低劑量螺旋CT聯(lián)合血漿miR-200b、miR-200c檢查鑒別診斷良惡性肺結(jié)節(jié)的價(jià)值

近年來肺癌的發(fā)病率和死亡率居全部惡性腫瘤之首，且發(fā)病率有逐年升高的趨勢(shì)

。由于肺癌早期無明顯特異性癥狀，一旦出現(xiàn)臨床癥狀來醫(yī)院就診時(shí)多處于中晚期，從而失去了最佳手術(shù)治療機(jī)會(huì)，據(jù)統(tǒng)計(jì)中晚期肺癌5年存活率不足20%，而接受手術(shù)切除的I期肺癌患者的生存率則遠(yuǎn)高于70%

，因此肺癌早期篩查對(duì)其預(yù)后意義重大。目前低劑量螺旋CT(low-dose CT，LDCT)是肺癌影像學(xué)常用的篩查手段，它不僅可有效發(fā)現(xiàn)肺部早期病變，且與胸部X 線檢查相比因照射劑量較少而得到廣泛應(yīng)用

。美國國家肺癌篩查試驗(yàn)(National Lung Screening Trial，NLST)

證明采用低劑量螺旋CT進(jìn)行肺癌篩查可大大降低肺癌病死率。但單一通過LDCT篩查肺癌還具有一定局限性，存在一定誤診漏診。近年來隨著分子生物學(xué)的深入研究，發(fā)現(xiàn)在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中miRNA作為重要因子參入調(diào)控，其中外周血循環(huán)miRNA由于免于被RNA 酶消化且在外周血中高度穩(wěn)定，其檢測(cè)方法方便，已被視為惡性腫瘤早期篩查新的標(biāo)記物

，是對(duì)LDCT檢查的有效補(bǔ)充。本研究欲對(duì)≥40歲體檢人群首先行LDCT肺結(jié)節(jié)篩查，對(duì)Lung-RADS 4 類肺結(jié)節(jié)患者進(jìn)行血漿miRNA-200b、miRNA-200c 檢測(cè)，探討LDCT、血漿miR-200b、miR-200c聯(lián)合檢查在良惡性肺結(jié)節(jié)鑒別診斷中價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2020年12月在江西省安福縣中醫(yī)院體檢中心經(jīng)LDCT篩查的113例Lung-RADS 4類肺結(jié)節(jié)為研究對(duì)象，后經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)癌性結(jié)節(jié)78例(肺癌組)、良性結(jié)節(jié)35例(良性組)。肺癌組：男46例、女32例，年齡41～82歲、平均年齡(55.26±12.34)歲；良性組：男20例、女15例，年齡40～81歲、平均年齡(54.89±12.78)歲。肺癌組和良性組人群性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性(

＞0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意(批準(zhǔn)文號(hào)：Afzyy20160053)，與研究對(duì)象簽署知情同意書。

現(xiàn)在，他到了一個(gè)陌生的地帶，馴鹿愈來愈多，狼也多起來了。荒原里常常傳出狼嗥的聲音，有一次，他還瞧見了三只狼在他前面的路上穿過。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)節(jié)直徑≤30 mm，年齡≥40歲，自愿參入本研究者；可疑結(jié)節(jié)病例均有病理學(xué)診斷及完整的LDCT、血漿miR-200b、miR-200c檢查資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有胸部及其他部位惡性腫瘤者；依從性欠佳、不能配合本研究者。

1.3 方法

1.3.2 血漿miR-200b、miR-200c檢測(cè) 主要試劑與儀器：Trizol RNA 提取試劑購自日本Takara 公司，MystiCq miRNA聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒、mirPremier miRNA分離萃取試劑盒均購自美國Sigma公司，由上海生物工程公司提供聚合酶鏈反應(yīng)引物，由美國Bio-Rad公司提供PCR 儀器。

1.3.1 LDCT 檢查 儀器為西門子SIEMENS SOMATOM Definition flash螺旋CT機(jī)，檢查時(shí)讓研究對(duì)象保持仰臥姿勢(shì)，平靜呼吸下屏氣進(jìn)行平掃，從胸廓入口到肺底依次掃描范圍。掃描圖像數(shù)據(jù)上傳到工作站，由兩名影像學(xué)診斷醫(yī)師對(duì)圖像雙盲法進(jìn)行分析。采用肺- 報(bào)告和數(shù)據(jù)系統(tǒng)(Lung-Reporting and Data System，Lung-RADS)

