基于Wnt信號(hào)通路的中藥治療腦缺血/再灌注損傷研究進(jìn)展

廖可欣，肖愛嬌，肖移生

(江西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330004)

缺血性腦卒中(ischemic stroke, IS)好發(fā)于廣大中、老年人，其發(fā)病率、致殘率及病死率均極高，嚴(yán)重危害著人類健康，給個(gè)人、家庭、社會(huì)均帶來了沉重負(fù)擔(dān)。研究表明，導(dǎo)致IS致殘率、病死率高的主要原因是患者腦部缺血損傷后又出現(xiàn)腦血管再灌注、引發(fā)更嚴(yán)重的損傷，即發(fā)生腦缺血/再灌注損傷(cerebral ischemia-reperfusion injury, CIRI)，故救治患者IS的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一在于治療CIRI[1]。最新的《歐洲卒中組織(ESO)急性缺血性腦卒中靜脈溶栓指南(2021版)》中推薦，阿替普酶IVT進(jìn)行溶栓治療以快速恢復(fù)缺血區(qū)的血液灌注，但短期內(nèi)腦組織發(fā)生CIRI，使得腦神經(jīng)損傷進(jìn)一步加重，該機(jī)制復(fù)雜，是一個(gè)多因素、多機(jī)制參與的病理過程[2]。其中Wnt信號(hào)通路參與機(jī)體CIRI后腦部神經(jīng)的多種靶基因轉(zhuǎn)錄，與該病理機(jī)制密切相關(guān)[3]。近年，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)積極對(duì)此信號(hào)通路參與CIRI的作用機(jī)制進(jìn)行研究，同時(shí)中醫(yī)藥基于Wnt信號(hào)通路治療CIRI的報(bào)道亦不斷增加，當(dāng)前急需對(duì)其內(nèi)在聯(lián)系進(jìn)行總結(jié)。基于此，筆者從Wnt信號(hào)通路的確切機(jī)制、中藥調(diào)控Wnt信號(hào)通路治療CIRI的研究進(jìn)展等方面進(jìn)行綜述，以期為中藥治療CIRI提供理論依據(jù)，亦為深入探究CIRI的防治提供新思路。

1 Wnt信號(hào)通路機(jī)制概述

Wnt信號(hào)通路是機(jī)體重要的調(diào)控信號(hào)通路之一，可影響體內(nèi)眾多的細(xì)胞生命活動(dòng)，如調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞分裂，影響細(xì)胞生長和凋亡等；此信號(hào)通路亦涉及腫瘤、心腦血管疾病、衰老等多種疾病的病理生理與病機(jī)。Wnt信號(hào)通路主要由細(xì)胞外Wnt配體蛋白、細(xì)胞膜上受體、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控幾部分構(gòu)成，該信號(hào)中多個(gè)Wnt因子及相關(guān)配體配合Wnt蛋白共同發(fā)揮作用，在細(xì)胞內(nèi)調(diào)控目的基因轉(zhuǎn)錄[3]。Wnt信號(hào)通路可分為經(jīng)典通路和非經(jīng)典通路。

