美洛昔康磷脂復合物過飽和自納米乳的制備及體外質量評價

王艷艷，趙文軒，賈皓月，寧婧歧，楊星鋼*（.江蘇聯合職業技術學院連云港中醫藥分院，江蘇 連云港 006；.沈陽藥科大學藥學院，沈陽 006）

美洛昔康（meloxicam，MLX）是非甾體抗炎藥（NSAIDs）之一，常用于風濕性關節炎或骨關節炎等炎癥性疾病，是環氧合酶-2（COX-2）的選擇性抑制劑，具有抗炎、鎮痛和解熱的作用。由于MLX屬于BCS Ⅱ類藥物，水溶性差，溶出速率限制了吸收而導致生物利用度過低。

自納米乳給藥系統（self-nano emulsifying drug delivery systems，SNEDDS）是由油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的各向同性且熱力學穩定的混合體系，在胃腸道的蠕動下自發形成粒徑小于100 nm的

O/W

型微乳。SNEDDS可以有效改善難溶性藥生物利用度差的問題，但是口服SNEDDS存在藥物沉淀和吸收減少的風險。過飽和自納米乳（supersaturated self-nanoemulsifying drug delivery system，S-SNEDDS）通過使用沉淀抑制劑可避免藥物沉淀，促進其吸收。磷脂復合物（phospholipid complex，PC）可提高藥物的親脂性，提高了藥物在SNEDDS的油相中的溶解度，從而增加其載藥量，同時SNEDDS在介質的自發乳化分散性能也能解決PC因黏稠的質地而不易均勻分散的問題。

目前利用沉淀抑制劑使自納米乳形成過飽和或者將PC與自納米乳體系相結合的研究均有不少報道，但將三者相結合的研究鮮有報道，因此本文考慮將三者相結合制備成美洛昔康磷脂復合物過飽和自納米乳（MLX-PC-S-SNEDDS），以期提高MLX的載藥量、溶解度和生物利用度。

1 材料

1.1 試藥

美洛昔康（MLX，純度：98%，天津希恩思奧普德科技有限公司）；油酸聚乙二醇甘油酯（Labrafil M 1944 CS）、二乙二醇單乙基醚（Transcutol HP）[嘉法獅（上海）貿易有限公司]；聚氧乙烯氫化蓖麻油（Cremophor RH40）、聚乙烯吡絡烷酮-K30（PVP K30）、聚丙烯酸樹脂L100（Eudragit L100）、共聚維酮S-630（PS-630）[巴斯夫（中國）有限公司]；大豆卵磷脂（Lecithin High Potency）（山東優索化工科技有限公司）；聚乙烯已內酰胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物（Soluplus）、聚氧乙烯35蓖麻油（Kolliphor ELP）、聚氧乙烯蓖麻油（Cremophor EL）、脂肪醇聚氧乙烯醚（AEO-9）（德國BASF公司）；棕櫚酸異丙酯（IPP）（臨沂綠森化工有限公司）；油酸（Oleic acid，天津市恒興化學試劑有限公司）；辛酸/癸酸甘油三酯（GTCC，KLK吉隆坡甲洞集團公司）；吐溫80（Tween 80，天津市恒興化學試劑有限公司）；肉豆蔻異丙酯（IPM，廣州享安精細化工有限公司）；羥丙甲纖維素E15LV（HPMC E15LV）、羥丙甲纖維素 K4M（HPMC K4M）（上海卡樂康輔料有限公司）；聚乙二醇400（PEG400，天津市光復精細化工研究所）；

β

-環糊精（

β

-CD，淄博千匯生物科技有限公司）；異丙醇（分析純）、甲醇（色譜級）（山東禹王化學試劑有限公司）。

1.2 儀器

ZRS-7G型藥物溶出度儀（天津天大天發科技有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海青浦瀘西儀器廠）；XS105型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；UV-8000 紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）；TS-100恒溫搖床（捷呈實驗儀器）；TG16MW臺式高速離心機（湖南赫西儀器裝備有限公司）；SMD200-2 電子分析天平（奧豪斯國際貿易有限公司）；PB-10 pH計（美國Sartorius公司）；Nano ZS90粒度測定儀（英國馬爾文公司）；KQ-250DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；JEM-2100透射電子顯微鏡（日本電子株式會社）；DF-101S集熱式恒溫磁力攪拌器（鞏義市予華儀器有限責任公司）。