對(duì)肺結(jié)節(jié)進(jìn)行分類。

2.1 肺癌組和良性組肺結(jié)節(jié)LDCT影像學(xué)征象比較 113例Lung-RADS 4類肺結(jié)節(jié)患者經(jīng)結(jié)節(jié)穿刺或術(shù)后病理組織學(xué)診斷肺惡性結(jié)節(jié)患者78例、良性結(jié)節(jié)患者35例。78例肺惡性結(jié)節(jié)LDCT與病理診斷一致57例(真陽性)、不一致21例(假陰性)；35例良性結(jié)節(jié)LDCT與病理診斷一致30例(真陰性)、不一致5例(假陽性)。影像學(xué)顯示肺惡性結(jié)節(jié)組磨玻璃樣改變、分葉征、毛刺征、胸膜凹陷、血管集束征等發(fā)生率明顯高于良性組(χ

＝34.541、20.378、14.113、11.249、27.371，

＜0.001、＜0.001、＜0.001、0.001、＜0.001)，

＜0.01，見表1。

2.2 肺癌和肺部良性病變患者外周血miR-200b、miR-200c相對(duì)表達(dá)量比較 miR-200b、miR-200c診斷肺癌的ROC曲線下面積(AUC)分別0.698、0.769，最大約登指數(shù)分別為0.526、0.579，診斷肺癌的最佳臨界值分別為1.57、2.07，結(jié)果顯示肺癌組患者血漿miR-200b、miR-200c相對(duì)表達(dá)量明顯低于良性病變組，

＜0.05，見表2。

廣播錄音的產(chǎn)生，一方面選擇較好條件的聲源（播音員或者樂隊(duì)等）；另一方面要通過對(duì)各種細(xì)節(jié)的把握避免錄音過程中出現(xiàn)的問題；最后還要經(jīng)過相關(guān)的技術(shù)操作對(duì)錄音進(jìn)行美化和處理。只有這樣才能得到聲音質(zhì)量優(yōu)良的廣播錄音。希望我們的錄音處理技術(shù)不斷突破，為我們提供更好的錄音體驗(yàn)。

1.4 結(jié)果判定 LDCT、miR-200b、miR-200c檢查與病理診斷符合為真陽性或真陰性，不符合為假陽性或假陰性，聯(lián)合檢查有一項(xiàng)或一項(xiàng)以上陽性即定為陽性，均為陰性定為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料呈非正態(tài)分布，以中位數(shù)表示，兩組間比較采用Mann-Whitney

檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率[

(%)]表示，行χ

檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征(ROC)曲線分析獲取miR-200b、miR-200c診斷肺癌的最佳臨界值。以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，用四格表法統(tǒng)計(jì)計(jì)算LDCT、miR-200b、miR-200c單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷肺癌的價(jià)值。敏感性=真陽性/(真陽性＋假陰性)×100%；特異性＝真陰性/(真陰性＋假陽性)×100%；準(zhǔn)確性＝(真陽性＋真陰性)/(真陽性＋假陰性＋真陰性＋假陽性)×100%；陰性預(yù)測(cè)值＝真陰性/(真陰性＋假陰性)×100%；陽性預(yù)測(cè)值＝真陽性/(真陽性＋假陽性)×100%。

＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

(3)式可以概括為：三階幻方中，第一行的平方和等于第三行的平方和；(4)式可以概括為：三階幻方中，第一列的平方和等于第三列的平方和.

2 結(jié)果

檢測(cè)方法：研究對(duì)象清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血5 mL于EDTA 抗凝管中混勻，轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心15 min分離血漿，用1.5 mL無RNA酶的EP管提取血漿進(jìn)行分裝，置－80 ℃冰箱貯存待檢。

Trizol法提取血清總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。采用定量PCR 儀對(duì)miRNA-200b、miRNA-200c進(jìn)行擴(kuò)增。以U6為內(nèi)參，用2

法計(jì)算不同樣本中miRNA-200b、miRNA-200c 相對(duì)表達(dá)量。

“這一回最開心的，恐怕是積薪那小子，我們機(jī)緣湊巧，解開了媼婦譜，他聽到，恐怕得‘漫卷棋書喜欲狂’，還是喝他的酒好了！”