1.1 Wnt經(jīng)典信號(hào)通路Wnt經(jīng)典通路需要關(guān)鍵介導(dǎo)物β-連接蛋白(β-catenin)參與，故又稱Wnt/β-catenin信號(hào)通路。此信號(hào)通路的主要配體為Wnt3、Wnt3a等，跨膜受體主要為卷曲蛋白(Frizzled, Fz)和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6(lipoprotein receptor related proteins 5 and 6,LRP5/6)。當(dāng)受到細(xì)胞外相關(guān)因子刺激時(shí)，Wnt配體與Fz及LRP5/6結(jié)合形成復(fù)合體，該復(fù)合體可活化胞質(zhì)內(nèi)的蓬松蛋白(dishevelled, DVL)；活化的DVL可抑制由多功能激酶糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)、β-catenin、結(jié)腸腺瘤樣息肉蛋白(adenomatous polyposis coli, APC)、軸蛋白(Axin)形成的降解復(fù)合體對(duì)β-catenin的降解并促使其從降解復(fù)合體中解離，使得胞質(zhì)中β-catenin水平上升，其易進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(T cell transcription factor, TCF)/淋巴增強(qiáng)因子(lymphoid enhancer-binding factor, LEF)結(jié)合，進(jìn)而激活Wnt通路下游cyclinD1、MMP-7、Survivin、C-myc、c-Jun、CD44、COX-2等100多個(gè)靶基因的表達(dá)，發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、分化、成熟等作用[4-5]，如Fig 1。若無Wnt因子激活細(xì)胞膜表面的Fz受體，則胞質(zhì)內(nèi)降解復(fù)合體中的GSK3β能磷酸化β-catenin氨基端的絲氨酸/蘇氨酸殘基，磷酸化的β-catenin再結(jié)合到β轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)蛋白(β translucent in repeat-containing proteins, β-TRCP)上受泛素連接酶復(fù)合體的共價(jià)修飾被蛋白酶體降解，導(dǎo)致胞質(zhì)中β-catenin含量較少而無法順利進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，大大減弱了核內(nèi)靶基因的表達(dá)[6]，如Fig 1。

Fig1 Wnt canonical signaling pathway

1.2 Wnt非經(jīng)典信號(hào)通路Wnt非經(jīng)典通路中Wnt蛋白分子可以直接與Fz受體結(jié)合，可不需要LRP5/6受體參與，中游傳導(dǎo)亦不需要β-catenin參與。根據(jù)其Wnt配體及結(jié)合的受體不同和效應(yīng)不同，又可分為Wnt平面細(xì)胞極性途徑(Wnt Planar cell polarity, Wnt/PCP)和Wnt/Ca2+途徑。

Wnt/PCP途徑激活是由細(xì)胞外相關(guān)因子刺激下，Wnt配體與Fz結(jié)合后，磷酸化胞質(zhì)內(nèi)DVL，使其轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)；活化的DVL又能激活胞質(zhì)內(nèi)蓬松蛋白相關(guān)形態(tài)形成活化因子-1(dishevelled associated activator of morphogenesis-1, Daam 1)和PKA與PKC相關(guān)激酶(related to the PKA and PAC kinase, RAC)，簡稱RAC蛋白；其中Daam1激活Rho蛋白，進(jìn)一步激活Rho激酶(Rho-associated coiled-coil-forming kinases, ROCK)；另一方面，RAC蛋白可激活c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)；結(jié)果是ROCK與JNK兩條信號(hào)傳導(dǎo)激活下游目的基因轉(zhuǎn)錄，共同發(fā)揮促進(jìn)肌動(dòng)蛋白聚合和細(xì)胞骨架重排的作用，調(diào)控細(xì)胞在組織器官中的均勻分布、方向、運(yùn)動(dòng)及遷移等[7]，如Fig 2。

Wnt/Ca2+途徑啟動(dòng)是受細(xì)胞外某些因子刺激下，Wnt5a和Wnt11等Wnt配體與Fz結(jié)合后，可激活G蛋白與DVL；后兩者可共同激活磷脂酶C(phospholipase C, PLC)，PLC進(jìn)一步水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(phosphatidylinositol(4,5)-bisphosphate, PIP2) 生成肌醇三磷酸(inositol triphosphate, IP3)和二?；视?diacylglycerol, DAG)兩種第二信使分子；IP3可誘導(dǎo)Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放，DAG又可激活磷脂酶C形成正反饋，進(jìn)一步增加胞質(zhì)內(nèi)的Ca2+濃度；Ca2+觸發(fā)下游生物學(xué)效應(yīng)，如激活蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin)、Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent kinase Ⅱ) 等，它們共同活化T細(xì)胞核因子(nuclear factor of activated T-cells, NFAT) 和核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)，進(jìn)一步調(diào)控下游目的基因轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞黏連、遷移等功能[8]，如Fig 2。