2 方法

2.1 MLX在不同輔料中的飽和溶解度測定

稱取過量的MLX置于EP管中，分別加入2 mL各輔料，渦旋混勻，（37±0.5）℃、100 r·min恒溫振蕩72 h。達到平衡后，12 000 r·min離心10 min取上清液，用甲醇稀釋到合適倍數，過濾，用UV法在361 nm處測定MLX在不同輔料中的吸光度，計算其溶解度，平行操作3次。其中，由于Cremophor RH40在室溫下為固體，需要先將其在40℃下水浴加熱熔化后再進行試驗。

2.2 三元相圖繪制

將表面活性劑和助表面活性劑按照一定的質量比（

K

）分別為4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3進行混合，再與油相按照比例分別為1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1進行混勻，固定體系質量為1 g，緩慢滴入37℃水浴磁力攪拌下100 mL蒸餾水中，觀察其乳化狀態。以油相、表面活性劑、助表面活性劑分別為三元相圖的三個頂點，用Origin 8.0軟件繪制三元相圖。以能夠形成的微乳區域面積大小為指標，利用Image J軟件對三元相圖內乳化面積大小進行相對計算，進而確定適合的三相以及各組分比例。

2.3 星點設計聯合歸一化法綜合評定進行多指標處方優化

以Labrafil M 1944 CS 用量百分比（

X

）與表面活性劑與助表面活性劑的比例

K

（

X

）作為考察因素。效應指標分別為粒徑（

Y

）、粒徑分散系數（PDI，

Y

）與載藥量（

Y

）。采用Design Expert 10.0.7軟件進行二因素、五水平星點設計。用歸一化法對數據進行標準化處理，利用熵值法方法計算得到標準化數據和權重系數，并以綜合評分

Y

表達最終效應，并建立數學模型進行優化與預測分析，對MLX-SNEDDS處方進行優化。

2.4 沉淀抑制劑篩選

2.4.1 沉淀抑制劑種類的篩選精密稱MLXSNEDDS處方中各組分，分別加入2%的各類沉淀抑制劑，超聲攪拌使其混合均勻，形成MLXS-SNEDDS。將油狀濃縮物分別加入裝有100 mL 0.1 mol·LHCl溶液的錐形瓶中，（37±0.5）℃、100 r·min恒溫振蕩，并于5、15、30、45、60、90、120、180、240 min分別取樣1 mL，不補液，用甲醇稀釋并過濾，在361 nm處測定吸光度，計算其藥物濃度，比較加入不同的沉淀抑制劑后提高和維持藥物濃度的能力，篩選出合適的沉淀抑制劑。

2.4.2 沉淀抑制劑用量的確定 基于“2.4.1”項下試驗結果，固定其他條件不變，分別加入0.5%、1%、2%、3%的Soluplus，篩選出Soluplus的用量。

2.5 MLX-S-SNEDDS的制備及載藥量的測定

按優化后的處方比例稱取油相、表面活性劑和助表面活性劑，磁力攪拌使其混勻置于西林瓶中，得到澄明均一的空白SNEDDS。按比例精密稱取Soluplus加入到空白SNEDDS中，超聲攪拌至均勻分散，使其溶解，得到澄清透明的S-SNEDDS。將過量MLX加入S-SNEDDS，渦旋充分混勻，得MLX-S-SNEDDS。于（37±0.5）℃、100 r·min恒溫振蕩72 h后，12 000 r·min離心10 min，取上清液，用甲醇稀釋至合適倍數，過濾，361 nm處測定吸光度，計算MLX-SSNEDDS的載藥量。

2.6 MLX-PC和MLX-PC-S-SNEDDS的制備工藝研究

經測定，“2.5”項下MLX-S-SNEDDS的載藥量較低，因此考慮將其制成MLX-PC，以期提高載藥量。磷脂是體內生物膜的主要成分，將其與藥物復合形成藥物-PC，可改善藥物的溶解性和穩定性，提高生物利用度。采用溶劑蒸發法制備MLX-PC，精密稱取MLX與適量的大豆卵磷脂于四氫呋喃中，水浴磁力攪拌一定時間，采用旋轉蒸發法儀回收溶劑，真空干燥即得MLX-PC。以載藥量為評價指標，對可能影響結果的藥脂比、反應時間、反應溫度、藥物質量濃度等反應條件進行單因素考察，確定MLX-PC制備工藝。

