茉莉花渣中果膠型多糖的結構特征與免疫調節作用

黃 海，楊湘，夏瑋，張文清

（華東理工大學化學與分子工程學院，上海 200237）

茉莉（）是木犀科素馨屬植物，其花朵含有豐富的揮發性香氣成分與非揮發性多糖類、黃酮類成分，茉莉花渣產生于茉莉花茶窨制后的分選過程，廢棄量較高，經過窨制后絕大多數非揮發性化合物未得到有效利用，如多糖類、黃酮類化合物等。作為主要活性成分，茉莉花渣多糖具有抗氧化、降血糖、免疫增強等生物活性。然而有關茉莉花渣多糖的研究多集中在粗多糖的提取工藝和活性評價上，結構解析、構-效關系等進一步的理論研究偏少，為茉莉花資源利用帶來局限性。

果膠或果膠型多糖是一類常見的植物來源雜多糖，是植物細胞壁的重要結構組成部分之一，主鏈通常由1,4 位連接的半乳糖醛酸和1,2 位連接的鼠李糖構成，并連有半乳糖、阿拉伯糖等構成的支鏈，其具有較強的免疫調節作用。小鼠巨噬細胞RAW264.7 在體外培養過程中，受到抗原刺激后將增強其免疫相關吞噬作用和細胞因子分泌能力，是免疫調節作用研究中常用的模型細胞。

在本研究中，通過熱水提取、透析、柱層析等方法獲得到均一的茉莉花渣果膠型多糖，并分析了其分子量、結構單元組成、連接方式等結構特征，還通過小鼠巨噬細胞模型探究了其免疫調節作用，以及結構特征與活性之間的關聯，以期為茉莉花渣的開發利用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

茉莉花渣 由昆明諾發生物技術有限公司提供；乙腈（色譜純級）、葡聚糖T 系列（分子量：5、12、50、150、270、670 kDa）和單糖標準品、3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）、脂多糖（LPS）和青霉素/鏈霉素 德國默克（Merck Sigma-Aldrich）公司；RAW264.7 細胞 來自中國科學院典型培養物保藏中心；胎牛血清（FBS）上海吉泰依科賽公司；NO 檢測試劑盒 江蘇碧云天公司；小鼠TNF-和IL-6 ELISA 試劑盒 加拿大Anogen 公司；DEAE Sepharose Fast Flow、Sephacryl S-200 HR層析填料和DMEM 培養基 美國思拓凡（Cytiva）公司；其他化學試劑 均為分析純。

RE52AA 型旋轉蒸發儀、FD80AD 型冷凍干燥機 上海比朗儀器公司；SBS-100 型自動部分收集器、HL-2 型恒流泵 上海青浦滬西儀器廠；UV-1800 型紫外-可見光分光光度計、QP2010GC-MS 型氣相色譜-質譜聯用儀 日本島津公司；1260Infinity型高效液相色譜儀、1290Infinity-6530 Q-TOF 型超高效液相色譜-四極桿串聯飛行質譜聯用儀 美國安捷倫科技公司；SpectraMax M4 型多功能酶標儀 美國美谷分子儀器公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 果膠型多糖提取與純化 提取方法參照鄒瑤等的方法稍加改進。將茉莉花渣粉碎，置于60 ℃下烘干。以1:20 為料液比，在60 ℃下用60%乙醇提取2 次，每次2 h，過濾，取濾渣烘干，然后在料液比為1:20，90 ℃下用去離子水提取2 次，每次2 h。過濾，合并濾液，濃縮后用Sevage 法脫除游離蛋白。然后加入乙醇至80%（v/v）在4 ℃低溫下過夜沉淀，取沉淀復溶，用3500 Da 截留量的透析袋處理24 h。最后將透析袋中的溶液濃縮凍干，得到茉莉花渣多糖（JSP）。

將多糖水溶液上樣至DEAE Sepharose FF 層析柱（2.6 cm×80 cm），分別用水、0.2、0.4、0.6 mol/L 乙酸銨洗脫，其中0.4 和0.6 mol/L 乙酸銨洗脫產物分別用Sephacyl S-200HR 層析柱（1.6 cm×100 cm）純化，餾分用自動收集器接收，并經尺寸排阻色譜檢測后合并餾分和冷凍干燥。