Fig 2 Wnt non-canonical signaling pathway

2 中藥調(diào)控Wnt信號(hào)通路治療CIRI的研究

2.1 Wnt信號(hào)通路參與CIRI的神經(jīng)保護(hù)目前，有許多學(xué)者們關(guān)注“Wnt信號(hào)通路與神經(jīng)保護(hù)方向”的研究。文麗梅等[9]綜合分析已有研究得出，Wnt因子與Fz、LRP5/6結(jié)合后，可作為缺氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長因子的上游信號(hào)在基因水平上刺激血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，促進(jìn)腦血管發(fā)育及新小血管生長、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮屏障功能、維護(hù)血腦屏障緊密連接、維持神經(jīng)血管內(nèi)穩(wěn)態(tài)，從而激活Wnt/β-catenin通路、治療CIRI。此外，一些中樞神經(jīng)系統(tǒng)區(qū)域的神經(jīng)祖細(xì)胞也可表達(dá)Wnt配體，通過Wnt非經(jīng)典信號(hào)通路發(fā)揮作用，如Arenas[10]研究表明，Wnt1可通過影響同源蛋白1表達(dá)機(jī)制促進(jìn)中腦多巴胺能神經(jīng)元發(fā)育和中腦祖細(xì)胞增殖，Wnt3a促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化，Wnt5a促進(jìn)神經(jīng)元極性建立和軸突生長，故多種Wnt因子相互協(xié)同促進(jìn)腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化。綜合這些研究結(jié)果表明，Wnt經(jīng)典通路和非經(jīng)典通路均參與調(diào)控機(jī)體腦血管重塑、血腦屏障生成、神經(jīng)細(xì)胞增殖分化等過程，與神經(jīng)保護(hù)密切相關(guān)。

在此基礎(chǔ)上，學(xué)者們積極深入“Wnt信號(hào)通路與CIRI防治方向”的研究。CIRI病理機(jī)制較為復(fù)雜，主要存在炎性反應(yīng)、自由基損傷、細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載、氨基酸毒性作用、細(xì)胞凋亡等病理改變[11]，調(diào)控Wnt信號(hào)通路可有效糾正CIRI后的此類病理變化[3]。為此，學(xué)者們積極展開相關(guān)藥物調(diào)控Wnt信號(hào)通路治療CIRI的研究，其中包括較多的有關(guān)單味中藥及中藥復(fù)方研究。CIRI歸屬中醫(yī)“腦卒中”范疇，為本虛標(biāo)實(shí)之病癥，“本虛”為肝腎陰虛、氣血衰少，極易氣血津液運(yùn)行障礙，以致血瘀痰毒互生，故“標(biāo)實(shí)”為血瘀、痰毒，最終致使神明蒙蔽、腦絡(luò)失養(yǎng)[12]。

2.2 中藥調(diào)控Wnt信號(hào)通路治療CIRI

2.2.1單味中藥 針對(duì)CIRI本虛標(biāo)實(shí)的核心病機(jī)，中醫(yī)藥研究從補(bǔ)腎滋肝、益氣養(yǎng)陰、活血祛瘀、通經(jīng)行氣類中藥里篩選有效治療CIRI的藥物，如枸杞、山茱萸、姜黃、丹參等，均顯示出調(diào)控Wnt信號(hào)通路可治療CIRI。

枸杞具有滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)陰益精等功效，其主要活性成分枸杞多糖具有抗炎、抗氧化、抗應(yīng)激、抗細(xì)胞凋亡等作用，為有應(yīng)用前景的神經(jīng)保護(hù)劑。李杏英等[13]以10、20、40 mg·kg-1的枸杞多糖連續(xù)灌胃小鼠7 d，再采用大腦中動(dòng)脈栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)法造成小鼠CIRI，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同劑量的枸杞多糖均有抗CIRI作用，有抑制神經(jīng)元凋亡作用，且其作用呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。趙奇[14]以25 mg·kg-1·d-1的枸杞多糖腹腔注射預(yù)處理高血糖大鼠4周，再采用MCAO法造成高血糖大鼠CIRI，結(jié)果發(fā)現(xiàn)枸杞多糖能夠使CIRI的高血糖大鼠腦Wnt3a及β-catenin蛋白表達(dá)升高、GSK-3β蛋白表達(dá)下降，并使其腦梗死面積、核固縮與凋亡神經(jīng)元數(shù)量均減少，這說明枸杞多糖可激活Wnt經(jīng)典信號(hào)通路調(diào)控血糖、抗神經(jīng)元凋亡、減輕CIRI。

