高齡人群淋巴細胞亞群和細胞因子的檢測分析

彭聰,王亮,肖漓,肖軍,張金花,程鵬,馬偉鳳,王天天,李春暉,湯玉萌

1.河北北方學院研究生學院,張家口 075000；2.中國人民解放軍總醫院第八醫學中心，a 老年醫學科，b 呼吸與危重癥醫學部研究所 北京市器官移植與免疫調節重點實驗室

既往研究[1]表明T淋巴細胞亞群在高齡與衰老過程中的改變最為明顯,T淋巴細胞亞群失調介導細胞免疫能力下降,這是導致高齡人群可能處于流行性疾病高風險的原因之一。增齡與衰老所致的免疫系統失衡是高齡人群的發病率、獲病率及病死率的顯著因素[2]。因此對高齡人群的免疫系統評價及分析對指導高齡人群診療及健康判斷十分重要。本研究對高齡人群淋巴細胞亞群和細胞因子進行檢測并分析,探討高齡人群的機體及免疫衰老情況。

1 材料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2021年12月27日至2022年3月24日于中國人民解放軍第八醫學中心老年科就診的145例患者病歷資料,年齡范圍40～97歲,年齡73.0(59.0,83.0)歲。依據年齡分為高齡組[88.00(85.00,91.00)歲]52例,其中男性32 例,女性20例;老年組[68.0(66.0,74.0)歲]52例,其中男性20例,女性32例;中年組[52.0(48.0,56.0)歲]41例,其中男性20例,女性21例。排除標準:(1)既往存在以骨性損害為特征的骨科疾病;(2)原發性免疫功能障礙性疾病,獲得性免疫功能缺陷性疾病、血液系統疾病、精神障礙疾病、3個月內存在重型感染或異體輸血;(3)肺癌、肝癌等惡性腫瘤及主要臟器功能衰竭及器官移植患者;(4)1年內服用免疫調節制劑及糖皮質激素或其他激素補充治療的患者。本研究已通過中國人民解放軍總醫院第八醫學中心倫理審查委員會審查。

1.2 一般資料收集 包括既往病史(高血壓、糖尿病、冠心病、惡性腫瘤、骨折,急危重癥病史、輸血史、免疫功能缺陷等)、年齡、性別、身高、體重、體重指數(BMI)。

1.3 淋巴細胞亞群分析 將20 μL淋巴細胞亞群檢測試劑(CD3/CD8/CD45/CD4/CD16+56/CD19)加到絕對計數管的底部;采用反向移液法吸取50 μL充分混勻的EDTA抗凝全血,加入到絕對計數管底部;震蕩混勻后室溫避光孵育15 min;每管加入450 μL溶血素(FACS Lysing solution∶蒸餾水=1∶10),充分混勻后,室溫避光孵育15min;利用FACS Canto Plus流式細胞儀(美國BD)獲取和分析淋巴細胞亞群百分比和絕對數。

1.4 細胞因子分析 向樣品管中加入25 μL實驗緩沖液;向樣品管中加入25 μL血漿;向樣品管中加入25 μL檢測抗體;向樣品管中加入25 μL捕獲微球抗體;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育2 h(400～500 r/min);向樣品管中加入25 μL SA-PE;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育0.5 h(400～500 r/min);向樣品管中加入500 μL洗滌緩沖液,渦旋數秒,300～500g離心5 min,緩慢傾倒出液體,倒扣于吸水紙上;根據FACS Canto Plus流式細胞儀(美國BD)需求,向每管中加入120 μL洗滌緩沖液;渦旋10 s將微球重懸后立即上機檢測,檢測后數據導入LEGEND plex v8.0進行分析獲取。

2 結果

2.1 3組人群一般情況比較 3組人群性別構成比、身高、體重、BMI,差異無統計學意義(P>0.05),見表1。

表1 3組人群的一般情況比較

2.2 3組人群淋巴細胞亞群和細胞因子比較 使用單因素多元方差分析比較3組人群淋巴細胞亞群和細胞因子,結果表示3組間差異有統計學意義(P<0.05),中年組與老年組之間除外(組間差異P=0.051)。其中高齡組中淋巴細胞亞群除自然殺傷細胞(NK細胞)外,均低于老年組及中年組,且隨年齡增加進行性下降。而細胞因子中CD4/CD8、白細胞介素(IL)-5、IL-6均據年齡進行性高于其余2組。見表2。

表2 3組人群淋巴細胞亞群和細胞因子的比較[M(P25,P75)]

2.3 高齡組人群淋巴細胞亞群和細胞因子相關性分析 使用Pearson相關比較淋巴細胞亞群和細胞因子各變量之間相關性,結果顯示CD4/CD8與細胞毒/抑制性T細胞百分比、NK細胞與總T細胞百分比、CD4/CD8與輔助性/誘導性T細胞百分比、IL-6與IL-10均具有相關性。見圖1。

圖1 高齡組淋巴細胞和細胞因子相關性分析

3 討論

本研究顯示,隨著年齡增加,尤其在高齡人群中,除NK細胞外,其余各淋巴細胞亞群數及百分比呈現出了進行性下降趨勢,這與國外相關研究[3]結果不一致,出現這一情況的機制暫不明確。但IL-6據年齡進行性增加的結果與既往研究保持一致,IL-6具有調節免疫應答、急性期反應及造血功能,在機體抗感染免疫反應中起重要作用,IL-6表達失調可引起許多疾病,故IL-6在較多疾病中都有預測與評價能力,而本研究觀察群體IL-6均隨年齡進行性增加,提示高齡人群可能存在多種免疫系統高危因素。本研究還觀察到高齡人群CD4/CD8、IL-5均高于其余2組,CD4/CD8比值改變與機體免疫能力密切相關,比值降低提示免疫功能低下,該個體多易出現感染或合并多重感染情況,而比值增加常提示存在免疫亢進或排異反應存在,故本文CD4/CD8增加提示高齡人群存在明確地免疫系統調節能力下降,并明顯伴隨免疫亢進,既往研究表明CD4/CD8比值異常增加能抑制CD8+T細胞的活化、增殖及分泌,且抑制效果與CD4/CD8比值顯著相關[4],CD8+T細胞在免疫系統中具有重要地位,CD8+T細胞功能及數量的改變影響了其消除細胞內感染和惡性細胞的關鍵作用,降低其提供的保護性免疫。而IL-5的升高則提示高齡人群可能存在嗜酸/嗜堿性粒細胞的功能增強及數量上升,這也就解釋了高齡人群中過敏性疾病與呼吸道疾病發生率高于普通人群的部分原因[5-8]。并且在本次研究中還完善了淋巴細胞亞群及細胞因子的相關性分析,提示CD4/CD8與輔助性/誘導性T細胞、CD4/CD8與細胞毒/抑制性T細胞百分比、NK細胞與總T細胞百分比、IL-6與IL-10均具有相關性,其相關機制既往也具有相應報道。

綜上所述,高齡所致免疫衰老造成了免疫系統各組分的功能及成分紊亂,進一步影響了免疫能力,據文獻報道免疫系統的衰老在驅動全身衰老方面也具有因果關系,因此免疫調節也是延長健康時間、改善衰老的治療靶點[9]。