慢性免疫性血小板減少癥患兒機體免疫功能變化情況研究

張 晴，高長俊，李 旭，任 蓉，韓 靜

（唐山市婦幼保健院小兒血液科，河北 唐山 063003）

慢性免疫性血小板減少癥患兒臨床主要表現為血小板（PLT）水平反復降低、自發性皮膚和黏膜出血且出血時間較長、血塊收縮不良等，容易合并感染或其他并發癥，對患兒生活質量和生命安全造成嚴重威脅[1]。臨床認為慢性免疫性血小板減少癥發病可能與患兒機體免疫功能異常，導致抗PLT抗體大量產生引起PLT降低有關[2]。體液免疫、細胞免疫及T細胞相關因子水平是機體免疫系統重要組成部分，其相關指標水平失衡可導致機體免疫功能異常，可能與慢性免疫性血小板減少癥的發生有關[3-4]。本研究通過分析慢性免疫性血小板減少癥患兒體液免疫、細胞免疫及T細胞相關因子水平變化，探究慢性免疫性血小板減少癥發生的機制，以期為臨床治療慢性免疫性血小板減少癥提供參考和依據，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2019年1月－2021年2月我院收治的49例慢性免疫性血小板減少癥患兒臨床資料作為觀察組，收集同期來我院進行體檢的33例健康兒童體檢資料作為健康對照組。觀察組，男25例，女24例，平均年齡（8.35±1.11）歲，患兒外周血PLT水平（14.24±7.52）×109·L-1；健康對照組，男18例，女15例，平均年齡（8.28±1.13）歲，患兒外周血PLT水平（189.17±39.65）×109·L-1。觀察組與對照組年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05），觀察組患兒外周血PLT水平低于健康對照組（P＜0.05）。本研究獲本院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：慢性免疫性血小板減少癥診斷標準符合《臨床兒科學》[5]中的相關標準者；臨床資料完整者；年齡5～12歲。排除標準：合并先天性免疫功能障礙者；合并其他原因引起的造血功能障礙者；合并嚴重器官功能障礙者；合并惡性腫瘤者等。

1.3 方法與觀察指標

1.3.1 一般資料 根據2組臨床資料，對患兒性別、年齡、外周血PLT水平等進行統計。PLT檢測方法：抽取患兒清晨空腹靜脈血5 mL，采用流式細胞儀（CytoFLEX型，美國貝克曼庫爾特公司）檢測患兒外周PLT水平。

1.3.2 體液免疫 血液采集同1.3.1，離心收集血清，3 500 rpm，10 min，采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測患兒血清免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、補體C3、補體C4水平。

1.3.3 細胞免疫 血液采集同1.3.1，采用流式細胞儀檢測患兒外周血自然殺傷細胞（NK）、調節性T細胞（Treg）、B細胞、CD3+、CD4+、CD8+水平，并計算CD4+/CD8+。

1.3.4 T淋巴細胞相關因子 血清制備同1.3.2，采用ELISA檢測患兒血清白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、腫瘤壞死因子（TNF）、干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-17A（IL-17A）水平。

1.4 統計學方法

使用SPSS 22.0進行數據分析，計量資料使用均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗進行比較。計數資料使用例（%）表示，χ2檢驗進行比較。以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 2組體液免疫比較

見表1。

表1 2組體液免疫比較（±s） g·L-1

表1 2組體液免疫比較（±s） g·L-1

注：與健康對照組比較，# P＜0.05

組別 例數 IgG IgA IgM 補體C3 補體C4觀察組 49 16.61±8.28# 1.12±0.61 1.16±0.47 1.09±0.29 0.23±0.11健康對照組 33 9.66±3.19 0.98±0.26 1.14±0.38 1.17±0.33 0.25±0.08

2.2 2組細胞免疫比較

見表2。

表2 2組細胞免疫比較（±s）

表2 2組細胞免疫比較（±s）

注：與健康對照組比較，# P＜0.05

組別 例數 NK細胞/% Treg細胞/% B細胞/% CD3+/% CD4+/% CD8+/% CD4+/CD8+觀察組 49 9.21±4.86# 4.23±1.68# 8.86±5.62# 72.22±8.26# 31.82±8.22# 33.62±4.62 0.95±0.31#健康對照組 33 13.26±5.63 5.26±0.83 4.39±1.82 76.12±8.26 39.26±6.28 32.22±4.25 1.22±0.33