2.3 LDCT、miR-200b、miR-200c單項(xiàng)及聯(lián)合診斷肺癌的價(jià)值比較 LDCT、miR-200b、miR-200c 及聯(lián)合檢查結(jié)果與病理診斷對(duì)照，見表3。LDCT、miR-200b、miR-200c單項(xiàng)及聯(lián)合篩查肺癌的價(jià)值比較，見表4。

3 討論

近年來對(duì)早期肺癌人群進(jìn)行低劑量螺旋CT篩查得到了廣泛應(yīng)用

。LDCT具有較低的劑量射線，且操作方便，其重建技術(shù)及薄層掃描可清晰顯示橫斷面影像，并進(jìn)行三維重建觀察，可觀察結(jié)節(jié)的形態(tài)及結(jié)構(gòu)等征象，能夠檢測(cè)出更多的肺部結(jié)節(jié)和早期肺癌

。據(jù)報(bào)道

LDCT篩查由于有效發(fā)現(xiàn)肺部早期病變，有利于早期肺癌檢出，可使肺癌死亡率下降20%。本研究結(jié)果顯示LDCT對(duì)Lung-RADS 4 類肺結(jié)節(jié)診斷肺癌敏感性為73.08%、準(zhǔn)確性為76.99%。但LDCT同時(shí)也面臨著假陽性率過高的問題，由于篩檢出的Lung-RADS 4類肺結(jié)節(jié)后經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)不僅有惡性的，還有良性結(jié)節(jié)，因此LDCT診斷早期肺癌存在特異性較低，本研究顯示特異性僅為85.71%。

miRNA 是一類非編碼蛋白的小分子單鏈RNA，在機(jī)體的一系列生理或病理活動(dòng)過程中發(fā)揮著重要作用

。研究表明

miRNA具有調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡及侵襲或轉(zhuǎn)移等生物學(xué)功能，在其過程中具有致癌或抑癌的生物學(xué)特性，其在腫瘤診療中具有潛在的研究價(jià)值。miR-200b、miR-200c 屬 于miRNA-200 家 族 成 員 之一，研究表明miR-200b、miR-200c參與了腫瘤發(fā)生、發(fā)展等過程

。研究發(fā)現(xiàn)

在肺癌細(xì)胞中miR-200b、miR-200c表達(dá)下調(diào)；研究表明

肺癌者外周血miR-200b、miR-200c相對(duì)表達(dá)量與肺部良性對(duì)照組和健康對(duì)照組比較表達(dá)顯著下調(diào)(

＜0.01)，而良性對(duì)照組和健康對(duì)照組外周血miR-200b、miR-200c相對(duì)表達(dá)量比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

＞0.05)，說明miR-200b、miR-200c均是肺癌的抑癌基因。本研究通過對(duì)經(jīng)病理組織學(xué)確診的78例癌性肺結(jié)節(jié)、35 例良性結(jié)節(jié)兩組人群血漿miR-200b、miR-200c相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果顯示miR-200b、miR-200c在惡性組血漿相對(duì)表達(dá)量明顯低于良性組，與上述報(bào)道一致。miR-200b 、miR-200c 診斷惡性肺結(jié)節(jié)的敏感性分別為62.82%、61.54%，因此血漿miR-200b、miR-200c可以作為肺癌早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)，可為LDCT篩查提供重要補(bǔ)充，但敏感性仍不盡如人意。

表1中，LNCPI_SA和LNAPI_SA分別表示季節(jié)調(diào)整后取對(duì)數(shù)的序列，檢測(cè)結(jié)果顯示，LNCPI_SA的ADF值為-4.393472，小于1%水平的臨界值-3.588509，即在1%的置信水平下通過了單位根檢驗(yàn)，因此原序列是平穩(wěn)的；LNAPI_SA的ADF值為-3.077772，小于5%水平的臨界值-2.926622，表明在5%的顯著性水平拒絕存在單位根的原假設(shè)，因此原序列是平穩(wěn)的。

綜上所述， 低劑量螺旋CT 聯(lián)合血漿miR-200b、miR-200c鑒別良惡性肺結(jié)節(jié)，可以做到相互補(bǔ)充、相互印證，敏感性、準(zhǔn)確性明顯提高，分別為93.59%、91.50%，有利于肺癌早期檢出。

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