山茱萸具有補(bǔ)益肝腎、生津止渴等功效，其有效成分莫諾苷具有抗炎、抗氧化和抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用，長期應(yīng)用于腦血管疾病等治療。薛金龍等[15]以30、90、270 mg·kg-1的莫諾苷給CIRI模型大鼠灌胃，每天1次，連續(xù)7 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各劑量的莫諾苷均可促進(jìn)CIRI大鼠腦組織Wnt7a表達(dá)，抑制其APC表達(dá)，從而激活Wnt信號(hào)通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。Sun等[16]采用MCAO法制備CIRI模型大鼠，再以30、90、270 mg·kg-1莫諾苷連續(xù)灌胃CIRI大鼠7 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各劑量的莫諾苷均可使CIRI大鼠腦內(nèi)Wnt3a、β-catenin和T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子-4(TCF-4)的表達(dá)增加，激活下游轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)、治療CIRI。可見山茱萸有效成分莫諾苷可上調(diào)腦內(nèi)Wnt7a、Wnt3a、β-catenin表達(dá)、激活Wnt信號(hào)通路防治CIRI，這表明山茱萸具有此藥理作用。

姜黃具有活血行氣、溫經(jīng)通脈等功效，其主要有效成分為親脂性多酚類化合物姜黃素。有研究報(bào)道，姜黃素有較好的抗炎、抗氧化、抗應(yīng)激等作用，可用于防治心腦血管類疾病、神經(jīng)系統(tǒng)類疾病、糖尿病等多種疾??；其可通過多種機(jī)制抑制CIRI，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[17]。Chen等[18]運(yùn)用體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞模擬CIRI模型，發(fā)現(xiàn)500 nmol·L-1的姜黃素可提高損傷神經(jīng)干細(xì)胞的Wnt3a和β-catenin表達(dá)水平，激活Wnt經(jīng)典信號(hào)通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。Yang等[19]通過小鼠CIRI模型，發(fā)現(xiàn)50、100 mg·kg-1·d-1, i.p.的姜黃素可激活CIRI小鼠海馬神經(jīng)Wnt/β-catenin信號(hào)通路以促進(jìn)海馬神經(jīng)發(fā)生，從而減輕小鼠CIRI后的認(rèn)知功能障礙。這表明，姜黃可調(diào)控Wnt經(jīng)典信號(hào)通路防治CIRI。

丹參具有活血祛瘀、通經(jīng)行氣等功效，其主要活性物質(zhì)是丹參酮，該成分具有抗炎、抗氧化、擴(kuò)張血管改善微循環(huán)等藥理功能，臨床用于心腦血管類疾病、諸病瘀證等多種疾病的治療。Wang等[20]運(yùn)用經(jīng)冰片修飾載丹參酮IIA的新型鼻內(nèi)給藥方法，發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA能有效治療大鼠CIRI，可改善其神經(jīng)功能，減少腦梗死面積，降低腦內(nèi)MDA含量，并增強(qiáng)腦內(nèi)SOD活性。劉月秋等[21]采用MCAO法制備大鼠CIRI模型，大鼠術(shù)前給予腹腔一次性注射1 mL·kg-1的丹參酮IIA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CIRI大鼠神經(jīng)功能明顯改善，其大腦Wnt、β-catenin、cyclin D1及survivin的mRNA和蛋白表達(dá)水平均升高，TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎癥細(xì)胞因子表達(dá)明顯減少，Bax促凋亡分子表達(dá)減少，p53、Bcl-2等抗凋亡分子表達(dá)增加，這說明丹參酮可以減輕CIRI，其機(jī)制可能與其激活腦內(nèi)Wnt/β-catenin/p53信號(hào)以減輕炎癥和凋亡有關(guān)。

