CT灌注成像參數(shù)與肺腺癌組織中SIX2、MVD的關(guān)系

曾海燕

肺腫物的術(shù)前診斷主要依靠CT，而CT灌注成像對(duì)明確病變性質(zhì)有重要價(jià)值[1]。CT灌注參數(shù)中血流量（BF）、血容量（BV）和強(qiáng)化峰值（PH）是重要指標(biāo)，近年研究顯示其與腫瘤間質(zhì)微血管密度可能相關(guān)[2]。同源異型蛋白SIX2（SIX2）是近年關(guān)注的與腫瘤形成和腫瘤間質(zhì)微血管生成相關(guān)的因子[3]。CD31是臨床標(biāo)記腫瘤間質(zhì)血管新生的重要指標(biāo)，能客觀評(píng)估間質(zhì)的微血管密度（MVD）[4]。本研究基于肺腺癌進(jìn)行觀察，應(yīng)用CT灌注成像技術(shù)，探討其相關(guān)參數(shù)BF、BV和PH與腫瘤組織中SIX2和MVD的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月-2022年1月松滋市人民醫(yī)院確診為肺腺癌并行手術(shù)根治的79例患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前均行CT灌注成像掃描；檢查后1個(gè)月內(nèi)行腫物切除術(shù)，術(shù)后均行病理學(xué)檢查，且符合WHO中肺腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)兩名病理主治醫(yī)師復(fù)閱切片后證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：呼吸系統(tǒng)先天畸形；雙原發(fā)癌或多原發(fā)癌；合并較為嚴(yán)重的內(nèi)科系統(tǒng)疾病。其中男33例，女46例；年齡41～85歲，平均（59.8±6.2）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 CT掃描方法 應(yīng)用本院飛利浦CT進(jìn)行評(píng)估。患者取仰臥位，掃描范圍為肺尖至上腹部，掃描時(shí)間共為 30 s，層厚 3 mm，層距 3 mm，行標(biāo)準(zhǔn)的重建。注入碘海醇（3.5 ml/s）50 ml，延遲時(shí)間 7 s。分析灌注成像參數(shù)，距結(jié)節(jié)周邊3 mm內(nèi)繪制ROI，分析灌注相關(guān)參數(shù)，記錄BF、BV和PH。

1.2.2 SIX2和MVD檢測(cè) 基于術(shù)后肺腺癌的石蠟包埋組織檢測(cè)，應(yīng)用免疫組化二步法完成。SIX2和CD31試劑均購(gòu)自上海碧云天生物公司，均為濃縮液。以預(yù)試驗(yàn)中觀察到的最理想顯色濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)（SIX2為1∶150，CD31為1∶200），DAB顯色，嚴(yán)格按說明書操作，設(shè)陽性對(duì)照，做好質(zhì)控。SIX2的陽性部位是腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿，以染成黃色或棕黃色為陽性，先在100倍鏡下選擇3個(gè)染色密集的上皮細(xì)胞分布區(qū)，然后在200倍鏡下觀察，計(jì)算陽性率。CD31以血管內(nèi)皮的細(xì)胞漿和細(xì)胞膜染成黃色或棕黃色為陽性，以連續(xù)細(xì)胞簇或分支狀連續(xù)內(nèi)皮細(xì)胞判定為微血管，共選擇3個(gè)區(qū)域（200倍）進(jìn)行MVD的計(jì)數(shù)，取平均值進(jìn)行分析。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同病變類型（原位腺癌、微浸潤(rùn)性腺癌、浸潤(rùn)性腺癌）及浸潤(rùn)性腺癌不同病理情況（有無胸膜累犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度）患者BF、BV和PH，SIX2陽性率及MVD。分析浸潤(rùn)性腺癌BF、BV和PH與MVD的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 不同病變類型患者BF、BV和PH比較

原位腺癌、微浸潤(rùn)性腺癌和浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH值有增高趨勢(shì)，即浸潤(rùn)性腺癌中BF、BV和PH的值最高（P＜0.05），見表1。

