兩種細(xì)菌鑒定法在臨床血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果對(duì)比探討

張玉啟

臨沂市蘭山區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東臨沂 276000

細(xì)菌感染是目前臨床最為多見(jiàn)的病癥之一，一旦發(fā)生細(xì)菌感染可對(duì)患者的身體健康造成較大的影響，若不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)并采取針對(duì)性的治療措施甚至?xí){到患者的生命安全，敗血癥及菌血癥都是臨床常見(jiàn)的細(xì)菌感染類型[1]。在治療前進(jìn)行細(xì)菌鑒定是鑒別細(xì)菌類型的重要方法，通過(guò)細(xì)菌鑒定將未知的細(xì)菌與已知相似細(xì)菌進(jìn)行鑒定、區(qū)分，對(duì)后續(xù)制定治療方案和改善預(yù)后均有非常重要的指導(dǎo)意義和參考作用[2]。目前臨床細(xì)菌鑒定主要采用的方法有核酸檢測(cè)法、自動(dòng)化儀器鑒定法及生化檢驗(yàn)鑒定法等[3]。敗血癥及菌血癥的病死風(fēng)險(xiǎn)均極高，對(duì)此類患者進(jìn)行菌種的鑒定及進(jìn)行藥敏試驗(yàn)都非常重要[4]。近幾年我國(guó)在抗生素的使用方面雖然已經(jīng)加大管控力度，但抗生素濫用的現(xiàn)象仍然比較普遍，這一現(xiàn)象直接影響細(xì)菌的耐藥性及敏感性，也無(wú)疑給臨床的有效治療增加非常大的困難[5]。在治療前選擇一種高效的細(xì)菌鑒定方法并根據(jù)這一結(jié)果指導(dǎo)用藥對(duì)提高治療效果非常重要。當(dāng)下主要采取的藥敏試驗(yàn)有常規(guī)藥敏試驗(yàn)和直接藥敏試驗(yàn)兩種[6]，本研究選擇2019年1月—2020年1月臨沂市蘭山區(qū)人民醫(yī)院收治的患者96例，目的即在于進(jìn)一步討論這兩種檢驗(yàn)方法在臨床實(shí)際工作中的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究共納入研究對(duì)象96例，均為此時(shí)間段內(nèi)在本院接受治療并進(jìn)行血液細(xì)菌檢驗(yàn)的患者，年齡23～70歲，平均（46.42±6.19）歲；男52例，女44例；體質(zhì)量44～81 kg，平均（62.29±10.31）kg；病程2～11 d，平均（6.14±1.12）d。本研究已提前向本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)申請(qǐng)并獲得批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)本研究?jī)?nèi)容及研究目的均知情并自愿加入。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重精神障礙無(wú)法配合完成研究者；已知患有血液疾病者。

1.3 方法

所有研究對(duì)象在進(jìn)行血液樣本采集前2 d均未使用任何藥物，避免因藥物因素導(dǎo)致血液樣本檢驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。均抽取晨間空腹?fàn)顟B(tài)下的肘靜脈血，且采血時(shí)均采集患者左側(cè)肘靜脈血。共計(jì)采集血液樣本40 mL并分成2份，血液樣本采集后需冷藏保存并轉(zhuǎn)送致檢驗(yàn)所，其中一份利用直接藥敏試驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)，另一份利用常規(guī)藥敏試驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)。

①直接藥敏試驗(yàn)：將收集到的血液樣本利用BACTEC 9240檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)和檢驗(yàn)，當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果提示為陽(yáng)性時(shí)需提取血液樣本10 mL，并注入無(wú)菌試管中利用離心機(jī)以1 600 r/min的速度進(jìn)行離心處理6 min，離心后取上層清液并對(duì)此清液再次以2 900 r/min的速度進(jìn)行離心處理13 min，將上層清液清除后使用生理鹽水對(duì)剩余的液體進(jìn)行洗滌，共計(jì)洗滌2次，進(jìn)行沉瀉和重懸[7]。最終將所獲得到液體進(jìn)行革蘭染色并將其均勻地涂抹在載玻片上并在顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)樣本形狀為鏈狀時(shí)則可判斷為革蘭陽(yáng)性球菌[8]，對(duì)樣本進(jìn)行利用5%羊血平板+MH法進(jìn)行初級(jí)藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇恰當(dāng)?shù)拿福瑢⒕簼舛日{(diào)節(jié)到6×108cfu/L后將其接種到藥敏綜合板上并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)和細(xì)菌鑒定[9]。