2.2.2中藥復(fù)方 中藥復(fù)方具有辨證施治的特點(diǎn)，針對(duì)CIRI的核心病機(jī)，多采取益氣活血、補(bǔ)滋腎肝、祛瘀化痰等措施進(jìn)行配伍組方治療CIRI。較多實(shí)驗(yàn)研究亦證實(shí)，中藥復(fù)方可調(diào)控Wnt信號(hào)通路治療CIRI，如腦絡(luò)欣通、丹龍醒腦方、益氣活血方、補(bǔ)腎生髓方、黃精丸等。

復(fù)方藥品腦絡(luò)欣通(黃芪、紅花、三七、川芎、蜈蚣、當(dāng)歸、天麻)為益氣活血的代表方之一，也有散結(jié)化濁之功效，是臨床治療缺血性中風(fēng)、中風(fēng)后遺癥的常用復(fù)方。鄧勇等[22]采用相同方法制作大鼠氣虛血瘀型CIRI模型，再以0.26 kg·L-1的腦絡(luò)欣通顆粒溶液按10 mL·kg-1劑量灌胃CIRI大鼠1、3、7 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦絡(luò)欣通組大鼠患側(cè)海馬和額頂葉皮質(zhì)Wnt3a、Wnt5a和β-Catenin表達(dá)水平升高，且隨著灌胃時(shí)間延長藥效更佳，表明腦絡(luò)欣通可通過上調(diào)Wnt經(jīng)典信號(hào)通路、可能促進(jìn)CIRI后神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化，發(fā)揮治療CIRI作用。此外，譚輝等[23]也使用相同的氣虛血瘀型CIRI大鼠，再以858 mg·kg-1劑量的腦絡(luò)欣通顆粒給予CIRI大鼠連續(xù)灌胃7 d，發(fā)現(xiàn)腦絡(luò)欣通可促進(jìn)CIRI大鼠腦組織mi RNA-124、Wnt3a、β-catenin的表達(dá)，且其Nestin和BrdU陽性細(xì)胞均增加，這表明該復(fù)方顆粒能通過影響腦組織mi RNA-124的表達(dá)而激活Wnt經(jīng)典信號(hào)通路，從而促進(jìn)CIRI的神經(jīng)再生發(fā)揮治療作用。

丹龍醒腦方(丹參、三七、地龍、石菖蒲、遠(yuǎn)志、菟絲子、淫羊藿)具有活血通絡(luò)、化痰開竅、化瘀通脈、補(bǔ)腎生髓等功效，臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，該方有抗炎、抗氧化、抗應(yīng)激、抗細(xì)胞凋亡、改善腦血管活性、刺激神經(jīng)血管單元再生等藥理作用，能較佳地治療CIRI[24]。張利美等[25]采用相同方法制備大鼠CIRI模型，再以3.7 g·kg-1、14.8 g·kg-1·d-1的丹龍醒腦方取提液給予CIRI模型大鼠灌胃治療，連續(xù)7 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組劑量的丹龍醒腦方均可升高CIRI大鼠腦內(nèi)Wnt3a與β-catenin mRNA及蛋白表達(dá)、及使BrdU陽性細(xì)胞數(shù)增多，表明該方可能通過激活Wnt經(jīng)典信號(hào)通路進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、發(fā)揮治療CIRI作用。曹澤標(biāo)等[26]采用相同的動(dòng)物模型，然后以7.4 g·kg-1·d-1的丹龍醒腦方取提液灌胃CIRI模型大鼠治療，連續(xù)7 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方可使CIRI大鼠大腦內(nèi)BrdU陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，Dsh1、Frizzled3、β-catenin的mRNA及蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)，說明丹龍醒腦方能促進(jìn)大腦特定腦區(qū)內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞增殖，其機(jī)制可能與通過上調(diào)Dsh1、Frizzled3、β-catenin的表達(dá)水平、進(jìn)而促進(jìn)Wnt信號(hào)傳遞有關(guān)。