1.2.2 多糖結構表征

1.2.2.1 相對重均分子量測定 茉莉花渣多糖的相對重均分子量測定基于Chen 等的方法改進而來，通過尺寸排阻色譜串聯蒸發光散射檢測器（SECELSD）進行測定，其色譜條件為：色譜柱Tosoh TSKgel G5000PW；流動相：50 mmol/L 乙酸銨溶液；流速0.6 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣10 μL。蒸發光散射檢測器條件：霧化室：45 ℃；蒸發室：50℃；氮氣流速：1.8 SLM。茉莉花渣多糖的相對重均分子量可通過葡聚糖標準品校正曲線算得，標準品的重均分子量包括5、12、50、150、270、670 kDa。

1.2.2.2 化學組成測定 茉莉花渣多糖的中性糖含量、糖醛酸含量和總蛋白含量分別通過苯酚-硫酸法、咔唑-硫酸法和考馬斯亮藍法測定，其中D-葡萄糖、D-半乳糖醛酸和牛血清白蛋白分別作為各方法的標準品。

1.2.2.3 單糖組成與部分酸水解產物測定 茉莉花渣多糖的單糖組成采用Wu 等的方法，在三氟乙酸（TFA）作用下完全酸水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生后進高效液相色譜分析。而部分酸水解產物生物分析方法如下：3 mg 多糖樣品在1 mol/L TFA 和100 ℃下水解1 h，除去多余TFA后，在堿性環境和70 ℃下用0.5 mol/L PMP 甲醇溶液衍生30 min，隨后除去剩余的氨與PMP，最后進液-質聯用儀測定。液-質聯用法具體參數為：色譜柱Agilent EclipsePlus RRHP C（1.8 μm,2.1 mm×100 mm），柱溫40 ℃，流速0.3 mL/min，流動相A 為乙腈，B 為20 mmol/L 乙酸銨，梯度洗脫程序：0～30 min 內，A 從5%升至30%，B 從95%降至70%。質譜為Agilent 6530 Q-TOF，在正離子模式下采用AutoMSMS 模式進行二級采集，碰撞能量35 eV。

1.2.2.4 核磁共振波譜測定 參考Wu 等的方法，通過DO 溶解-凍干的方法對JSP-3 與JSP-4 進行氫氘交換，然后取30 mg 樣品溶于0.5 mL DO，用400 MHz 核磁共振波譜儀測定H 和C 核磁譜圖，掃描次數分別為1600 和20000。

1.2.2.5 甲酯化程度測定 JSP-3 和JSP-4 的甲酯化程度依據Klavons 等建立的醇氧化酶方法測定。該方法通過KOH 皂化水解樣品中的甲酯，然后通過醇氧化酶將水解得到的甲醇氧化為甲醛，讓其與2,4-戊二酮縮合得到有色產物3,5-二乙酰基-1,4-二氫-2,6-二甲基吡啶，從而在412 nm 下測定吸光度。

1.2.3 免疫調節作用

1.2.3.1 細胞培養 小鼠巨噬細胞RAW 264.7 于37 ℃，5%二氧化碳下培養，所用的完全培養液由89% DMEM 培養基、10%熱滅活的胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素組成。細胞傳代使用細胞刮刀，傳代比例為1:4，周期為3 d。

1.2.3.2 細胞增殖與中性紅吞噬測定 將巨噬細胞按照1×10個/孔的密度接種至96 孔板上，孵育過夜。隨后用12.5、25、50、100 μg/mL JSP-3 和JSP-4培養巨噬細胞24 h，完全培養基和1.0 μg/mL LPS分別作為陰性對照和陽性對照。

對于細胞增殖測定，在培養24 h 后，每孔加入30 μL 5 mg/mL MTT，孵育4 h 后小心地吸出上清液，加入100 μL DMSO 充分溶解紫色甲臢晶體。通過酶標儀測定其吸光度，檢測波長為490 nm，計算增殖率P，計算公式如下：

式中，A為樣品孔和陽性對照孔的吸光度；A為陰性對照孔的吸光度。

對于中性紅吞噬測定，在培養24 h 后，用PBS洗滌并加入100 μL 0.1%（w/v）中性紅溶液孵育1 h。然后再用PBS 洗滌3 次，加入細胞裂解液（乙醇:乙酸=1:1,v/v）后避光靜置2 h，最后通過酶標儀測定在540 nm 下的吸光度，計算吞噬率 P，計算公式如下：