表1 不同病變類型患者BF、BV和PH比較（±s）

表1 不同病變類型患者BF、BV和PH比較（±s）

*與原位腺癌比較，P＜0.05；#與微浸潤(rùn)性腺癌比較，P＜0.05。

病變類型 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU）原位腺癌（n=21） 84.87±13.04 8.10±1.70 297.45±27.51微浸潤(rùn)性腺癌（n=15） 96.52±11.17* 9.13±2.32* 324.43±17.30*浸潤(rùn)性腺癌（n=43） 132.26±18.69*# 13.36±2.21*# 352.15±43.14*#F值 70.26 57.17 16.91 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 不同病變類型患者SIX2陽性率及MVD比較

原位腺癌、微浸潤(rùn)性腺癌和浸潤(rùn)性腺癌患者SIX2的陽性率、MVD值有增高趨勢(shì)，即浸潤(rùn)性腺癌中SIX2的陽性率、MVD值最高（P＜0.05），見表2。

表2 不同病變類型患者SIX2陽性率及MVD比較

2.3 不同病理情況浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肺浸潤(rùn)性腺癌患者BF、PH和MVD均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，有胸膜累犯肺浸潤(rùn)性腺癌患者M(jìn)VD明顯高于無胸膜累犯患者（P＜0.05），見表3、表4、表5。

表3 不同胸腺累犯情況浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

表3 不同胸腺累犯情況浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

胸腺累犯情況 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU） MVD（個(gè)）無胸膜累犯（n=24） 131.80±16.55 13.23±2.25 350.87±19.13 23.95±3.36有胸膜累犯（n=19） 136.65±13.35 13.56±2.34 359.45±29.25 31.99±3.02 t值 1.04 0.47 1.16 8.14 P值 0.305 0.641 0.056 ＜0.001

表4 不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

表4 不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU） MVD（個(gè)）無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（n=32） 126.53±16.25 13.06±2.52 340.32±19.04 24.26±4.45有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（n=11） 151.56±33.32 14.15±3.32 383.28±13.42 33.30±5.90 t值 3.23 1.15 6.89 5.34 P值 0.002 0.258 ＜0.001 ＜0.001

表5 不同分化情況浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

表5 不同分化情況浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV和PH、MVD比較（±s）

分化情況 BF[ml/（min·100 g）] BV（ml/100 g） PH（HU） MVD（個(gè)）高-中分化（n=25） 129.12±23.82 13.19±3.08 349.96±33.35 27.06±4.47低分化（n=18） 136.12±23.03 14.24±3.11 357.55±32.35 28.52±4.49 t值 0.96 1.10 0.75 1.06 P值 0.341 0.279 0.460 0.297

2.4 浸潤(rùn)性腺癌不同病理情況患者SIX2陽性率比較

有胸膜累犯肺浸潤(rùn)性腺癌患者SIX2陽性率明顯高于無胸膜累犯患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 6。

表6 不同病理情況浸潤(rùn)性腺癌患者SIX2陽性率比較[例（%）]

2.5 浸潤(rùn)性腺癌BF、BV、PH和MVD值的相關(guān)性

在肺浸潤(rùn)性腺癌中，Pearson相關(guān)性分析顯示PH和MVD值具有正相關(guān)性（r=0.461，P=0.034）。其他各指標(biāo)間未見相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討論