MLX-PC-S-SNEDDS的制備及載藥量的測定同“2.6”項下方法，將制得的過量MLX-PC加入至空白S-SNEDDS中，計算MLX-PC-S-SNEDDS的載藥量。

MLX-PC油/水分配系數的測定采用經典搖瓶法，取適量MLX-PC，加入2 mL水相飽和的正辛醇，再分別加入18 mL正辛醇飽和的pH 7.4 PBS、pH 6.8 PBS、蒸餾水、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 1.2 HCl，（37±0.5）℃、100 r·min恒溫振蕩72 h，平衡后將水層和正辛醇層分離開，測定正辛醇層和水層中的MLX吸光度，計算其濃度，并與MLX的log

P

進行比較。

2.7 三種美洛昔康自納米乳遞藥系統的質量評價

2.7.1 形態與分布 分別取MLX-SNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS各1 g，將其緩慢滴入（37±0.5）℃水浴的100 mL蒸餾水中，緩慢攪拌使其完全乳化。分別取少量乳液噴灑到銅網上，自然晾干，再滴加2%濃度的磷鎢酸負染載藥銅網，用濾紙吸去多余負染色液，風干后使用JEM-2100透射電鏡觀察三種制劑的形態。

2.7.2 粒徑與Zeta電位的測定 同“2.8.1”項下方法操作，緩慢攪拌使其完全乳化。經微孔濾膜過濾（0.45 μm），馬爾文粒度分析儀測定其粒徑及Zeta電位。

2.7.3 自乳化效率 通過目測法觀察自乳化體系在不同稀釋倍數（50、100、200 mL蒸餾水）和不同種類分散介質（100 mL蒸餾水、pH 1.2 HCl、pH 7.4 PBS）中完全乳化所需的時間，測定乳化后乳液的粒徑及PDI，以作為評價制劑自乳化效率的指標。具體操作方法如下：取MLX-SNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-SSNEDDS各1 g，分別將其緩慢滴入（37±0.5）℃水浴的分散介質中，觀察成乳時間，測定并記錄其粒徑及PDI。

2.7.4 穩定性考察

① 物理穩定性試驗：分別取適量MLXSNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-SSNEDDS于5 mL離心管中，12 000 r·min離心15 min，觀察制劑外觀是否變化，是否出現分層現象。

②冷熱循環試驗：分別取適量MLXSNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-SSNEDDS于西林瓶中，密封避光貯存，每12 h將西林瓶交替放置于37℃和4℃的條件下，分別在0、1、5、10 d時取適量制劑，觀察制劑外觀是否變化，并測量其粒徑和藥物含量的變化情況。

③留樣觀察試驗：分別取適量MLXSNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-SSNEDDS于西林瓶中，常溫避光儲存，分別于0、1、3、5個月取樣觀察外觀是否變化，測量其粒徑和藥物含量的變化情況。

④ 形成自納米乳后的穩定性：同“2.7.2”項下方法操作，緩慢攪拌使其完全乳化。室溫下放置48 h，觀察24 h 及48 h 時自納米乳的狀態，是否出現油水分離，是否出現藥物析出等現象。

2.7.5 體外溶出度的考察 取一定量的MLXSNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS灌入膠囊中（相當于MLX 7.5 mg），同時取等劑量的原料藥于膠囊中用作對照，按照2020年版《中國藥典》槳法規定測定溶出度，以900 mL的pH 1.2 HCl、pH 7.4 PBS作為溶出介質，設定溫度為（37±0.5）℃，轉速為100 r·min，分別于5、15、30、45、60、90、120、180、240 min取 樣5 mL，同時用等溫同體積的相應介質進行補液，過濾（0.45 μm），取續濾液稀釋至合適濃度測定吸光度值，并計算其累積溶出百分率。

3 結果

3.1 美洛昔康在不同輔料中的溶解度

測定MLX在不同輔料中的溶解度，結果見表 1。MLX在油相油酸和Labrafil M 1944 CS中的溶解度較其他油相中高，在表面活性劑中溶解度均較好，特別是在Tween 80、Cremophor RH40、AEO-9中，助表面活性劑中，MLX在Transcutol HP、PEG400中溶解度較大。選擇對藥物溶解度較好的輔料進一步利用三元相圖來進行油相、表面活性劑、助表面活性劑的篩選。