式中，A為樣品孔和陽性對照孔的吸光度；A為陰性對照孔的吸光度。

1.2.3.3 ROS 產生量測定 按照1×10個/孔的密度將巨噬細胞接種至96 孔板上，孵育過夜。隨后用12.5、25、50、100 μg/mL JSP-3 和JSP-4 培養巨噬細胞24 h，完全培養基和1.0 μg/mL LPS 分別作為陰性對照和陽性對照。然后在避光條件下，將上清液替換為20 μmol/L DCFH-DA，孵育30 min。再用PBS洗滌3 次，加入50 μL 0.25%胰酶消化5 min，并用150 μL PBS 吹打分散細胞。最后使用多功能酶標儀測量相對熒光強度（RFUs），激發波長為485 nm，發射波長為530 nm。

1.2.3.4 NO、TNF-和IL-6 分泌量測定 細胞鋪板條件同1.2.3.3。在藥物處理方面，未經過或經過1 μmol/L TAK-242 和20 μmol/L C29 預處理1 h 后，給予100 μg/mL JSP-3 和JSP-4 刺激24 h。所有處理結束后，取細胞上清液測定濃度，其中NO 濃度采用Greiss 試劑盒測定，而腫瘤壞死因子（TNF-）和白介素6（IL-6）的濃度采用相應的ELISA 試劑盒進行測定。

1.3 數據處理

實驗結果均通過3 次重復實驗計算并表示為平均值±標準偏差，數據均使用通過單因素方差分析（one-way ANOVA）計算統計學顯著性，其中多重比較選擇Dunnett 法。

2 結果與分析

2.1 茉莉花渣多糖的分離純化

經過多步提取、脫除蛋白和透析處理，獲得了茉莉花渣多糖JSP，其得率為10.15%±2.45%。而JSP經過DEAE Sepharose FF 弱陰離子交換層析初步分離，獲得3 種電荷不同的多糖組分，如圖1 所示。而0.4 和0.6 mol/L 乙酸銨洗脫組分經過Sephacyl S-200HR 凝膠層析純化，得到JSP-3 和JSP-4 兩種多糖，相對JSP 的純化得率分別為24.87%和38.99%。

圖1 JSP 在弱陰離子交換層析上的洗脫曲線Fig.1 Elution curve of JSP on weak anion exchange chromatography

2.2 茉莉花渣多糖的結構特征

2.2.1 相對重均分子量與化學組成 JSP-3 和JSP-4 的尺寸排阻色譜圖如圖2 所示，兩種多糖分別在15.044 min 和13.995 min 呈現對稱、窄峰寬的色譜峰，根據葡聚糖標準曲線lg M=10.80t?0.4385（R=0.9945）計算得到的相對重均分子量分別為15.48 kDa和 44.75 kDa，說明具有良好的均一性。而JSP-3 與JSP-4 的中性糖含量、糖醛酸含量和總蛋白含量如表1 所示。可以看到，兩種純化產物的糖醛酸含量較高，分別為51.25%±2.53%和77.43%±3.12%，與中性糖含量加和總值接近100%，同時總蛋白含量較低。上述結果說明，經過多步純化的茉莉花渣多糖JSP-3 和JSP-4 均為均一的酸性多糖。

表1 JSP-3 和JSP-4 的主要化學組成Table 1 Major chemical composition of JSP-3 and JSP-4

圖2 JSP-3 和JSP-4 的尺寸排阻色譜圖（A）和葡聚糖標準曲線（B）Fig.2 SEC-ELSD chromatogram of JSP-3 and JSP-4 (A),and standards curve of dextran (B)

2.2.2 單糖組成與部分酸水解分析 經過峰面積歸一化法計算各單糖摩爾百分占比，兩種酸性多糖的單糖組成分析結果表2 所示。JSP-3 和JSP-4 的單糖組成相似，主要由半乳糖醛酸、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖構成其中半乳糖醛酸占比分別為46.83%±2.50%與74.31%±0.37%，與前一節的糖醛酸含量相一致，提示兩者可能為果膠型多糖，同時也提示兩種多糖極有可能存在半乳糖醛酸聚糖結構域（HGdomain）。JSP-3 和JSP-4 還存在部分鼠李糖殘基，其占比分別為13.86%±1.14%和5.56%±0.30%，提示可能存在鼠李糖半乳糖醛酸聚糖結構域（RG domain），這兩種結構域往往構成果膠型多糖的主鏈結構。

表2 JSP-3 和JSP-4 的單糖組成摩爾比和結構域占比Table 2 Monosaccharide molecular ratio and structural domain ratio of JSP-3 and JSP-4