肺CT灌注成像能在術(shù)前反映腫瘤間質(zhì)的血管形成情況，能較好地觀察局部腫瘤組織的血液灌注狀態(tài)，是無創(chuàng)性操作，具有可重復(fù)性的特征[5]。其參數(shù)中以BF和BV更客觀，對(duì)術(shù)前評(píng)價(jià)腫瘤的病理特征有一定價(jià)值[6-7]。肺腺癌在形成和進(jìn)展過程中伴隨著間質(zhì)血管的增生，為富于血管的腫瘤，這不僅為腫瘤的生長(zhǎng)提供支持結(jié)構(gòu)和營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)，也為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了直接途徑[8-9]。血管生成的研究中離不開血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），在VEGF大量分泌后，可以引起間質(zhì)中CD31陽性的血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂繁殖，細(xì)胞呈枝芽狀生長(zhǎng)，在血流的沖擊下，形成具有功能的血管。因此CD31陽性的細(xì)胞的表達(dá)程度可在一定程度上代表著新生的血管。影響血管生成的因素較多[10-11]。近年學(xué)者對(duì)SIX1、SIX2和SIX6關(guān)注較多，其表達(dá)與組織的發(fā)育和部分幼稚細(xì)胞成熟有關(guān)[12]。機(jī)體中SIX2的表達(dá)較少，尤其在成熟的正常上皮細(xì)胞中罕見表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變后其表達(dá)明顯升高，尤其在高增殖性腫瘤中，SIX2的升高程度更明顯。SIX2高表達(dá)時(shí)能對(duì)多種促癌基因進(jìn)行調(diào)控，如對(duì)CyclinAl、CyclinDl等。也有研究認(rèn)為SIX2能使E-cadherin的表達(dá)異常，調(diào)控細(xì)胞的遷移和黏附[13-14]。SIX2是VEGF的上游因子，活化后通過其受體VEGFR2促進(jìn)間質(zhì)的血管新生[15]。

本研究結(jié)果顯示原位腺癌、微浸潤(rùn)性腺癌和浸潤(rùn)性腺癌患者BF、BV、PH值、SIX2的陽性率、MVD值有增高趨勢(shì)，即浸潤(rùn)性腺癌中BF、BV、PH、SIX2的陽性率、MVD值最高（P＜0.05），提示BF、BV、PH、MVD值和SIX2陽性率在原位腺癌、微浸潤(rùn)性腺癌和浸潤(rùn)性腺癌中有逐漸增高趨勢(shì)，因此臨床術(shù)前應(yīng)用CT灌注技術(shù)檢測(cè)BF、BV、PH的值可能有更重要的意義。結(jié)果顯示肺浸潤(rùn)性腺癌中BF、PH、MVD在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的值明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P＜0.05），提示BF與PH、MVD可能與腫瘤細(xì)胞淋巴結(jié)播散有關(guān)。結(jié)果顯示有胸膜累犯肺浸潤(rùn)性腺癌患者SIX2陽性率明顯高于無胸膜累犯患者（P＜0.05）。提示SIX2高表達(dá)可能對(duì)促進(jìn)病變直接蔓延或向周圍組織和器官侵襲有一定意義。結(jié)果顯示有胸膜累犯肺浸潤(rùn)性腺癌患者M(jìn)VD明顯高于無胸膜累犯患者（P＜0.05）。提示組織中MVD值可在一定程度上能判斷是否有胸膜累犯及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Pearson相關(guān)性分析顯示在肺浸潤(rùn)性腺癌中，PH和MVD值具有正相關(guān)性（r=0.461，P=0.034）。提示術(shù)前積極檢測(cè)PH可能在一定程度上提示微血管分布程度。肺癌的形成與上皮細(xì)胞的不典型增生相關(guān)，腫瘤對(duì)間質(zhì)侵襲形成浸潤(rùn)性腫瘤，呈蟹足樣向周圍組織浸潤(rùn)，對(duì)局部組織形成明顯破壞，易于侵犯胸膜和心包等[16-17]。SIX2的作用具有多向性，主要作為上游基因，調(diào)控VEGF、MMP-9等相關(guān)因子，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[18-19]。本研究將術(shù)前的BF、BV、PH的結(jié)果與術(shù)后組織中MVD聯(lián)系在一起，發(fā)現(xiàn)的術(shù)前指標(biāo)與術(shù)后組織相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系可以為術(shù)前綜合評(píng)估提供幫助。

綜上所述，CT灌注成像參數(shù)中BF、BV和PH與肺腺癌的病變類型相關(guān)，BF、PH均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，PH與腫瘤組織中MVD具有相關(guān)性，這為術(shù)前判斷腫瘤的生物學(xué)行為提供了參考指標(biāo)。腫瘤組織中SIX2的表達(dá)升高可能對(duì)間質(zhì)的血管生成有一定促進(jìn)作用。