表1 MLX在不同輔料中的溶解度
Tab 1 Solubility of MLX in different excipients

類別 輔料 溶解度/（mg·mL－1）油相 油酸 2.435±0.03 IPM 0.151±0.09 IPP 0.172±0.10 GTCC 0.244±0.12 Labrafil M 1944 CS 1.072±0.05表面活性劑 Tween 80 11.902±0.06 Cremophor EL35 4.423±0.15 Kolliphor ELP 1.274±0.06 AEO-9 7.194±0.12 Cremophor RH40 7.188±0.20助表面活性劑 PEG400 1.765±0.18 Transcutol HP 3.351±0.04 Ethanol 0.278±0.15 Isopropanol 0.215±0.12

3.2 三元相圖繪制

3.2.1 油相的篩選 選擇對藥物溶解度比較好的油酸、Labrafil M 1944 CS作為油相，固定Tween 80為表面活性劑，Transcutol HP為助表面活性劑，繪制三元相圖。由圖1可知，當油相為Labrafil M 1944 CS時，三元相圖的自乳化面積最大。

圖1 油相為油酸（A）和Labrafil M 1944CS（B）的三元相圖Fig 1 Tertiary phase diagrams of oleic acid（A）and Labrafil M 1944CS（B）

3.2.2 表面活性劑的篩選 選擇對藥物溶解度前3位的Tween 80、AEO-9、Cremophor RH40作為表面活性劑，油酸和Labrafil M 1944 CS為油相、Transcutol HP 為助表面活性劑，繪制三元相圖。由圖2可知，當表面活性劑為Cremophor RH40時，不論油相為油酸或Labrafil M 1944 CS，相較于其他表面活性劑，三元相圖的自乳化面積最大。

圖2 不同表面活性劑的三元相圖Fig 2 Ternary phase diagrams of different surfactants

3.2.3 助表面活性劑的篩選 固定Cremophor RH40為表面活性劑，油酸和Labrafil M 1944 CS為油相，以Transcutol HP、PEG400為助表面活性劑，繪制三元相圖并觀察乳化情況。由圖3可知，當油相為Labrafil M 1944 CS，表面活性劑為Cremophor RH40，助表面活性劑為Transcutol HP時，三元相圖的自乳化面積最大。因此確定最終處方為Labrafil M 1944 CS、Cremophor RH40、Transcutol HP。

圖3 不同助表面活性劑的三元相圖Fig 3 Ternary phase diagrams of different co-surfactants

3.3 星點設計聯合總評“歸一值”進行多指標處方優化

3.3.1 星點設計及結果 運用星點設計進行處方優化，考察指標的水平見表 2，根據星點設計得到的處方進行試驗，結果見表 3。

表2 星點設計的自變量水平
Tab 2 Level of independent variable in the central composite design

因素 水平－1.414 －1 0 ＋1 ＋1.414 X1 9.64 20 45 70 80.36 X2 0.38 1 2.5 4 4.62

表3 星點設計的試驗結果
Tab 3 Central composition design

No.X1 X2 Y1/nm Y2 Y3/（mg·mL－1）1 80.36 2.50 74.64 0.51 0.77 2 9.64 2.50 17.83 0.11 4.58 3 70.00 4.00 95.28 0.23 1.41 4 45.00 0.38 196.17 0.18 2.77 5 45.00 4.62 35.03 0.06 2.98 6 45.00 2.50 35.80 0.10 2.99 7 20.00 4.00 21.31 0.05 4.83 8 45.00 2.50 35.36 0.10 2.90 9 20.00 1.00 22.02 0.06 4.09 10 70.00 1.00 99.51 0.23 1.20 11 45.00 2.50 35.53 0.08 3.97 12 45.00 2.50 35.75 0.09 4.06 13 45.00 2.50 36.85 0.10 3.31