為了進一步驗證，將兩種多糖置于相對更溫和條件下進行酸水解，并在衍生化后進液-質聯用儀分析，分析結果如表3 所示。從數據中可推斷出聚合度為1～6 的衍生化寡糖信號,其中既有半乳糖醛酸寡糖信號，也有以鼠李糖和半乳糖醛酸為重復單元的寡糖信號。同系列寡糖的準分子離子質量數差值均符合其結構上的單糖殘基質量數，例如，2PMP-（GalA）與2PMP-（GalA）的質量數差值為176.0328，符合半乳糖醛酸殘基的中性質量數；2PMP-Rha-GalA 與2PMP-（Rha-GalA）的質量數差值為322.0429，符合鼠李糖殘基和半乳糖醛酸殘基的中性質量數之和。這些寡糖質譜信號證實了這兩種多糖中的I 型鼠李糖半乳糖醛酸聚糖結構域（RG-I domain）和半乳糖醛酸聚糖結構域（HG domain），而這正是果膠型多糖的重要特征。

表3 部分酸水解后的JSP-3 和JSP-4 的LC-MS 解析結果Table 3 The LC-MS identification results of partial acid hydrolyzed JSP-3 and JSP-4

因此，JSP-3 與JSP-4 兼具有一型鼠李糖半乳糖醛酸聚糖結構域和半乳糖醛酸聚糖結構域，而在比例上有所不同，JSP-3 具有更高的RG-I 比例（61.12%±3.37%），JSP-4 具有更高的HG 比例（68.64%±0.67%）。綜上所述，JSP-3 和JSP-4 是兩種具有差異性主鏈結構域的果膠型多糖。

2.2.3 核磁共振波譜 通過C 和H 核磁共振掃描，JSP-3 和JSP-4 的結構得到了初步鑒定。如圖3 所示，兩者的一維核磁譜圖比較相似，說明兩種多糖的糖殘基與連接方法比較相似。在C NMR 譜圖中，173.91 和174.21 可分別歸屬于JSP-3 和JSP-4未酯化的半乳糖醛酸殘基的C-6；而171.11 和171.03 則分別歸屬于酯化的半乳糖醛酸殘基的C-6。99～101 之間的高強度異頭碳區信號可歸屬于酯化與未酯化半乳糖醛酸殘基的C-1，以及鼠李糖殘基的C-1。52.77 和54.09 可分別歸屬于JSP-3 和JSP-4 的甲酯化半乳糖醛酸殘基上的甲基碳。而在高場區，僅有JSP-3 的C NMR 譜圖存在16.70 信號，可歸屬于鼠李糖殘基的C-6。

圖3 JSP-3 和JSP-4 的核磁共振氫譜（A,C）和核磁共振碳譜（B,D）Fig.3 1H NMR spectra of JSP-3(A) and JSP-4(C) and 13C NMR spectra of JSP-3(B) and JSP-4(D)

H NMR 譜中出現的信號峰寬且重疊嚴重，對于峰歸屬有較強干擾。一般而言，在異頭氫區域，構型的異頭氫信號通常大于5.0，而構型的異頭氫信號則通常小于5.0。在JSP-3 和JSP-4 的H NMR譜圖中，5.08 和5.07 可歸屬于型半乳糖醛酸殘基的異頭氫，而3.80 和3.81 的尖峰則可歸屬于甲酯基上的氫。另外，1.26 和1.27可歸屬于鼠李糖殘基的H-6。

綜合來看，H 和C 核磁共振譜圖能夠較好地證實兩種果膠型多糖里具有特殊化學位移值的糖殘基，如半乳糖醛酸殘基與鼠李糖殘基。而果膠常常伴隨著不同水平的甲酯化，利用核磁共振譜也可以較好地確認，但甲酯化程度仍需通過其他方法進一步研究。

2.2.4 甲酯化程度 在核磁共振譜圖中，JSP-3 和JSP-4 存在部分半乳糖醛酸殘基被甲酯化的信號，因此，醇氧化酶方法被用于甲酯化程度的分析。結果為：JSP-3 的甲酯化程度為80.90%±4.03%，JSP-4 的甲酯化程度為50.03%±3.71%，均大于50%，可歸屬于高酯果膠型多糖。