②常規(guī)藥敏試驗(yàn)：將血液樣本接種在麥康凱平板或是血平板上進(jìn)行16～28 h的孵育，孵育時(shí)溫度應(yīng)保持在35℃，利用革蘭鏡檢法觀察孵育得到的菌落涂片，根據(jù)試驗(yàn)得到的結(jié)果選擇恰當(dāng)?shù)拿冈囼?yàn)法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)和細(xì)菌鑒定[10]。

1.4 觀察指標(biāo)

以細(xì)菌培養(yǎng)作為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比直接藥敏試驗(yàn)法和常規(guī)藥敏試驗(yàn)法的檢驗(yàn)合格率。記錄并比較兩種檢驗(yàn)方法所用時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

將研究所得結(jié)果均錄入Excel表格中建立數(shù)據(jù)庫(kù)，數(shù)據(jù)分析利用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以(±s)表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)或率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 直接藥敏試驗(yàn)法和常規(guī)藥敏試驗(yàn)法的檢驗(yàn)合格率對(duì)比

本研究共計(jì)納入血液樣本96例，通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)及檢驗(yàn)共檢出陽(yáng)性樣本88例，利用直接藥敏試驗(yàn)檢出88例，檢出符合率為100.00%，利用常規(guī)藥敏試驗(yàn)檢出86例，檢出符合率為97.73%。兩種檢驗(yàn)方法檢出符合率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.023，P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 直接藥敏試驗(yàn)法和常規(guī)藥敏試驗(yàn)法的檢驗(yàn)合格率對(duì)比

2.2 直接藥敏試驗(yàn)法和常規(guī)藥敏試驗(yàn)法在檢驗(yàn)所耗費(fèi)時(shí)間比較

常規(guī)藥敏試驗(yàn)法獲得檢驗(yàn)結(jié)果平均所用時(shí)間為（71.33±8.84）h，直接藥敏試驗(yàn)法獲得檢驗(yàn)結(jié)果平均所用時(shí)間為（9.86±2.58）h，得出采取直接藥敏試驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)所用的時(shí)間更少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=65.402，P＜0.001）。

3 討論

抗生素即為抗菌素，是由真菌及細(xì)菌等產(chǎn)生的可以抑制或殺死其他真菌及細(xì)菌的一類物質(zhì)。目前按照作用劃分可將其分為4大類，第1類為通過(guò)阻止細(xì)胞膜合成達(dá)到抑菌效果的藥物，比如青霉素類藥物；第2類為抑制和干擾細(xì)菌等蛋白質(zhì)合成的藥物，比如四環(huán)素類藥物；第3類為對(duì)細(xì)菌等核酸代謝產(chǎn)生抑制和干擾作用的藥物，比如利福霉素等藥物；第4類藥物可以對(duì)細(xì)菌等細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞作用，比如多黏菌素類藥物[11-12]。使用抗生素類藥物時(shí)應(yīng)注意分辨其適應(yīng)證，明確感染菌種，同時(shí)還需要做到按療程足量使用才能達(dá)到預(yù)期的效果。近幾十年，抗生素類藥物的種類不斷增多，且臨床在治療各類疾病時(shí)對(duì)抗生素的使用情況也越來(lái)越頻繁，加之對(duì)抗生素類藥物使用方面的監(jiān)督力度不大，通過(guò)藥店等渠道均可購(gòu)得廣譜抗生素，因此抗生素濫用的情況非常普遍。而抗生素濫用導(dǎo)致的直接后果就是病菌的耐藥性增強(qiáng)，其藥物敏感性下降，直接影響治療效果，增加治療的難度，同時(shí)也增加患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[13]。及時(shí)對(duì)病原菌類型進(jìn)行鑒別并針對(duì)病原菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)對(duì)指導(dǎo)用藥、提高療效、提高用藥安全性均有著非常重要的意義。