2.3 2組T淋巴細胞相關因子比較

見表3。

表3 2組T淋巴細胞相關因子比較（±s） ng·L-1

表3 2組T淋巴細胞相關因子比較（±s） ng·L-1

注：與健康對照組比較，# P＜0.05

組別 例數 IL-6 IL-10 TNF IFN-γ IL-17A觀察組 49 7.21±6.35 1.81±1.26# 3.26±2.61 5.59±4.22 10.26±7.26#健康對照組 33 5.33±4.39 4.56±2.33 2.57±0.37 4.92±4.62 2.97±1.04

3 討論

慢性免疫性血小板減少癥主要發生于2～5歲兒童，是一種常見的獲得性自身免疫性出血性疾病[6-8]，可引發患兒重要臟器及顱內出血，甚至導致患兒死亡[9]，研究[10]發現，重癥慢性免疫性血小板減少癥患兒年病死率為1%～3%。慢性免疫性血小板減少癥的發生與機體體液免疫和細胞免疫異常引起的PLT破壞增多或生成減少有關。本研究結果顯示，觀察組外周血PLT水平低于健康對照組，說明與健康兒童相比，慢性免疫性血小板減少癥患兒機體PLT水平顯著降低，與研究[11]結果一致。

本研究結果顯示，觀察組血清IgG水平及外周血B細胞水平高于健康對照組，而外周血NK細胞、Treg細胞、CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+低于健康對照組，說明慢性免疫性血小板減少癥患兒存在體液免疫和細胞免疫異常。B細胞可合成分泌抗PLT抗體IgG與PLT表面糖蛋白結合而促進PLT裂解，可通過調節補體的細胞毒作用等方式溶解PLT，導致慢性免疫性血小板減少癥患兒機體PLT水平降低[12]。Treg細胞可通過合成免疫抑制因子導致機體免疫抑制發生，可通過分泌細胞表面免疫抑制分子、顆粒酶、穿孔素等使得效應T淋巴細胞失活，導致機體免疫功能異常，促進PLT被免疫西包或免疫因子破壞，此外，其還可與CD4+競爭抗原呈遞細胞的結合位點進一步影響機體免疫功能[13-14]。CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+是重要的T淋巴細胞亞群[15-17]，其水平變化受Treg細胞及體液免疫的多重影響，水平降低可引起機體免疫功能異常，導致患兒PLT水平降低；NK細胞作為人體固有的免疫細胞，對機體體液免疫和細胞免疫均有較好的調節作用，可在一定程度上緩解體液免疫和細胞免疫異常引起的PLT水平降低[18-20]。

T淋巴細胞相關因子IL-10、TNF、IFN-7、IL-17A與機體免疫功能異常的發生密切相關。本研究結果顯示，觀察組血清IL-10水平低于健康對照組，血清IL-17A水平高于健康對照組，說明IL-10、IL-17A與患兒慢性免疫性血小板減少癥的發生密切相關[21-23]。IL-17A主要來自Th17細胞[24-25]，其參與了樹突狀細胞、中性粒細胞的增殖分化過程，促進固有免疫和獲得性免疫之間的聯系加強，介導炎性細胞對局部的浸潤及組織損傷，對機體免疫功能異常引起的PLT水平降低具有促進作用[26]。IL-10可抑制單核巨噬細胞釋放炎癥介質，促進抗炎性因子釋放，并具有抑制單核巨噬細胞活性的功能，增強機體細胞的免疫耐受功能，在緩解PLT水平降低方面具有一定作用效果[27]。研究[28]結果顯示，慢性免疫性血小板減少癥患兒經治療后血清IL-10水平顯著升高，進一步說明IL-10具有降低機體PLT損傷的作用。

綜上所述，慢性免疫性血小板減少癥患兒機體存在體液免疫、細胞免疫及T淋巴細胞相關因子水平異常，這可能與慢性免疫性血小板減少癥的發病有關。本研究納入的病例數較少，使得部分指標檢測結果可能存在偏倚，后續可擴大病例數進一步研究慢性免疫性血小板減少癥患兒體液免疫、細胞免疫及T淋巴細胞相關因子水平變化與疾病發生的關系。