2.3 茉莉花渣多糖的免疫調節作用

2.3.1 對小鼠巨噬細胞增殖率與吞噬作用的影響如圖4A 所示，相比于對照組（Control），兩種果膠型多糖JSP-3 在12.5、25、50 μg/mL 和JSP-4 在12.5 μg/mL 下對小鼠巨噬細胞的增殖率無顯著影響（>0.05），而在其余濃度下的細胞增殖率顯著性提高（<0.05），說明在12.5～100 μg/mL 這一范圍內兩種多糖無明顯細胞毒性，可以用于后續實驗。

對于病原體等外來物，吞噬作用是巨噬細胞的主要免疫反應之一，巨噬細胞吞噬能力的增強對于提高先天免疫十分重要。經過12.5～100 μg/mL的JSP-3 和JSP-4 處理后，RAW 264.7 巨噬細胞的吞噬能力通過中性紅吞噬實驗來測定。如圖4B 所示，與對照組相比，JSP-3（25～100 μg/mL）和JSP-4（12.5～100 μg/mL）的吞噬率均具有統計學顯著性差異（<0.05），隨給藥濃度的增加而提高，且呈劑量依賴性。JSP-3 和JSP-4 都在100 μg/mL 時達到其最大吞噬率，分別為132.0%±4.0%和148.5%±8.9%，接近于LPS 組的133.2%±8.3%。

圖4 JSP-3 和JSP-4 對RAW 264.7 的細胞增殖率（A）和吞噬作用（B）的影響Fig.4 Effects of JSP-3 and JSP-4 on RAW 264.7 cell viability(A) and phagocytos(B)

2.3.2 對小鼠巨噬細胞ROS、NO、TNF-和IL-6 分泌量的影響 2’,7’-二氯二氫熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）被用于檢測巨噬細胞內的活性氧（ROS），其在進入細胞后迅速地被細胞酯酶水解，然后與活性氧物種反應后生成強熒光物質2’,7’-二氯熒光素（DCF）。如圖5（A）所示，經過JSP-3 與JSP-4 的處理和DCFHDA 探針孵育后，巨噬細胞的相對熒光強度（RFUs）顯著上升（<0.05），呈劑量依賴性，其最大值分別為對照組的1.43 倍和1.58 倍。而與LPS 組相比，JSP-3 和JSP-4 實驗組的相對熒光強度（RFUs）明顯偏低。當巨噬細胞受到多糖刺激時，將產生活性氧活化巨噬細胞，影響MAPK 和NF-B 信號通路，從而調控多種促炎細胞因子的分泌來參與免疫反應。然而，過量的活性氧將加劇細胞氧化損傷，進而發展至各類炎癥。因此，相較于LPS，兩種果膠型多糖JSP-3 和JSP-4 可能是更安全的免疫調節劑。

圖5 JSP-3 和JSP-4 對RAW 264.7 的ROS 產生量（A）、NO 分泌量（B）、TNF-α 分泌量（C）和IL-6 分泌量（D）的影響Fig.5 Effects of JSP-3 and JSP-4 on ROS production（A）,NO（B）,TNF-α（C）and IL-6（D）secretions of RAW 264.7 macrophages

在受到外界刺激后，巨噬細胞將分泌多種炎性細胞因子和炎性介質，如NO、IFN-、TNF-、IL-1和IL-6 等參與免疫反應并起到重要作用。如圖5（B）～（D），經過12.5、25、50、100 μg/mL JSP-3 和JSP-4 的刺激后，巨噬細胞的NO、TNF-和IL-6 分泌量得到測定。與對照相比，25、50 和100 μg/mL JSP-3 顯著刺激了巨噬細胞的NO 和TNF-分泌量，呈現劑量依賴性，而50 和100 μg/mL JSP-3 顯著刺激了IL-6 分泌量（<0.05）。對于JSP-4，其濃度在12.5、25、50 和100 μg/mL 時顯著增加了NO 和TNF-分泌量（<0.05）；而25、50 和100 μg/mL JSP-4 顯著增加了IL-6 分泌量，并呈劑量依賴性。而在同一濃度下對比，JSP-4 比JSP-3 能夠刺激巨噬細胞分泌更多的NO、TNF-和IL-6，JSP-4 的免疫調節作用強于JSP-3。