目前臨床在進(jìn)行血液細(xì)菌檢驗(yàn)時(shí)主要用的方法即為直接藥敏試驗(yàn)及常規(guī)藥敏試驗(yàn)兩種，通過(guò)這兩種藥敏試驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)病原菌對(duì)相應(yīng)抗生素的耐藥性及敏感性[14]。近幾年隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的飛速發(fā)展，直接藥敏試驗(yàn)也在臨床得到廣泛的認(rèn)可和應(yīng)用。大量實(shí)踐證實(shí)直接藥敏試驗(yàn)具有用時(shí)短、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，該檢驗(yàn)方法主是直接將陽(yáng)性血液樣本接種在平板上，將相對(duì)應(yīng)的抗生素藥敏貼紙附在其上直接進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，省掉常規(guī)藥敏試驗(yàn)中提前進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)所耗費(fèi)的時(shí)間[15]，檢驗(yàn)的速度及效率則得以提升。臨床醫(yī)師可以及時(shí)依照檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相處的處置。常規(guī)藥敏試驗(yàn)則是依據(jù)抑菌環(huán)直徑及抗生素的抑菌濃度之間的負(fù)相關(guān)關(guān)系進(jìn)行判斷，是一種定性試驗(yàn)[16]。它的不足之處在于對(duì)檢驗(yàn)的條件要求非常苛刻，且檢驗(yàn)所耗時(shí)間也較長(zhǎng)，一般情況下需要2～3 d才能獲得檢驗(yàn)結(jié)果，對(duì)患者的及時(shí)治療則缺乏時(shí)效性，在檢驗(yàn)沒(méi)有得到結(jié)論前臨床醫(yī)師只能根據(jù)自己既往的工作經(jīng)驗(yàn)對(duì)患者用藥[17]，這樣則可能出現(xiàn)藥效不理想的情況，甚至可能導(dǎo)致病情惡化、延誤治療，也可能引發(fā)醫(yī)療糾紛。

從本研究結(jié)果可以見(jiàn)到，參與研究的96例患者的血液樣本經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)共計(jì)檢出陽(yáng)性樣本88例，采用直接藥敏試驗(yàn)的檢驗(yàn)符合率達(dá)到100.00%（88/88），采取常規(guī)藥敏試驗(yàn)的檢驗(yàn)符合率為97.73%（86/88），兩者在符合率方面相近（P＞0.05），這一結(jié)論與胡紅霞等[18]研究結(jié)果比較一致，其研究中共計(jì)納入100例研究對(duì)象的血液樣本并分別進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)和常規(guī)藥敏試驗(yàn)，通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性樣本90份，以此作為金標(biāo)準(zhǔn)，直接藥敏試驗(yàn)的檢出符合率為100.0%（90/90），常規(guī)藥敏試驗(yàn)的檢出符合率為91.1%（82/90），兩種檢驗(yàn)方式的符合率相近（P＞0.05），進(jìn)一步證實(shí)直接藥敏試驗(yàn)和常規(guī)藥敏試驗(yàn)均可以得到比較準(zhǔn)確的結(jié)論，但從兩種藥敏試驗(yàn)所需耗費(fèi)的時(shí)間上對(duì)比可見(jiàn)，本研究中直接藥敏試驗(yàn)平均所耗時(shí)間僅為（9.86±2.58）h，而常規(guī)藥敏試驗(yàn)平均所耗時(shí)間則長(zhǎng)達(dá)（71.33±8.84）h，可見(jiàn)相比較而言直接藥敏試驗(yàn)所花費(fèi)的時(shí)間更少，因此其臨床利用價(jià)值也更高。

綜上所述，每一種細(xì)菌對(duì)不同種抗生素的敏感性及耐藥性上均有一定的差異，在臨床進(jìn)行診治前對(duì)細(xì)菌的種類及其耐藥情況進(jìn)行鑒別非常重要，在血液細(xì)菌檢驗(yàn)中不論是采取直接藥敏試驗(yàn)還是采取常規(guī)藥敏試驗(yàn)都可以獲得較為準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果，均可以為臨床制定合理的治療方案、提高治療有效率、降低不合理用藥率和并發(fā)癥發(fā)生率提供比較準(zhǔn)確的試驗(yàn)依據(jù)，但相比較而言直接藥敏試驗(yàn)的時(shí)效性更好，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。