3.3.2 歸一化法綜合評定 利用歸一化法對數據進行標準化處理，使得每個指標均標準化為0～1之間的“歸一值”，對取值越小越好的因素（粒徑）和取值越大越好的因素（載藥量）采用Hassan方法分別進行數學轉換求“歸一值”

d

和

d

，公式如下：

d

＝（

Y

－

Y

）/（

Y

－

Y

）

d

＝（

Y

－

Y

）/（

Y

－

Y

）

選用熵值法對標準化后的效應指標進行權重計算。熵值是不確定性的一種度量，信息量越大，不確定性就越小，熵也就越??；信息量越小，不確定性越大，熵也越大。因而利用熵值攜帶的信息進行權重計算，結合各項指標的變異程度，利用信息熵這個工具，計算出各項指標的權重，為多指標綜合評價提供依據。

使用SPSS AU進行計算。使用熵值法對

Y

、

Y

、

Y

等3項進行權重計算，權重值分別是0.251、0.238、0.511。并且各項間的權重相對較為均勻，均在0.333附近，其中

Y

權重最大。根據上述方法計算得到的標準化數據和權重系數，星點設計各響應值最后得到綜合評分，綜合評分（

Y

）＝

Y

×權重系數（

Y

）＋

Y

×權重系數（

Y

）＋

Y

×權重系數（

Y

）。結果如表4所示。

表4 處方的綜合評分
Tab 4 Comprehensive scores of formulations

No.X1 X2 Y1/nm Y2 Y3/（mg·mL－1） Y 1 80.36 2.50 74.64 0.51 0.77 0.17 2 9.64 2.50 17.83 0.11 4.58 0.94 3 70.00 4.00 95.28 0.23 1.41 0.37 4 45.00 0.38 196.17 0.18 2.77 0.17 5 45.00 4.62 35.03 0.06 2.98 0.74 6 45.00 2.50 35.80 0.10 2.99 0.72 7 20.00 4.00 21.31 0.05 4.83 1.00 8 45.00 2.50 35.36 0.10 2.90 0.71 9 20.00 1.00 22.02 0.06 4.09 0.90 10 70.00 1.00 99.51 0.23 1.20 0.33 11 45.00 2.50 35.53 0.08 3.97 0.85 12 45.00 2.50 35.75 0.09 4.06 0.87 13 45.00 2.50 36.85 0.10 3.31 0.75

3.3.3 數據模型擬合分析及處方優化 使用Design Expert 10.0.7軟件對試驗結果與考察因素進行分析，對綜合評分（

Y

）進行二項式擬合。經擬合回歸，得到模型方程：

Y

＝0.78－0.29

X

＋0.12

X

－0.015

X

X

－0.076

X

－0.13

X

。對模型進行ANOVA分析，模型的

P

值小于0.05，這說明模型參數的顯著性檢驗通過，失擬值大于0.05，說明該方程擬合度良好。因此可表明該模型能夠準確預測自納米乳的處方最佳組成。3.3.4 處方驗證 以載藥量最大、粒徑和PDI最小為優化目標，預測的最佳處方為：Labrafil M 1944 CS 20%，Cremophor RH40 40%，Transcutol HP 40%。預測綜合評分

Y

＝0.997。按照優化后的處方制備MLX-SNEDDS，對預測處方進行驗證，綜合評分

Y

＝0.952，偏差值為－4.73%，表明所建擬合的模型具有較好的預測結果。

3.4 沉淀抑制劑篩選

3.4.1 沉淀抑制劑種類 在MLX-SNEDDS中分別加入2%不同的沉淀抑制劑，將所制得的不同MLX-S-SNEDDS加入介質中，經稀釋后形成了澄清透明，略帶微藍乳光的納米乳液體。由圖 5可知，MLX-SNEDDS中藥物的質量濃度在15 min時就迅速降到了23.41 μg·mL，加入PVP K30、

β

-CD、Eudragit L100、HPMC E15LV的制劑中MLX的濃度在15 min時都迅速沉降到20.00 μg·mL左右，因此可看出這些沉淀抑制劑對藥物沒有抑制沉淀的作用。而加入HPMC K4M、PS-630以及Soluplus的SNEDDS中MLX在60 min時的質量濃度分別為36.07、33.72、43.48 μg·mL，說明HPMC K4M、PS-630、Soluplus對MLX有不同程度的抑制沉淀作用，其中以Soluplus的效果最好。

