爾格公司；超聲機，寧波新芝生物科技股份有限公司；Fresco-21常溫離心機，美國賽默飛世爾科技公司。

1.3 方法

1.3.3 供試藥材溶液的制備 取粉碎后的枸杞樣品粉末約1 g，精密稱定，加水25 mL，稱定重量，超聲處理25 min，冷卻至室溫，加水補足減失的重量，搖勻，濾過，精密移取續濾液1 mL，至10 mL量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，作為供試品溶液。

（1）DPPH·自由基清除能力測定參考等SLin的方法[28]。谷光甘肽作為標準品，繪制標準曲線回歸方程 為 ：y=0.301x+0.203（0.301～1.81 mg/mL，R 2=0.996）；y為DPPH自由基清除率，x為谷光甘肽濃度。

取枸杞酸標準溶液，每隔0、1、2、4、8、12、24 h進樣1次，每次1 μL，測得枸杞酸峰面積RSD為0.55%，表明枸杞酸對照品溶液在放置24 h內穩定。

取枸杞酸標準溶液，連續進樣6次，每次1 μL，測得枸杞酸峰面積RSD為0.18%，表明儀器的精密度好。

1.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取枸杞酸對照品14.01 mg置于25 mL容量瓶中，加流動相液稀釋至刻度，搖勻，得枸杞酸標準貯備液濃度為0.560 4 mg/mL。

1.3.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC Glycan BEH Amide Column 130A(2.1×150，1.7μm)。流動相：乙腈(A)，0.05 mol/L乙酸銨溶液(B)；0～10 min 78%A～65%A；10～12 min 65%A～55%A；12～15 min 55%A。體積流量為0.30 mL/min，檢測波長為260 nm，柱溫25 ℃。

2 結果與分析

2.1 線性范圍的考察

精密量取枸杞酸對照品標準貯備液適量，用流動相分別稀釋成濃度為5.6、28.0、56.0、140.1、280.2 μg/mL的5個工作液，按照上述色譜條件分別進樣1 μL，測定。以峰面積值(

)為縱坐標、對照品進樣量(

)為橫坐標繪制標準曲線，枸杞酸的回歸方程為：

=6.832 0

-0.283 7(

=1.000 0)，枸杞酸在5.6～280.2 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.2 精密度試驗

氣缸處于收縮狀態時（見圖1a），扭簧作用下4桿機構處于內收狀態，活動窗扇重疊與固定窗扇內側，有效降低空氣阻力對活動扇頁及聯動機構的沖擊。此時車窗凈開度不為220mm。

2.3 穩定性試驗

管理者樂觀情緒、研發支出與企業成長性..................................................................................................................江新峰 張敦力 汪曉飛（22）

2.4 重現性試驗

精密稱取同一批次枸杞樣品粉末6份，按上述供試品制備方法制得供試品溶液，按色譜條件檢測，進樣量為1 μL，計算枸杞酸的含量，枸杞酸含量平均值為97.5 mg/g，RSD為1.32%。

2.5 加樣回收率試驗

取已知含量的枸杞樣品粉末9份，精密稱定，分別準確加入枸杞酸80%、100%、120%各3份，按上述供試品制備方法制得供試品溶液，按色譜條件檢測，進樣量為2 μL，測得枸杞酸加樣回收率為94.5%，RSD為1.63%。

2.6 不同產地的枸杞酸的含量測定

取市售不同產地的枸杞樣品，按上述供試品制備方法制得供試品溶液，按色譜條件檢測，進樣量為1 μL，樣品進樣2次，測定枸杞酸的含量，典型供試品與標準品圖譜見附圖，不同產地分析結果見附表。

3 結論與討論

采用超高效液相色譜法對4個主要產地、8種不同批次枸杞中的枸杞酸含量進行測定，結果表明，枸杞中枸杞酸的含量變化差異大，這種差異在不同產地之間均存在，可能與種類及種植過程有較大的關系。整體而言，寧夏產的枸杞酸含量較其他產地高，但是批次間差異也較大。本研究通過方法學驗證，證明該方法有較好的線性、精密度和回收率，與前期研究方法相比

，受枸杞中其他類物質干擾較少，分離度較好，具有很好的準確性，可作為枸杞中枸杞酸的質量控制方法。

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