GADA、IA-2A、ZnT8A聯合IGRPA檢測在1型糖尿病診斷中應用研究

呂宏培

大慶龍南醫院（齊齊哈爾醫學院第五附屬醫院）檢驗科，黑龍江大慶 163453

糖尿病在臨床的發病率較高，且近年因人們的生活結構與飲食習慣的不斷轉變，促使該病的發生率呈逐年上漲趨勢[1-2]。1型糖尿病（type 1 diabetes,T1DM）為糖尿病的常見類型，T1DM是因胰島素的合成與分泌減少所致[3-4]。T1DM是由于自身免疫介導的β細胞破壞，T1DM體內在出現相關癥狀前，存在多種自身抗體，如谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）、蛋白質酪氨酸磷酸酶抗體（IA-2A）、鋅轉運體8抗體（ZnT8A）聯合胰島特異的葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基相關蛋白抗體（IGRPA）[5-6]。但臨床關于四者聯合檢測T1DM的研究報道較為罕見。基于此，本研究選取2019年6月—2021年6月大慶龍南醫院收治的43例T1DM患者、以及同期于本院行正常體檢的48名健康體檢者為研究對象，分析四種抗體聯合檢測T1DM的效果。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的43例T1DM患者納為T1DM組，同期于本院行正常體檢的48名健康體檢者為健康對照組。健康對照組男25名，女23名；年齡52～76歲，平均（62.89±2.07）歲。T1DM組男27例，女16例；年齡53～77歲，平均（62.86±2.13）歲。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。具有可比性。本研究經本院醫學倫理委員會批準（倫理審批號K201904）。

1.2 納入與排除標準

納入標準：T1DM經實驗室相關檢查證實；健康對照組體檢者均無重大疾病；所有研究對象納入均遵循自愿原則，依從性較高，且簽署知情同意書。排除標準：存在精神疾患者；存有惡性腫瘤者；合并凝血功能異常者；存在酒精、藥物依賴史者；合并嚴重的腦器質性疾病者；存在免疫系統病癥者。

1.3 方法

標本采集：采集兩組清晨空腹5 mL靜脈血于無菌容器內，以3 000 r/min的速率，離心10 min，獲取血清后留存待檢。檢測方法：采用自動酶標洗板機（深圳中科優瑞醫療科技有限公司，型號：UR-670，批準文號：粵食藥監械(準)字2012第2400986號）與自動化酶免分析儀（HAMILTON公司，型號：194000，批準文號：20182402018）測定GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA；首先分別以碳酸鹽緩沖液溶解GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA抗原，包被酶聯板，于4℃環境下過夜；次日以1%牛血清白蛋白室溫封閉6 h，干燥備用；將待測血清稀釋20倍后，于37℃環境下孵育30 min后洗版5次，加入辣根過氧化物酶標記的抗人IgG，37℃孵育20 min，洗版5次，加入顯色劑A、B后37℃避光孵育10 min，讀取450 nm處吸光度（A）值，cutoff值為0.2，如若測定值在0.2之上則為陽性，反之為陰性。

1.4 觀察指標

①兩組谷氨酸脫羧酶抗體（glutamic acid decarboxylase antibody,GADA）、蛋白質酪氨酸磷酸酶抗體（protein tyrosine phosphatase antibody,IA-2A）、鋅轉運體8抗體（zinc transporter 8 antibody,ZnT8A）與胰島特異的葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基相關蛋白抗體（islet-specific glucose-6-phosphatase catalytic subunit-related protein autoantibody,IGRPA）檢測結果。②繪制受試者相關曲線（receiver operating characteristic curve,ROC），分析GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨及聯合檢測T1DM的診斷效能。

1.5 統計方法

采用SPSS 20.0統計學軟件處理數據，符合正態分布的計量資料用（±s）表示，進行t檢驗；計數資料用[n(%)]表示，進行χ2檢驗；繪制ROC，以曲線下面積（AUC）評估，AUC≤0.5表明無診斷價值；0.5＜AUC≤0.7表明診斷價值較低；0.7＜AUC≤0.9表明診斷價值中等；AUC＞0.9則表明診斷價值較高；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA檢測陽性結果比較

T1DM組的GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA陽性率均高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA檢測陽性結果對比［n（%）］

2.2 GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨及聯合檢測T1DM的診斷效能比較

ROC曲線顯示：四種抗體聯合檢測的AUC為0.900（95%CI：0.828～0.972），高于四種抗體單獨檢測。見表2、圖1。

圖1 GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨以及聯合檢測T1DM的ROC圖

表2 GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨以及聯合檢測T1DM的診斷效能

3 討論

糖尿病在臨床的患病率處于較高水平，且近年受人們飲食習慣、生活結構等因素的影響，促使該病的患病率逐年上漲，進而促使T1DM的患病率亦隨之上漲[7]。因T1DM患者早期無明顯特異性癥狀，從而造成臨床的早期診斷率較低[8-9]。相關研究表明，T1DM患者出現臨床癥狀前的免疫破壞時期，其血清內多出現多種抗胰島細胞自身抗體[10]。通過對此種抗體進行早期的檢測，能夠有效檢出T1DM，從而可指導臨床施行針對性的治療，及時控制患者病情，延長其生存周期。

GADA是破壞胰島細胞，引起T1DM的關鍵抗原，其在T1DM早期出現，持續時間最長，屬最具特異性的自身抗體[11-12]。IA-2A表達于正常人腦、垂體、胰腺與腦力組織，其主要在腦以及胰島組織內表達[13-14]。IA-2A廣泛存在于55%～75%T1DM新發患者，為胰島素依賴性T1DM相關自身抗體檢測的主要靶標之一[15]。ZnT8A對胰島β細胞存在高度的特異性，其可能是T1DM得到一種重要標志物，為現階段所用診斷試劑的重要補充[16-17]。IGRPA是表達于胰島β細胞之中得到胰島特異蛋白質，其較少表達于α細胞。本研究結果顯示，T1DM組的GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA陽性 率[65.12%（28/43）、46.51%（20/43）、79.07%（34/43）、76.74%（33/42）]均高于健康對照組（P＜0.05）。董倩等[18]研究顯示，1型糖尿病組的GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA陽性檢出率[53.33%（24/45/）、28.89%（13/45/）、71.11%（32/45）、77.78%（35/45）]均高于正常對照組，與本研究結果類似。由此充分的提示，在T1DM患者機體內，上述四種抗體均呈現出過高的陽性表達。本研究ROC曲線顯示：四種抗體聯合檢測的AUC為0.900（95%CI：0.828～0.972），顯著高于四種抗體單獨檢測，由此表明，四種抗體聯合檢測可更精準的檢出T1DM，從而能夠更精準地指導臨床施行個體化治療，以此在早期及時的對患者治療，最大程度地確保患者的身心健康。

綜上所述，GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA四種抗體在T1DM患者機體內呈現出過高的陽性表達，四種抗體聯合可明顯提高檢出精準率。