圖5 不同沉淀抑制劑沉淀的效果Fig 5 Effect of different precipitation inhibitors on inhibition of preparation

3.4.2 沉淀抑制劑用量的確定 為了考察沉淀抑制劑的用量對抑制沉淀的作用的影響，對處方中的Soluplus用量進行進一步試驗，結果如圖6所示，Soluplus用量的變化對促過飽和作用沒有明顯差異，由于Soluplus在制劑中完全溶解所需時間較長，因此選擇0.5%的用量。

圖6 沉淀抑制劑的用量對于抑制沉淀的作用的影響Fig 6 Effect of different amounts of Soluplus on the inhibition of preparation

3.5 MLX-S-SNEDDS載藥量的測定

平均載藥量為4.82 mg·mL，與MLXSNEDDS一致，沉淀抑制劑能對納米乳中的MLX有沉淀抑制作用，但并不能增加藥物載藥量。

由于MLX每日服用量為7.5 mg，若制成膠囊，以現在的載藥量計算，則需服用約3粒500 μL的膠囊，因此應考慮提高載藥量以減少服用體積，增加順應性。考慮將MLX先制成MLX-PC，提高其脂溶性，從而提高MLX在S-SNEDDS給藥系統中的載藥量。

3.6 MLX-PC的制備工藝研究

3.6.1 單因素考察

① 藥脂比的選擇：設定藥脂比（MLX和PC的質量比）為1∶3、1∶2、1∶1、2∶1，藥物的質量濃度為4 mg·mL，在40℃條件下反應1 h，載藥量分別為7.80、7.40、6.06、5.46 mg·mL，以載藥量為評價指標，其他條件不變，藥脂比為1∶3時，載藥量最大。

② 反應時間的選擇：設定反應時間為0.5、1、1.5、2 h，藥物的質量濃度為4 mg·mL，藥脂比為1∶3，在40℃條件下反應至試驗設計的時間，載藥量分別為6.84、6.97、7.43、5.06 mg·mL，以載藥量為評價指標，其他條件不變，反應時間為1.5 h時，載藥量最大。

③ 反應溫度的選擇：設定反應溫度為25、40、50、60℃，藥物的質量濃度為4 mg·mL，藥脂比為1∶3，在各溫度條件條件下反應1.5 h，載藥量分別為7.93、8.00、8.18、7.61 mg·mL，以載藥量為評價指標，其他條件不變，反應溫度為50℃時，載藥量最大。

④ 藥物質量濃度的選擇：設定藥物質量濃度分別為4、6、8、10 mg·mL，藥脂比為1∶3，在50℃下反應1.5 h，載藥量分別為8.20、8.71、8.42、7.72 mg·mL，以載藥量為評價指標，其他條件不變，當藥物質量濃度為6 mg·mL時，載藥量最大。

3.6.2 MLX-PC-S-SNEDDS載藥量的測定MLX-PC按自納米乳的制備方法制成MLX-PC-SSNEDDS，和MLX-S-SNEDDS相比，平均載藥量從4.82 mg·mL變成了8.73 mg·mL，約提高了一倍，可以減少服用體積。

3.6.3 油/水分配系數的測定 與MLX進行對比，MLX-PC在正辛醇飽和的pH 7.4 PBS、pH 6.8 PBS、蒸餾水、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 1.2 HCl中log

P

分別由0.67、0.84、1.26、2.22、2.31增 大 到1.62、2.20、2.56、2.73、2.81，說 明 將MLX制備成MLX-PC后藥物在油相中的溶解度變大，脂溶性增加，可預期藥物在體內的吸收增加，從而提高生物利用度。

3.7 制劑質量評價

3.7.1 外觀與形態MLX-SNEDDS、MLX-SSNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS 三種制劑均為黃色透明且均一的油狀液體，其中MLX-PC-SSNEDDS顏色會更深，可能是加入了磷脂的緣故。乳化后的納米乳，乳液微粒呈類球形。

3.7.2 粒徑與Zeta電位的測定 MLX-SNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS的粒徑分別為（18.71±1.04）、（18.30±0.48）、（23.07±0.28）nm，Zeta電位分別為（－1.44±0.11）、（－5.56±0.61）、（－7.07±0.88）mV，PDI分 別為（0.086±0.03）、（0.11±0.03）、（0.132±0.03）。MLX-SNEDDS和MLX-S-SNEDDS乳化后的微粒粒徑相似，MLX-PC-S-SNEDDS粒徑則有所增大。三種制劑的Zeta電位皆為負值，絕對值依次增大。