益氣活血方(黃芪，三七，川芎，紅花)具有益氣活血之功效，可使機(jī)體氣盛且脈絡(luò)通利，以恢復(fù)腦之氣血供養(yǎng)；補(bǔ)腎生髓方(龜版膠，鹿角膠，金毛狗脊，杜仲，肉蓯蓉，懷牛膝)有補(bǔ)腎生髓之效，可使機(jī)體腎精得補(bǔ)，髓海獲濟(jì)，腦神榮養(yǎng)，則神機(jī)復(fù)靈；此兩方均為治療缺血性腦中風(fēng)、CIRI的良方。俞麗華等[27]將益氣活血方、補(bǔ)腎生髓方分別按8.54 g·kg-1、10.25 g·kg-1給兩組大鼠制備CIRI模型前30 min灌胃1次，以后每天灌胃2次，連續(xù)給藥2周，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩方均能夠降低CIRI大鼠大腦LRP5表達(dá)、升高β-Catenin蛋白表達(dá)，調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路傳導(dǎo)，促進(jìn)CIRI后大腦內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化而發(fā)揮治療CIRI作用，且兩方的治療效果無差異。

黃精丸組方精煉，由黃精與當(dāng)歸按1 ∶1經(jīng)黃酒浸泡再蜜制成丸，具有補(bǔ)腎填精、益氣養(yǎng)陰、活血化瘀等功效，曾作為宮廷秘方用于中風(fēng)防癡、抗衰防老等治療，課題組對(duì)該丸防治腦血管病、癡呆等進(jìn)行了較深入的研究。筆者分別以2、5、10 g·kg-1·d-1的黃精丸藥液給大鼠灌胃，連續(xù)30 d，再采用MCAO法造成大鼠CIRI，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)該丸對(duì)大鼠CIRI誘導(dǎo)的氧自由基、脂質(zhì)過氧化、各種炎性因子損傷具有良好的保護(hù)作用[28]。筆者再以2.5 g·kg-1·d-1的黃精丸藥液給經(jīng)D-半乳糖和岡田酸所致學(xué)習(xí)記憶障礙阿爾茲海默病(Alzheimer′s disease, AD)小鼠灌胃治療，持續(xù)4周，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該丸可使AD小鼠海馬GSK-3β活性下降，β-catenin活性升高，進(jìn)而增強(qiáng)下游CyclinD1表達(dá)，促進(jìn)目的基因轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮治療AD作用，表明黃精丸可激活機(jī)體腦內(nèi)Wnt/β-catenin信號(hào)通路，發(fā)揮重要的神經(jīng)保護(hù)功能[5、29]。筆者推進(jìn)該丸的臨床應(yīng)用研究，囑輕、中度AD患者口服黃精丸(9 g/次，2次/d)治療3個(gè)月，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該丸可使患者血清SOD及GSH-Px活性升高、MDA與IL-1β水平下降，MMSE、HDS-R、ADL等智力評(píng)分明顯升高，可改善患者癡呆癥狀，提高其生活能力及認(rèn)知功能[30]。故課題組推測(cè)，黃精丸可激活機(jī)體腦內(nèi)Wnt信號(hào)通路以治療CIRI，其在IS中具有應(yīng)用前景，值得深入探討。

3 結(jié)語與展望

綜上所述，調(diào)控腦內(nèi)Wnt經(jīng)典通路和非經(jīng)典通路均具有抑制中樞神經(jīng)炎癥、自由基及氧化損傷、細(xì)胞凋亡等作用、具有促進(jìn)腦血管新生與重塑、神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化功能，與CIRI防治等神經(jīng)保護(hù)密切相關(guān)。上述研究中具有補(bǔ)腎滋肝、益氣養(yǎng)陰、活血行氣、祛瘀化痰等功效的單味中藥及中藥復(fù)方能針對(duì)CIRI的中醫(yī)核心病機(jī)進(jìn)行治療，可激活機(jī)體大腦Wnt信號(hào)通路，發(fā)揮治療CIRI作用。CIRI的中醫(yī)補(bǔ)腎益氣、活血祛瘀措施與其現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的Wnt信號(hào)通路調(diào)控有較好契合之處。補(bǔ)腎生髓、益氣填精，則精成髓生、髓海充盈、神機(jī)復(fù)用，其現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)質(zhì)與激活Wnt信號(hào)通路后促進(jìn)機(jī)體腦血管新生與重塑、刺激腦內(nèi)特定區(qū)域神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化有著密切的相關(guān)性。CIRI后腦內(nèi)出現(xiàn)的瘀血或缺血、炎癥反應(yīng)、自由基及氧化損傷等屬于中醫(yī)的血瘀痰毒，故需活血祛瘀、化痰清毒，則氣血通暢、腦絡(luò)得榮、神明智醒，其現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)質(zhì)與激活Wnt信號(hào)通路后改善腦部血液供應(yīng)、發(fā)揮抗炎、抗自由基、抗氧化等功能有關(guān)。