相比于JSP-3，JSP-4 能夠在相同濃度下刺激巨噬細胞產生相近或更多的炎性細胞因子和介質，并且在最大給藥濃度的作用下達到與LPS 陽性對照組相似的炎性介質和細胞因子水平，說明JSP-4 具有更強的免疫調節作用。多項相關研究表明，果膠型多糖具有較強的免疫調節作用，并且其能力會因其理化性質與結構特征而不同。例如，Wu 等從苦水玫瑰花渣中分離得到兩種組成相近但相對分子量不同的（56.8 kDa 和23.9 kDa）果膠型多糖，其中相對重均分子量更高的多糖能夠讓小鼠巨噬細胞具有更高的吞噬率和細胞因子或炎性介質的分泌量。而對于免疫調節相關炎性反應，Popov 等、Huang 等和Zhang 等認為由1,4 連接的半乳糖醛酸殘基組成的半乳糖醛酸聚糖結構域十分重要，若通過酶解消除該結構域后，其炎性反應將消失。在前文結構解析中，發現JSP-4 比JSP-3 具有更高的相對重均分子量；并且 JSP-3 具有更高的RG-I 結構域占比，以及JSP-4 具有更高的HG 結構域占比。因此，JSP-4 可能因其更高的相對重均分子量和半乳糖糖醛酸聚糖（HG）結構域占比而具有更強的免疫調節作用。

2.3.3 多糖相關細胞質膜受體 巨噬細胞利用多種模式識別受體（PRR）來識別各種外源或內源性物質和啟動信號通路，從而激發其免疫反應，其中Toll 樣受體（TLR）是一類重要的巨噬細胞的模式識別受體，可單獨或同時分布于細胞質膜、細胞內體上，而細胞質膜上的Toll 樣受體常被視為多糖刺激巨噬細胞的潛在受體。為了探究JSP-3 和JSP-4的作用位點，TAK-242（TLR4 抑制劑）和C29（TLR2抑制劑）被用于巨噬細胞預處理步驟中，通過分析抑制劑預處理對多糖刺激巨噬細胞分泌NO、TNF-和IL-6 的影響來推導可能的多糖作用受體。如圖6所示，未加抑制劑的各組分泌量相對于陰性對照組極顯著性上升（<0.01），與前文一致。經過1 μmol/L TAK-242 預處理1 h 后，與未加抑制劑的各組相比，LPS 陽性對照組和JSP-3、JSP-4 實驗組的NO、TNF-和IL-6 分泌量極顯著性下降（<0.01），而20 μmol/L C29 的預處理則不會影響NO、TNF-和IL-6 分泌水平。上述結果提示TLR4 可能為JSP-3 和JSP-4 的作用受體。

圖6 JSP-3 和JSP-4 對TAK-242 和C29 預處理后的RAW 264.7 的NO 分泌量（A）、TNF-α 分泌量（B）和IL-6分泌量（C）的影響Fig.6 Effects of JSP-3 and JSP-4 on NO(A),TNF-α(B) and IL-6(C) secretion pretreated by TAK-242 and C29

3 結論

經過DEAE Sepharose FF 陰離子交換層析和Sephacyl S-200HR 凝膠層析兩步純化，從茉莉花渣中得到兩種電荷與分子量均一的多糖JSP-3 與JSP-4。經尺寸排阻色譜、單糖組成分析、部分酸水解液-質聯用分析和核磁共振波譜分析，兩種多糖的相對重均分子量分別為15.48 kDa 和 44.75 kDa，主要由半乳糖醛酸、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖構成，可歸屬于果膠型多糖，其中JSP-3 具有更高的RG-I 結構域占比（61.12%±3.37%），而JSP-4 則具有更高的HG結構域占比（68.64%±0.67%）。JSP-3 和JSP-4 均在給定濃度下無明顯細胞毒性，分別在25～100 μg/mL和12.5～100 μg/mL 的濃度范圍內顯著性增加小鼠巨噬細胞RAW264.7 的吞噬率（<0.05），并且顯著增加其炎性介質ROS 和NO 的產生量以及炎性細胞因子TNF-和IL-6 的分泌量（<0.05），說明兩種多糖具有免疫調節作用。經過TLR4 受體抑制劑的預處理，小鼠巨噬細胞對兩種多糖的刺激響應下降，即NO、TNF和IL-6 分泌量顯著下降（<0.05），提示多糖作用受體可能為TLR4。相比于JSP-3，JSP-4 展現出更強的免疫調節作用，這可能與其更高的分子量和更高的HG 結構域占比有關。上述研究成果表明，源自花茶生產中的茉莉花廢棄物可能為醫療與食品行業的免疫調節劑提供了一種有希望的新來源，而茉莉果膠型多糖JSP-3 和JSP-4 的構-效關系和活性機制還將在未來進一步闡明。