3.7.3 穩定性考察 觀察MLX-SNEDDS、MLX-SSNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS乳化后形成的納米乳在24 h及48 h的狀態，可看出MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS到48 h時仍然是均一、澄清透明的狀態，無沉淀析出。而MLX-SNEDDS在24 h時雖然未出現油水分離現象，但已經出現略微渾濁，48 h時在燒杯底部能發現明顯沉淀物。

3.7.4 自乳化效率 稀釋倍數的影響：結果如表 5所示，不同稀釋倍數對制劑的自乳化時間以及PDI沒有顯著影響，自乳化時間均小于30 s，MLXSNEDDS與MLX-S-SNEDDS自乳化后的粒徑相差不大，而MLX-PC-S-SNEDDS的粒徑則明顯增大。

表5 不同稀釋倍數對自乳化效率的影響(＝3)
Tab 5 Effect of dilution multiple on self-emulsification efficiency(＝3)

稀釋倍數 制劑 自乳化時間/s 粒徑/nm PDI 50 MLX-SNEDDS 25.99±2.8117.44±0.360.177±0.11 MLX-S-SNEDDS 26.28±3.2317.93±0.230.086±0.01 MLX-PC-S-SNEDDS26.63±0.7427.36±0.600.151±0.02 100 MLX-SNEDDS 25.54±3.1220.33±0.450.062±0.05 MLX-S-SNEDDS 26.80±2.8117.19±0.480.112±0.03 MLX-PC-S-SNEDDS27.39±1.4629.23±0.620.159±0.03 200 MLX-SNEDDS 25.29±2.4819.93±0.090.081±0.06 MLX-S-SNEDDS 24.21±3.9319.91±0.610.108±0.07 MLX-PC-S-SNEDDS26.88±2.4427.90±0.480.132±0.07

稀釋介質的影響：不同稀釋介質下，三種制劑的自乳化時間以及粒徑分布相差不大，且自乳化時間均小于30 s，MLX-PC-S-SNEDDS乳化后的粒徑大于MLX-SNEDDS與MLX-S-SNEDDS，可能是由于藥物與磷脂形成了復合物的緣故。

3.7.5 物理穩定性試驗 MLX-SNEDDS、MLXS-SNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS經過高速離心后，未觀察到制劑有分層或者析出的現象，外觀依然是黃色透明且均一的油狀液體。

3.7.6 冷熱循環試驗 MLX-SNEDDS、MLX-SSNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS經過冷熱循環后仍然為黃色透明的均一油狀液。乳化后進行粒徑以及藥物含量的測定，結果顯示，經過冷熱循環后制劑的粒徑、PDI以及藥物含量沒有明顯變化，說明所制備的制劑有較好的穩定性，溫度變化對制劑的影響較小。

3.7.7 留樣觀察試驗 經過長期放置以后，制劑的外觀、粒徑以及PDI均無明顯變化，說明制劑經過長期放置以后，穩定性良好。

3.7.8 體外溶出度的考察 結果如圖7所示，在pH 1.2 HCl、pH 7.4 PBS介質中，三種制劑相比于MLX原藥，均明顯提高了藥物的溶出速率和溶出程度。在體外溶出結果中，三種制劑的溶出行為并沒有顯著區別，但在pH 7.4 PBS中三種制劑的累積溶出百分率大于在pH 1.2 HCl中的。這是由于MLX本身的理化性質決定的，在pH 7.4 PBS中溶解度大于pH 1.2 HCl。

圖7 三種制劑在pH 1.2 HCl（A）和pH 7.4 PBS（B）中的體外溶出曲線Fig 7 In vitro dissolution curve of the three preparations in pH 1.2 HCl（A）and pH 7.4 PBS（B）