到目前，盡管有較多關(guān)于中藥調(diào)控Wnt信號(hào)通路治療CIRI的研究報(bào)道，但該研究方向中依然存在一些較明顯的問題：(1)中藥里具有補(bǔ)腎滋肝、益氣養(yǎng)陰、活血祛瘀、通經(jīng)活絡(luò)等功效的單味藥或是復(fù)方藥有很多、遠(yuǎn)不止上述所及，尚有較多的類似功效中藥是否具有調(diào)控Wnt信號(hào)通路治療CIRI作用？急需展開相關(guān)研究，以論證中醫(yī)藥在防治CIRI等腦病方向前景廣闊、大有可為。(2)已有的相關(guān)研究報(bào)道主要集中在“調(diào)控Wnt經(jīng)典通路(Wnt/β-catenin)與治療CIRI”思路上，而少有“中藥調(diào)控Wnt/PCP、Wnt/Ca2+通路與治療CIRI”的研究報(bào)道。如上所述，Wnt/PCP、Wnt/Ca2+通路亦參與調(diào)控機(jī)體腦血管重塑、血腦屏障生成、神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化等，與治療CIRI密切相關(guān)，故后續(xù)學(xué)者們?cè)谏钊胩接憽爸兴幷{(diào)控Wnt經(jīng)典通路治療CIRI”的同時(shí)，也需加強(qiáng)對(duì)“中藥調(diào)控Wnt/PCP、Wnt/Ca2+通路治療CIRI”的研究。(3)已有的相關(guān)研究深度和寬度還不夠，如大部分研究主要集中在Wnt經(jīng)典通路中的Wnt3a、Wnt5a、β-Catenin等靶點(diǎn)上，對(duì)于其上游、下游的生物學(xué)變化卻鮮有探討；又如細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載、氨基酸毒性亦是CIRI的重要病理機(jī)制，而已有的相關(guān)研究缺乏相應(yīng)探討等等。(4)已有的相關(guān)研究雖然立足中藥，但大多是從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度進(jìn)行探討，缺乏現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與傳統(tǒng)中醫(yī)的有效融合研究，此亦為后續(xù)學(xué)者們努力的方向之一。(5)已有的相關(guān)研究多是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，缺乏臨床研究、臨床轉(zhuǎn)化，這表明該研究方向依然任重道遠(yuǎn)，需要有更多的學(xué)者、機(jī)構(gòu)、政策支持與參與。

課題組研究的黃精丸具有較好地神經(jīng)保護(hù)作用，其在CIRI等腦血管病防治中也顯示出應(yīng)用前景，后續(xù)應(yīng)圍繞“黃精丸調(diào)控機(jī)體腦內(nèi)Wnt信號(hào)通路治療CIRI”展開相關(guān)研究，并積極促進(jìn)相關(guān)成果臨床轉(zhuǎn)化以更好地發(fā)揮其價(jià)值。黃精丸中的黃精藥材盛產(chǎn)于江西、安徽、湖北、湖南等多個(gè)省份，可見，加強(qiáng)黃精丸的神經(jīng)保護(hù)研究與應(yīng)用，也可有力的促進(jìn)當(dāng)?shù)攸S精產(chǎn)業(yè)發(fā)展。