4 討論

促過飽和物質的篩選試驗證明，對MLX起抑制沉淀作用的沉淀抑制劑有HPMC K4M、PS-630、Soluplus，HPMC可以與MLX上的羥基形成氫鍵作用，但由試驗結果可知HPMC E15LV對MLX沒有明顯的沉淀抑制作用，說明氫鍵并不是HPMC K4M抑制藥物的晶核長大的主要原因。據有關文獻報道，分子量及黏度大小對沉淀抑制劑抑制藥物沉淀的作用有關，對HPMC來說，分子量越高，黏度越大，這可能對藥物晶體的成核以及長大形成了更多的空間位阻，從而起到抑制藥物沉淀的作用，而HPMC K4M的分子量及黏度均遠大于HPMC E15LV，這可能是HPMC K4M能對MLX起到沉淀抑制作用的主要原因。

PS-630是乙烯吡咯烷酮和乙烯醋酸酯的共聚物，相比于PVP，由于加入了醋酸乙烯酯基團，PS-630增加了疏水性，而疏水性可以使PS-630能夠對藥物的晶體表面的吸附作用更強，從而達到抑制藥物沉淀的作用。這可能是PS-630相比于PVP K30具有更好的抑制沉淀作用的原因。

Soluplus是聚乙烯醇己內酰胺-聚乙烯醇-聚乙二醇接枝共聚物，其結構中既具有作為其主鏈的親水性的PEG 6000，又具有側鏈中疏水的乙酸乙烯醋與乙烯基己內酞，因此Soluplus具有兩親性，屬于一種非離子表面活性劑，可能與MLX-SSNEDDS中的起乳化作用的表面活性劑Cremophor RH40形成了混合膠束，從而抑制藥物晶體的聚集及晶核的長大，達到抑制藥物沉淀的效果。

自乳化后所形成的納米乳粒徑以及Zeta電位是影響自納米乳化體系穩定性的重要因素，且粒徑大小同時也對溶出速率有影響。可以看出三種制劑的粒徑較小，均小于30 nm，納米乳微粒分散均勻，PDI均小于0.200。粒徑越小，所形成的納米乳油水界面面積越大，乳滴粒子的表面自由能越大，這時就有降低界面自由能的趨勢，驅使小乳滴聚集形成大乳滴，通過降低比表面積來減少總油水界面面積。納米乳微粒帶電荷后，由于帶有同種電荷，乳滴間會產生靜電斥力，Zeta電位絕對值越大，則靜電斥力越強，可以阻止乳滴間的聚集引起沉降，對增強體系穩定性有很大意義。同時，根據Stokes方程，粒徑越小，沉降速度越小，越有利于自納米乳乳化后體系的穩定。此三種因素使納米乳成為動力學穩定系統。MLXSNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-S-SNEDDS乳化后的Zeta電位均為負值，絕對值依次增大。雖數值均較小，但對制劑形成自納米乳后的穩定性進行考察，發現只有MLX-SNEDDS在乳化后24 h時出現略微渾濁，48 h時在燒杯底部能發現明顯沉淀物?？赡苁怯捎谄鋃eta電位絕對值較低，乳滴間斥力不足以與降低表面自由能的趨勢相平衡，因此MLX-SNEDDS制劑穩定性不夠好。

體外溶出試驗證明在不同pH值的介質中，MLX-SNEDDS、MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-SSNEDDS均能顯著提高MLX的溶出度。在pH 7.4 PBS溶出曲線中，MLX-SNEDDS在40 min時累積溶出百分率開始下降，這可能是由于制劑在pH 7.4 PBS迅速乳化幾乎完全溶出后，乳滴粒子附近藥物濃度迅速升高，導致部分藥物結晶析出，表現為溶出度降低。MLX-SNEDDS乳化后Zeta電位絕對值僅為1.44，體系穩定性不夠，微粒容易聚集沉降，且MLX在水中幾乎不溶，可以預見在胃腸道內被大量稀釋后，表面活性劑與助表面活性劑對藥物的增溶能力大大下降，容易形成沉淀。而MLX-S-SNEDDS、MLX-PC-SSNEDDS 中加入了沉淀抑制劑，同時Soluplus的兩親性質可能對MLX有一定增溶作用，能在一定程度下維持過飽和狀態，提高了穩定性。

此外，載藥量方面相較MLX-S-SNEDDS的4.82 mg·mL，MLX-PC-S-SNEDDS載藥量為8.73 mg·mL，結合磷脂本身的性質使得藥物制成PC后容易穿過細胞膜，MLX-PC-S-SNEDDS在提高生物利用度上更有潛力。